敌百虫定性检测方法的比较

刘平平 （山东省诸城市畜牧兽医管理局 262200）

敌百虫定性检测方法的比较

刘平平 （山东省诸城市畜牧兽医管理局 262200）

本试验通过对敌百虫的定性检测，观察其性质，将敌百虫和敌百虫的纯溶液分别稀释50、100、200、500、1000倍采用圆形滤纸法、硅胶层析法对比的试验方法，比较出两种方法的灵敏度，结果证明硅胶层析法灵敏度高于圆形滤纸法。

有机磷杀虫药(organophosphorous insecticides)对人畜的毒性主要是对乙酰胆碱酯酶的抑制，引起乙酰胆碱蓄积，使胆碱能神经受到持续冲动，导致先兴奋后衰竭的一系列的毒蕈碱样、烟碱样和中枢神经系统等症状；严重患者可因昏迷和呼吸衰竭而死亡，有机磷杀虫药大都呈油状或结晶状，色泽由淡黄至棕色，稍有挥发性，且有蒜味。除敌百虫外，一般难溶于水，不易溶于多种有机溶剂，在碱性条件下易分解失效。常用的剂型有乳剂、油剂和粉剂等。下面是对敌百虫进行的试验，观察其性质及其方法的灵敏度。

1 材料和方法

1.1 材料

中毒试验动物兔子胃内容物、敌百虫药品、硅胶、甲醇、乙醇、丙酮、苯、间苯二酚、氢氧化钠、10个烧杯、1个玻璃棒、5个滴管、2个吹管、1盒滤纸、2个量筒、药匙、电子天平、水浴锅、活化箱、层析缸。

1.1.1 样品采集 采取因饲喂添加有敌百虫的饲料引起的中毒死亡兔子胃内容物。

1.1.2 样品处理 将胃内容物放入密闭的试剂瓶中，加入95%的乙醇100ml，在水浴锅中50～60℃水浸2h，过滤，滤液自然挥发干，将残渣用苯或氯仿精制一次，备用。

1.1.3 检液的配制 取敌百虫纯品0.5、0.25、0.125、0.05、0.025g溶解于25ml的蒸馏水配制成检液I，稀释后备用。采用稀释50、100、200、500、1000倍的方法进行检测，为了精确的观察和计算。同样的方法取中毒兔子胃内容物精制的残渣0.5、0.25、0.125、0.05、0.025g溶解于蒸馏水中配制成检液II，备用。

1.2 方法

1.2.1 圆形滤纸法 （1）原理：敌百虫水解后，产生的醛类物质和间苯二酚反应，生成粉红色的化合物。（2）试剂1%间苯二酚酒精溶液、5%NaoH酒精溶液（3）操作方法：在定性滤纸中心滴加5%NaoH酒精溶液一滴，1%间苯二酚酒精溶液一滴，稍干，滴检液I数滴，在烘箱中微微加热片刻，若出现粉红色，说明有敌百虫的存在，此操作重复3次。同样的方法来检验检液II，重复3次。

1.2.2 硅胶层析法 （1）原理：敌百虫水解后，产生的醛类物质和间苯二酚反应，生成粉红色的化合物。（2）试剂硅胶、甲醇、乙醇、丙酮。（3）硅胶板的制作：在烧杯中放入适量的水，加适量的硅胶使浓度适中，倒在准备好的玻片上，尽量的速度均匀使其平面整洁利于实验的进行，放置几分钟使其成型然后小心的放入烤箱中温度适中1～2h，充分的活化。（4）试验步骤及方法：将制作好的硅胶板放入层析缸中，层析缸中间横一玻璃棒固定好，放入前硅胶板的靠边缘的1cm的地方滴加检液I，在盘子中添加配制的甲醇、乙醇、丙酮1:1:3的混合液使其饱和10min左右，然后将硅胶板靠在横着的玻璃棒上，添加混合液靠近此边缘，使其充分的扩散，过数分钟后拿出来用1%间苯二酚酒精溶液、5%NaoH酒精溶液喷加可以看到有粉红色的显示，此操作重复3次。同样的方法检验检液II，重复3次。

2 试验结果

表1 敌百虫纯品不同浓度两种检测方法灵敏度比较(显色情况)

表2 胃内容物中两种检测方法灵敏度比较(显色情况)

在试结果中检液都有不同程度的显色，高浓度的显色较明显，低浓度的显色效果较差，同种条件下，2种试验方法的效果有很大的不同，硅胶层析法的效果好些。

3 讨论

（1）在中毒兔子的胃内容物的萃取后要注意除去内容物中的色素，以免影响颜色的产生。敌百虫为极性强的有机溶剂，必须用强极性的有机溶剂浸提，比如甲醇、乙醇等。另外，萃取过程中试验要求必须在自然的条件下挥干残渣，温度控制适中，萃取后要密封、低温放入冰箱中保存，以备使用。（2）对于检液II：圆形滤纸法和硅胶层析法的实验结果明显，在稀释了50、100、200、500倍的情况下都出现了粉红色的显色带，但是在稀释了1000倍后没有显色。与此同时圆形滤纸法对于硅胶层析法来说显色更加明显，效果更好，更能体现试验的精确性，说明了硅胶层析法更适合此试验，精确度高，准确性强。（3）对于检液I：采用的圆形滤纸法和硅胶层析法的试验结果中，在稀释了50、100、200、500、1000倍的情况下都出现了粉红色的显色带，说明了敌百虫的浓度对于试验来说具有很重要的意义，浓度低的效果差，浓度高的效果明显。与此同时圆形滤纸法和硅胶层析法后者的显色效果的比前者明显，说明硅胶层析法更精确，更能够体现出试验的要求。（4）综合比较圆形滤纸法和硅胶层析法各自的优缺点：①圆形滤纸法方法简单快捷，材料要求低，成本低，操作简单易行，可以很快的掌握试验要领。②硅胶层析法方法复杂，从制作开始到使用花费的时间较长，材料多，成本较高，在操作过程中技术含量高要求能够熟练的掌握硅胶板的制作，而且硅胶板的板面要求光滑平整利于实验的进行。③硅胶层析法比圆形滤纸法实验效果明显，精确度高，准确强度好。（5）综合比较检液I和检液II：①在同稀释浓度的、同样的实验方法情况下，两者的显色效果不一样，后者比前者的显色明显，效果更好。②同样的稀释浓度、不同的试验方法下效果也不一样，后者还是比前者显色明显，效果更好。③说明了经过动物的消化和吸收敌百虫的毒性有了明显的下降，萃取过程中难免有杂质的成分，使精确度下降，显色效果降低。

4 小结

圆形滤纸法和硅胶层析法均可用于敌百虫的定性检测，但是在相同的条件下，硅胶层析法的灵敏度更高，准确度也高。

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1007-1733(2014)10-0034-02

2014–07–11）