汉中麻鸭肠道定殖菌的生活状态和分布

王进+陈文强+邓百万+彭浩+解修超+孔亚男+刘兆迪+赵娜娜

摘要：采用梯度稀释和组织培养方法，分别用LB、玫瑰红钠及MRS固体培养基对汉中麻鸭肠道定殖菌进行培养并计数，结果表明：汉中麻鸭肠道中定殖有芽孢菌、酵母菌和乳酸菌；芽孢菌在汉中麻鸭小肠后段达到最大值，菌体数达6.3×104 CFU/mL；酵母菌在盲肠达到最大值，菌体数达7.6×104 CFU/mL；乳酸菌在十二指肠后段达到最大值，菌体数达8.6×104 CFU/mL。

关键词：麻鸭；肠道；定殖菌；芽孢菌；酵母菌；乳酸菌；生活状态；分布

中图分类号： S834+.835文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）02-0176-02

收稿日期：2013-06-17

作者简介：王进（1988—），男，陕西礼泉人，硕士，从事微生物资源开发利用研究。

通信作者：陈文强（1956—），男，陕西洋县人，教授，硕士生导师，主要从事微生物资源保护与利用研究。Email：wenqiangc@126.com。麻鸭为观赏及肉用兼用型鸭种，在全国各地广泛分布，绍兴麻鸭、高邮麻鸭、吴川麻鸭、微山麻鸭、汉中麻鸭等都是我国麻鸭的优良品种。麻鸭体型较小，羽毛紧凑；毛色麻褐色居多，体躯及背部土黄色并有黑褐色斑点[1]；头清秀，喙呈橙黄色，胫、蹼多为橘红色，少数为乌色；初生重为38.7 g，300日龄体重公鸭为1 172 g、母鸭为1 157 g，成年公鸭体重为1 kg、母鸭为1.4 kg；160～180日龄开始产蛋，年产蛋220枚，平均蛋重为68 g/枚，蛋壳颜色以白色为主，还有青色。

芽孢菌（Bacilus）是一种广泛分布于土壤、水、空气及动物肠道等处的细菌，对外界有害因子抵抗力强，作为益生菌中的一种，它能分泌高活性胞外产物，其中包含蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等水解酶和一些分解饲料中非淀粉多糖的酶类[2]。酵母菌（Saccharomyces）仅零星存在于动物肠道内，是动物肠道内寄生的一类正常有益菌。酵母细胞富含蛋白质、核酸、维生素和多种酶，具有增加饲料适口性、促进动物对饲料消化吸收能力等功能，并可提高动物对磷的利用率[3]。乳酸菌是动物微生态制剂中研究报道最多、可以分解糖类产生乳酸的革兰氏阳性菌，厌氧或兼性厌氧生长。乳酸菌在pH值为3.0～4.5时可生长，对胃中酸性环境有一定耐受性[4]。研究表明，乳酸菌能够调节机体胃肠道正常菌群，保持微生态平衡，提高食物消化率和生物价，降低血清胆固醇，控制内毒素，抑制肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生，制造营养物质，刺激组织发育，从而对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、药物效应、毒性反应、免疫反应、肿瘤发生、衰老过程和突然的应激反应等产生作用；乳酸菌亦可通过调节肠道pH值，以激活胃蛋白酶，促进胃肠蠕动，减轻涨气和促进肝脏功能[5]。

为了使各类芽孢益生菌剂、酵母制剂及乳酸菌剂在我国畜牧养殖业中得到更好的应用[6-7]，全国不同地区对麻鸭肠道各个部位定殖菌数量和菌体萌发数量进行了检测分析，以推断定殖菌在麻鸭肠道中的萌发和生活状态；但是，陕西汉中麻鸭肠道内芽孢菌、酵母菌及乳酸菌数量及分布尚未见研究报道。为此，以陕西汉中麻鸭为试验材料，通过对其肠道定殖菌生活状态和分布进行研究，为各类益生菌在汉中麻鸭养殖中更好的应用提供理论依据。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验麻鸭购自陕西汉中汉台区丰辉贸易市场。

