高效液相色谱法测定参松养心胶囊中马钱苷的含量

王岳 刘敏彦 苏平菊

高效液相色谱法测定参松养心胶囊中马钱苷的含量

王岳 刘敏彦 苏平菊

目的 建立采用高效液相色谱法测定参松养心胶囊中马钱苷含量的方法。方法 采用C18色谱柱, 甲醇-乙腈-0.05%磷酸(5:9:86)为流动相, 检测波长238 nm。结果 马钱苷在37.824～756.48 ng浓度范围内呈良好的线性关系。马钱苷平均回收率为100.7%(n=9), RSD=1.47%。结论 该法操作简便准确、专属性强, 可作为参松养心胶囊的质量控制方法。

高效液相色谱法；参松养心胶囊；马钱苷；含量测定

参松养心胶囊由人参、麦冬、山茱萸、丹参等12味药组成。益气养阴, 活血通络, 清心安神。本品种收载于中国药典2010年版第二增补本, 马钱苷为处方中山茱萸的主要成分之一, 因此采用高效液相色谱法对本品马钱苷的含量测定进行了研究。

1 仪器与试药

1.1仪器 高效液相色谱仪(Waters 2695)。

1.2试药 马钱苷对照品(购自中国药品生物制品检定所,批号：111640-200503), 乙腈为色谱纯, 其它试验所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相甲醇-乙腈-0.05%磷酸(5:9:86)；流速1 ml/min；检测波长238 nm；理论塔板数按马钱苷峰计算应不低于3000。

2.2供试品溶液制备 取供试品(批号100301), 倾出内容物, 研细, 约1 g, 精密称定, 精密加入甲醇25 ml, 称定重量,超声提取30 min, 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 精密吸取续滤液10 ml, 加在中性氧化铝柱(100～200目, 7 g, 内径1.5 cm, 干法装柱)上, 用50%甲醇60 ml洗脱, 收集流出液和洗脱液, 蒸干, 残渣加50%甲醇溶解,并定容至25 ml, 摇匀, 即得。

2.3对照品溶液的制备 精密称取马钱苷对照品11.82 mg,置50 ml量瓶中, 加甲醇溶解, 并定容至刻度, 摇匀, 即得。再精密吸取上述对照品溶液2 ml, 置25 ml量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。浓度：18.912 μg/ml。

2.4阴性试验 按处方比例称取除山茱萸外的其它方中药材, 按制备工艺制得阴性样品, 按供试品溶液的方法进行处理, 得阴性供试品溶液。分别吸取阴性供试品溶液、对照品溶液及供试品溶液, 按照选定测定条件进行检测, 结果表明：在马钱苷相应的保留时间, 阴性样品无相应波峰出现, 阴性样品不干扰测定。

2.5线性范围考察 精密吸取浓度为18.912 μg/ml的对照品溶液2 μl、5 μl、10 μl、20 μl、40 μl, 注入液相色谱仪, 测定峰面积见表1。以峰面积积分值为纵坐标, 进样量为横坐标, 绘制标准曲线。结果表明：马钱苷浓度在37.824～756.48 ng范围内呈良好线性关系, 回归方程为：y=1627.7326x=5711.6561, r=1.0000。

2.6进样精密度考察 吸取对照品溶液, 连续进样5次, 马钱苷对照品5次测定的RSD为0.28%, 说明仪器性能良好。

2.7供试品溶液稳定性考察 精密吸取供试品溶液, 每隔一定时间进样, 考察了16 h内的稳定性, 结果见表2。

从以上结果可见, 供试品峰面积 RSD值2.11%,表明在测定的16 h内, 供试品稳定。

2.8重复性试验 取同一批供试品(批号100301), 按高、中、低剂量取样, 每个剂量取3份, 按供试品含量测定项下方法,进行提取, 制备, 测定结果, 马钱苷的平均含量1.01 mg/g, RSD为1.37%。表明方法重现性良好。

2.9回收率试验 采用加样回收试验, 取同一批供试品(批号100301)9份, 分别加入低、中、高3个浓度的马钱苷对照品溶液, 按供试品含量测定项下方法, 进行提取, 制备, 测定,计算回收率。马钱苷的平均回收率为100.70%(n=9), RSD为1.47%, 结果见表3。

2.10样品含量测定 按上述方法测定3批样品含量, 结果见表4。

表1线性考察结果

表2稳定性实验结果

表3回收率试验结果

表4样品含量测定结果

3 讨论

本实验对含量测定中供试品溶液的制备方法进行了研究。

3.1提取溶媒选择实验结果表明, 50%甲醇、75%甲醇和甲醇对马钱苷的提取含量影响不大, 但50%甲醇过滤较困难,以甲醇为提取溶媒时杂质峰较75%甲醇小, 为更好地保护色谱柱, 因此选择甲醇为提取溶媒。

3.2超声提取时间考察实验结果表明, 超声提取15 min、 30 min和45 min对马钱苷的含量影响不大, 但为保证充分提取, 选定超声提取时间为30 min。

3.3中性氧化铝用量考察实验结果表明, 中性氧化铝用量4～8 g对马钱苷的含量影响不大, 但随着中性氧化铝用量的增加, 杂质峰在减小, 7 g和8 g用量的杂质峰基本相当, 因此选择氧化铝用量为7 g。

3.4洗脱溶媒用量考察结果表明, 采用50 ml 50%甲醇基本洗脱完全, 考虑到样品批间差异, 为将马钱苷充分洗脱完全,洗脱溶媒用量选定为60 ml。

［1］ 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典.2010年版.一部, 2010:597-598.

［2］ 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典.2010年版.第二增补本, 2013:51-53.

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