麻栎叶总黄酮提取工艺研究

罗 侠，贾小丽，刘文娟，刘克忠

麻栎（QuercusacutissimaCarr.）为落叶乔木，属壳斗科栎属植物。麻栎是滁州市天然适生植物之一，资源丰富，据统计，滁州现有麻栎53.2万亩［1］，研究表明，麻栎富含黄酮类、单宁类、三萜类、烷基糖苷类、酚类等多种生物活性物质［2－6］。

黄酮类化合物（flavonoids）是植物重要的次生代谢产物，在植物的叶、花、果中广泛存在。研究表明，黄酮类化合物具有抗氧化、抗自由基、抑菌、抗病毒等生物活性作用，应用前景十分广阔［7，8］。目前，对黄酮的研究多集中在栎炭资源开发及造林等方面，而对麻栎叶黄酮提取的研究报道较少。本文运用正交试验优化麻栎叶黄酮的提取工艺，采用微波提取方法，以麻栎叶总黄酮含量为指标，考察影响黄酮类化合物提取的因素，为麻栎的综合开发和利用提供一定的理论基础和实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

实验用麻栎叶于当年秋季采摘自安徽省滁州市琅琊山国家森林公园周围，经汪美英鉴定，保存于滁州学院标本室。烘干，粉碎，过60目筛，保存干燥处备用。

1.2 仪器与设备

723C型可见分光光度计购自上海欣茂仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 芦丁标准溶液的配制及标准曲线的绘制

参照文献方法操作［9］。称取一定量的芦丁标准品溶于70%乙醇溶液，定容，制作芦丁标准溶液。准确量取芦丁标准溶液分别为0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 和 6.0mL，依 次 加 入 1mL5%NaNO2溶液，摇匀，放置6min，加入1mL10%Al（NO3）3溶液，摇匀，反应6min，再加入10mL 4%NaOH溶液，蒸馏水定容至25ml，放置15min。于510nm处测定吸光值（A），绘制标准曲线，吸光度Y和浓度 X的关系为：Y＝0.0098X－0.0153，R2＝0.9971，X的单位为μg／mL。

1.3.2 微波提取工艺的优化试验

以乙醇浓度、固液比、提取时间等因素为考察对象，探索其对麻栎叶黄酮类化合物提取率的影响，每个因素设4水平，采用正交实验，每个实验设3个重复，以获得最佳提取条件。

1.3.3 黄酮含量的测定

取麻栎叶样品5.00g，按一定固液比加入一定浓度的乙醇提取一定时间。在不同微波功率下提取一定时间，取出，待冷却至室温，进行微波辅助提取。反复真空抽滤，直至提取液近无色，滤液加石油醚萃取3次左右。减压浓缩并定容至50ml，得提取液。量取5ml提取液按1.3.1测定的方法，在510nm波长下测定吸光值，根据芦丁标准曲线回归方程，计算提取液中黄酮类化合物质量浓度。

按照公式计算总黄酮类化合物含量：总黄酮含量（mg／g）＝（Y×V）／WY为提取液中总黄酮质量浓度mg／ml；V为提取液的体积ml；W 为样品的干重g。

1.3.4 数据处理

采用DPS数据处理软件进行分析。

2 结果与分析

2.1 正交试验

为确定麻栎叶黄酮最佳提取工艺，采用正交实验法进行。设计了乙醇浓度，提取时间，固液比3个因素对麻栎叶黄酮提取率的影响，按照L9（34）进行正交试验（表1），各实验设3个重复。

表1 L9（34）正交试验表

2.2 正交试验结果

实验以麻栎叶总黄酮的含量为考察指标，由表2极差分析结果表明，各因素对实验结果影响的大小顺序为：A＞B＞C，即乙醇浓度影响最大，提取时间次之，固液比对实验结果影响最小。由表3可以得出，A和B两个因素的影响达显著水平（0.01＜P＜0.05），而C因素的影响不显著。说明乙醇浓度和提取时间对麻栎叶黄酮提取率的影响显著，而固液比对提取率的影响不大。其最佳提取工艺组合为A2B2C2，即乙醇浓度60%，提取时间为每次60min；固液比为1：20，此时麻栎叶黄酮提取率最高。

表2 正交实验结果

表3 正交实验方差分析结果

2.2 验证试验

为考察上述优选提取工艺的稳定性，称取5g麻栎叶粉，根据正交试验的结果，加入60%的乙醇，提取时间取60min，固液比为1：20，进行重复性试验（n＝3），分别测定麻栎叶总黄酮提取量，计算其平均提取量的结果为2.40mg／g，说明该工艺稳定可行。

3 结论

采用微波提取麻栎叶总黄酮，正交实验结果表明，乙醇浓度和提取时间对麻栎叶总黄酮提取率有显著的影响（（0.01＜P＜0.05）），而固液比影响不明显。各因素对麻栎叶总黄酮提取率影响的大小顺序为：A＞B＞C，即乙醇浓度影响最大，提取时间次之，固液比对实验结果影响最小。麻栎叶黄酮类化合物最佳提取工艺组合为A2B2C2，即乙醇浓度60%，提取时间为每次60min，固液比为1：20。实验结果为麻栎叶黄酮类化合物的深入研究奠定理论基础，为麻栎作为保健品、药品等资源开发提供技术保障。

［1］http：／／www.ahczly.gov.cn／main／model／newinfo／newinfo.do？infoId＝4607.生物质能源树种麻栎综合开发与营造林招商项目.2010.1.26.

［2］李 钦，沈月毛，李 萍.黄背栎中的黄酮类化学成分研究［J］.中国药学杂志，2008，43（5）：336－338.

［3］周应军，李 波，梁建宁，等.槲树叶黄酮类化学成分研究［J］.中草药，2005，36（8）：1140－1141.

［4］玄永浩，金英善，胡晓燕.麻栎橡子抗氧化及抗糖尿病活性的试验研究［J］.现代农业科技，2009（17）：340－343.

［5］Tanaka，N.，Shimomura，K.，Ishimaru，K..Tannin production in callus cultures of Quercus.acutissima［J］.Phytochemistry，1995（40）：1151－1154.

［6］周应军，徐绥绪，孙启时，等.槲树叶的化学成分研究［J］.中国药科大学学报，2005，36（2）：187－189.

［7］陈春刚，韩芬霞.生物类黄酮的研究与应用综述［J］.安徽农业科学，2006，34（13）：2949－2951.

［8］熊 勇，熊扬波，杨青松.药用植物密蒙花总黄酮提取及抗氧化性研究［J］.生物技术，2011，21（3）：85－87.

［9］甘辉坤，陈旭健，韦 敏，等.青冈栎果实抗癌活性的实验研究［J］.食品科技，2010，35（3）：227－229.