1.1.2培养基LB培养基：胰蛋白胨10.0 g、酵母提取物 5.0 g、琼脂15.0 g、氯化钠10.0 g、H2O 1 L；玫瑰红钠培养基：蛋白胨5.0 g、琼脂14.0 g、葡萄糖10.0 g、玫瑰红钠0013 3 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、K2HPO4 1.0 g、H2O 1 L；MRS改良固体培养基：蛋白胨10.0 g、琼脂20.0 g、葡萄糖20.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母膏5.0 g、柠檬酸二胺2.0 g、乙酸钠 5.0 g、吐温80 1.0 mL、MgSO4·7H2O 0.58 g、K2HPO4 2.0 g、MnSO4·4H2O 0.25 g、CaCO3 2.0 g、H2O 1 L，pH值6.8。

1.1.3主要仪器与设备ZHWY-210 2C型恒温振荡器，上海智诚分析仪器制造有限公司生产；SW-CJ-1F型超净工作台，苏州安泰空气技术有限公司生产；BJ100M型电子天平，上海精科天美科学仪器有限公司生产；LS-B50L型立式圆形压力蒸气灭菌器，上海医用核子仪器厂生产；LRH-800-GS型人工气候箱，韶关市明天环保仪器有限公司生产；DZKW-S-4型恒温水浴锅，惠州市新旭实业有限公司生产。

1.2试验方法

1.2.1麻鸭肠道的处理将购买的麻鸭空腹处理3 d，宰杀并解剖，取出肠道，用75%乙醇清洗肠道表面，待用。

1.2.2芽孢菌、酵母菌、乳酸菌的数量测定将麻鸭待用肠道分为7段，其中包括十二指肠2段、小肠4段、盲肠1段；无菌手术刀剖开各段肠道，将肠道内容物分别溶于100 mL已灭菌的生理盐水中，搅拌均匀，为待测样品[8]。取待测样品 1.0 mL 分别于2支试管中，其中1支试管样品经75 ℃热处理 20 min，另1支试管样品不经热处理。用生理盐水梯度稀释10、100、1 000倍，各浓度取100 μL涂布于LB培养基、玫瑰红钠培养基、MRS固体培养基上，并做3个平行皿。芽孢菌于 37 ℃ 恒温培养36 h，酵母菌于28 ℃恒温培养48～ 72 h，乳酸菌于 37 ℃ 恒温培养48～72 h，分别统计菌落数和计算菌体总数[9-10]。

1.2.3样品活性菌体数量统计1 mL菌液中活性菌体数量的计算公式为：样品活性菌体数量=（未热处理样品菌落数-热处理样品菌落数）×稀释倍数×10。

2结果与分析endprint

2.1汉中麻鸭不同肠道区段定殖菌活性菌体数量

2.1.1芽孢菌在不同肠道区段活性菌体数量由表1可见，芽孢菌在汉中麻鸭肠道内可以定殖，少数芽孢菌滞留在麻鸭十二指肠处，进入小肠后开始萌发，并进行生长繁殖，在小肠后段达到最大值，菌体数达6.3×104 CFU/mL，而后重新转入休眠体的芽孢状态，完成一个生活周期。小肠后段即盲肠附近是芽孢菌主要生长繁殖和滞留的场所。

2.1.2酵母菌在不同肠道区段活性菌体数量由表2可见，酵母菌在汉中麻鸭肠道内虽可定殖，但菌体数量较少，分布范围较窄，在小肠后段才开始萌发、繁殖；在盲肠处菌体数量达到最大值，为7.6×104 CFU/mL。盲肠附近是酵母菌生长繁殖和滞留的场所。

2.1.3乳酸菌在不同肠道区段活性菌体数量由表3可见，乳酸菌在汉中麻鸭肠道内可以定殖，十二指肠前段即可见乳酸菌菌落；十二指肠后段乳酸菌菌体数达到最大，为 8.6×104 CFU/mL；至小肠中段时乳酸菌落几乎不能检出。十二指肠后段及小肠前段附近是乳酸菌主要生长繁殖和滞留的场所。

2.2汉中麻鸭肠道中定殖菌的分布

以汉中麻鸭肠道中芽孢菌、酵母菌、乳酸菌菌体数量为纵坐标，以活性菌体在不同肠道区段的分布部位为横坐标作图（图1）。芽孢菌耐酸碱，生长最适pH值为6.0左右，能分泌高活性的胞外产物，在胃液中仍保持活性，以孢子状态进入消化道，在小肠内开始萌发，故芽孢菌主要分布和定殖在远离胃端的小肠中、后段。酵母菌多分布在土壤、水和动植物体表面，仅零星分布在动物肠道内，因其富含蛋白质、核酸、维生素和多种酶，具有促进对饲料的消化吸收功能，在汉中麻鸭中虽有酵母菌菌落检出，但分布和定殖在小肠后段和盲肠。乳酸菌生长的最适pH值为4.0左右，在动物肠道内能通过生物拮抗，阻止和抑制致病菌侵入肠道，还可提高食物消化率，因此，在与胃部相连的十二指肠即能检出乳酸菌菌落，乳酸菌主要分布和定殖在十二指肠后段和小肠前段。

3小结与讨论

采用梯度稀释和组织培养方法研究陕西汉中麻鸭肠道中定殖菌的生活状态和分布，研究结果表明，小肠后段芽孢菌数量达最大值6.3×104 CFU/mL，盲肠酵母菌数量达最大值 7.6×104 CFU/mL，十二指肠后段乳酸菌数量达最大值 8.6×104 CFU/mL。

芽孢菌剂、酵母菌剂及乳酸菌剂作为动物益生菌或肠道竞争抑制剂，除了可以改善、调整肠道菌群外，还可抑制有害细菌在肠道内膜的吸附和定殖，饲喂动物日粮中添加一定比例，可明显降低料肉比。

芽孢菌、酵母菌及乳酸菌产生多种消化酶，是提高动物生产性能的一个重要体现，它可以帮助动物消化吸收营养物质，具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时，还具有降解饲料中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等，这些酶能够破坏植物饲料细胞的细胞壁，促使细胞的营养物质释放出来，并能消除饲料中的抗营养因子，减少抗营养因子对动物消化利用的障碍。

参考文献：

[1]辞海编辑委员会. 辞海：生物分册[M]. 上海：上海辞书出版社，1999：524.

[2]姚茹，王智勇，王广军，等. 饲料中添加芽孢杆菌对草鱼生长和水质的影响[J]. 江苏农业科学，2013，41（4）：214-216.

[3]Sekirov I. Gut microbiota in health and disease[J]. Physiological Reviews，2010，90（3）：859-904.

[4]Wong S，Rawls J F. Intestinal microbiota composition in fishes is influenced by host ecology and environment[J]. Molecular Ecology，2012，21（13）：3100-3102.

[5]Tam N K，Uyen N Q，Hong H A，et al. The intestinal life cycle of Bacillus subtilis and close relatives[J]. Journal of Bacteriology，2006，188（7）：2692-2700.

[6]陈琼. 鸡源益生菌的分离、筛选、鉴定与特性研究[D]. 广州：华南理工大学，2004：1-64.

[7]蔡雁，郝勃，喻子牛. 抗动物病原菌芽孢杆菌的筛选、初步鉴定和抗菌活性[J]. 微生物学杂志，2005，25（5）：19-22.

[8]方祥，胡文锋，张辉华，等. 乳酸菌的分离、鉴定及其生长特性[J]. 中国微生态学杂志，2000，12（5）：262-264.

[9]史怀平. 朱鹮消化道正常菌群的分离鉴定及微生态制剂的研究[D]. 杨凌：西北农林科技大学，2005：1-54.

[10]赖国旗，韦克，张德纯，等. 健康动物肠道正常菌群的分离与鉴定[J]. 中国微生态学杂志，1997，9（2）：23-25.endprint

2.1汉中麻鸭不同肠道区段定殖菌活性菌体数量

2.1.1芽孢菌在不同肠道区段活性菌体数量由表1可见，芽孢菌在汉中麻鸭肠道内可以定殖，少数芽孢菌滞留在麻鸭十二指肠处，进入小肠后开始萌发，并进行生长繁殖，在小肠后段达到最大值，菌体数达6.3×104 CFU/mL，而后重新转入休眠体的芽孢状态，完成一个生活周期。小肠后段即盲肠附近是芽孢菌主要生长繁殖和滞留的场所。

2.1.2酵母菌在不同肠道区段活性菌体数量由表2可见，酵母菌在汉中麻鸭肠道内虽可定殖，但菌体数量较少，分布范围较窄，在小肠后段才开始萌发、繁殖；在盲肠处菌体数量达到最大值，为7.6×104 CFU/mL。盲肠附近是酵母菌生长繁殖和滞留的场所。

2.1.3乳酸菌在不同肠道区段活性菌体数量由表3可见，乳酸菌在汉中麻鸭肠道内可以定殖，十二指肠前段即可见乳酸菌菌落；十二指肠后段乳酸菌菌体数达到最大，为 8.6×104 CFU/mL；至小肠中段时乳酸菌落几乎不能检出。十二指肠后段及小肠前段附近是乳酸菌主要生长繁殖和滞留的场所。

2.2汉中麻鸭肠道中定殖菌的分布

以汉中麻鸭肠道中芽孢菌、酵母菌、乳酸菌菌体数量为纵坐标，以活性菌体在不同肠道区段的分布部位为横坐标作图（图1）。芽孢菌耐酸碱，生长最适pH值为6.0左右，能分泌高活性的胞外产物，在胃液中仍保持活性，以孢子状态进入消化道，在小肠内开始萌发，故芽孢菌主要分布和定殖在远离胃端的小肠中、后段。酵母菌多分布在土壤、水和动植物体表面，仅零星分布在动物肠道内，因其富含蛋白质、核酸、维生素和多种酶，具有促进对饲料的消化吸收功能，在汉中麻鸭中虽有酵母菌菌落检出，但分布和定殖在小肠后段和盲肠。乳酸菌生长的最适pH值为4.0左右，在动物肠道内能通过生物拮抗，阻止和抑制致病菌侵入肠道，还可提高食物消化率，因此，在与胃部相连的十二指肠即能检出乳酸菌菌落，乳酸菌主要分布和定殖在十二指肠后段和小肠前段。

3小结与讨论

采用梯度稀释和组织培养方法研究陕西汉中麻鸭肠道中定殖菌的生活状态和分布，研究结果表明，小肠后段芽孢菌数量达最大值6.3×104 CFU/mL，盲肠酵母菌数量达最大值 7.6×104 CFU/mL，十二指肠后段乳酸菌数量达最大值 8.6×104 CFU/mL。

芽孢菌剂、酵母菌剂及乳酸菌剂作为动物益生菌或肠道竞争抑制剂，除了可以改善、调整肠道菌群外，还可抑制有害细菌在肠道内膜的吸附和定殖，饲喂动物日粮中添加一定比例，可明显降低料肉比。

芽孢菌、酵母菌及乳酸菌产生多种消化酶，是提高动物生产性能的一个重要体现，它可以帮助动物消化吸收营养物质，具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时，还具有降解饲料中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等，这些酶能够破坏植物饲料细胞的细胞壁，促使细胞的营养物质释放出来，并能消除饲料中的抗营养因子，减少抗营养因子对动物消化利用的障碍。

参考文献：

[1]辞海编辑委员会. 辞海：生物分册[M]. 上海：上海辞书出版社，1999：524.

[2]姚茹，王智勇，王广军，等. 饲料中添加芽孢杆菌对草鱼生长和水质的影响[J]. 江苏农业科学，2013，41（4）：214-216.

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[6]陈琼. 鸡源益生菌的分离、筛选、鉴定与特性研究[D]. 广州：华南理工大学，2004：1-64.

[7]蔡雁，郝勃，喻子牛. 抗动物病原菌芽孢杆菌的筛选、初步鉴定和抗菌活性[J]. 微生物学杂志，2005，25（5）：19-22.

[8]方祥，胡文锋，张辉华，等. 乳酸菌的分离、鉴定及其生长特性[J]. 中国微生态学杂志，2000，12（5）：262-264.

[9]史怀平. 朱鹮消化道正常菌群的分离鉴定及微生态制剂的研究[D]. 杨凌：西北农林科技大学，2005：1-54.

[10]赖国旗，韦克，张德纯，等. 健康动物肠道正常菌群的分离与鉴定[J]. 中国微生态学杂志，1997，9（2）：23-25.endprint

2.1汉中麻鸭不同肠道区段定殖菌活性菌体数量

2.1.1芽孢菌在不同肠道区段活性菌体数量由表1可见，芽孢菌在汉中麻鸭肠道内可以定殖，少数芽孢菌滞留在麻鸭十二指肠处，进入小肠后开始萌发，并进行生长繁殖，在小肠后段达到最大值，菌体数达6.3×104 CFU/mL，而后重新转入休眠体的芽孢状态，完成一个生活周期。小肠后段即盲肠附近是芽孢菌主要生长繁殖和滞留的场所。

2.1.2酵母菌在不同肠道区段活性菌体数量由表2可见，酵母菌在汉中麻鸭肠道内虽可定殖，但菌体数量较少，分布范围较窄，在小肠后段才开始萌发、繁殖；在盲肠处菌体数量达到最大值，为7.6×104 CFU/mL。盲肠附近是酵母菌生长繁殖和滞留的场所。

2.1.3乳酸菌在不同肠道区段活性菌体数量由表3可见，乳酸菌在汉中麻鸭肠道内可以定殖，十二指肠前段即可见乳酸菌菌落；十二指肠后段乳酸菌菌体数达到最大，为 8.6×104 CFU/mL；至小肠中段时乳酸菌落几乎不能检出。十二指肠后段及小肠前段附近是乳酸菌主要生长繁殖和滞留的场所。

2.2汉中麻鸭肠道中定殖菌的分布

以汉中麻鸭肠道中芽孢菌、酵母菌、乳酸菌菌体数量为纵坐标，以活性菌体在不同肠道区段的分布部位为横坐标作图（图1）。芽孢菌耐酸碱，生长最适pH值为6.0左右，能分泌高活性的胞外产物，在胃液中仍保持活性，以孢子状态进入消化道，在小肠内开始萌发，故芽孢菌主要分布和定殖在远离胃端的小肠中、后段。酵母菌多分布在土壤、水和动植物体表面，仅零星分布在动物肠道内，因其富含蛋白质、核酸、维生素和多种酶，具有促进对饲料的消化吸收功能，在汉中麻鸭中虽有酵母菌菌落检出，但分布和定殖在小肠后段和盲肠。乳酸菌生长的最适pH值为4.0左右，在动物肠道内能通过生物拮抗，阻止和抑制致病菌侵入肠道，还可提高食物消化率，因此，在与胃部相连的十二指肠即能检出乳酸菌菌落，乳酸菌主要分布和定殖在十二指肠后段和小肠前段。

3小结与讨论

采用梯度稀释和组织培养方法研究陕西汉中麻鸭肠道中定殖菌的生活状态和分布，研究结果表明，小肠后段芽孢菌数量达最大值6.3×104 CFU/mL，盲肠酵母菌数量达最大值 7.6×104 CFU/mL，十二指肠后段乳酸菌数量达最大值 8.6×104 CFU/mL。

芽孢菌剂、酵母菌剂及乳酸菌剂作为动物益生菌或肠道竞争抑制剂，除了可以改善、调整肠道菌群外，还可抑制有害细菌在肠道内膜的吸附和定殖，饲喂动物日粮中添加一定比例，可明显降低料肉比。

芽孢菌、酵母菌及乳酸菌产生多种消化酶，是提高动物生产性能的一个重要体现，它可以帮助动物消化吸收营养物质，具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时，还具有降解饲料中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等，这些酶能够破坏植物饲料细胞的细胞壁，促使细胞的营养物质释放出来，并能消除饲料中的抗营养因子，减少抗营养因子对动物消化利用的障碍。

参考文献：

[1]辞海编辑委员会. 辞海：生物分册[M]. 上海：上海辞书出版社，1999：524.

[2]姚茹，王智勇，王广军，等. 饲料中添加芽孢杆菌对草鱼生长和水质的影响[J]. 江苏农业科学，2013，41（4）：214-216.

[3]Sekirov I. Gut microbiota in health and disease[J]. Physiological Reviews，2010，90（3）：859-904.

[4]Wong S，Rawls J F. Intestinal microbiota composition in fishes is influenced by host ecology and environment[J]. Molecular Ecology，2012，21（13）：3100-3102.

[5]Tam N K，Uyen N Q，Hong H A，et al. The intestinal life cycle of Bacillus subtilis and close relatives[J]. Journal of Bacteriology，2006，188（7）：2692-2700.

[6]陈琼. 鸡源益生菌的分离、筛选、鉴定与特性研究[D]. 广州：华南理工大学，2004：1-64.

[7]蔡雁，郝勃，喻子牛. 抗动物病原菌芽孢杆菌的筛选、初步鉴定和抗菌活性[J]. 微生物学杂志，2005，25（5）：19-22.

[8]方祥，胡文锋，张辉华，等. 乳酸菌的分离、鉴定及其生长特性[J]. 中国微生态学杂志，2000，12（5）：262-264.

[9]史怀平. 朱鹮消化道正常菌群的分离鉴定及微生态制剂的研究[D]. 杨凌：西北农林科技大学，2005：1-54.

[10]赖国旗，韦克，张德纯，等. 健康动物肠道正常菌群的分离与鉴定[J]. 中国微生态学杂志，1997，9（2）：23-25.endprint