紫外分光光度法测定保健食品中总黄酮的含量

董丽荣 杨晓梅 李宗顺 白文莉

1.昆明市食品药品检验所，云南 昆明 650032;2．云南省玉溪市食品药品检验所，云南 玉溪 653100

近年来，随着自由基生命科学的进展，黄酮类化合物不仅是一种活性物质，还是重要的营养物质，其药理和营养性都得到了国内外的广泛深入研究和临床试验［1］。作为一种新运用的营养素，黄酮类化合物对人体具有重要的生理保健功效，并体现出了如下功能:消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其它脏器细胞、抗脂肪氧化、抗衰老等［2、3］。目前市场上有较多以黄酮类为功效成分的保健食品，总黄酮也多作为主要的质量控制指标。

1 仪器与试剂

UV－260型紫外可见分光光度计 (日本岛津);AEL－200型电子天平 (日本岛津);BP211D－OCE型电子天平(德国赛多利斯)。

芦丁对照品 (中国药品生物制品检定所，批号:10080－200707;含量以92．5%计);无水乙醇 (分析纯，利安隆博华医药化学有限公司)。

2 方法与结果

2.1 检测波长的选择［4］取芦丁对照品溶液 (15 μg/ml)在200～600 nm波长内扫描，结果表明:在360nm处，对照品溶液有最大吸收峰，故测定波长选择360 nm。取“2.2项”下样品溶液在200～600 nm波长内扫描，结果表明:在360 nm处有最大吸收峰。

2.2 样品溶液的制备 取样品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇100ml，密塞，称定重量，摇匀，超声处理 (功率250 W，频率40 KHZ)30分钟，放冷，用30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得。试验表明微孔滤膜过滤能除去样品杂质，而对指标性成分没有影响 (对照品溶液0.45μm微孔滤膜过滤后在360nm吸光度无明显变化)。结果见表1。

表1 对照品溶液过滤前后吸光度变化情况

2.3 线性关系的考察

2.3.1 储备液的制备 精密称定芦丁对照品为10.8mg，置于200ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.3.2 标准曲线的建立 分别精密吸取“2.3.1项”储备液0.4、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于 10 ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。取30%乙醇为空白对照，在360 nm波长处测定吸光度，以吸光度A值与浓度C值线性回归，得曲线方程为:C=32.078A+0.003，r=1。结果表明，芦丁在2～30μg/ml浓度范围内，呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验 取同一浓度芦丁对照品溶液，连续测定6次，测定吸光度，RSD%为0.1%。

2.3.4 稳定性考察 取纽斯葆牌葛维片 (批号为BE263－A)14片，去包衣，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇100 ml，密塞，称定重量，超声处理 (功率250 W，频率40 KHZ)30分钟，放冷，用30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得。分别于0、2、4、8、12、24h用紫外 －可见分光光度计测定其吸收度 (360nm)，测定结果RSD为0.7%，结果表明样品溶液在24h内稳定。

2.3.5 重复性考察 取纽斯葆牌葛维片 (批号为BE263－A)20片，去包衣，研细，精密称取6份，每份约0.5 g，样品处理方法同“2.3.4项”，分别测定其吸收度，测定结果RSD为1.2%，结果表明，样品重复性良好。

2.3.6 回收率试验 精密称取纽斯葆牌葛维片 (批号为BE263－A)粉末9份，每份约0.25 g，分别精密加入适量的芦丁对照品溶液，按照“2.2.4项”操作，分别测定吸光度，计算回收率，结果见表2。

表2 加样回收率测定结果

表3 样品测定结果

2.4 样品含量测定结果 取17批市售含黄酮的样品，按上述方法测定，结果见表3。

3 讨论

保健食品中总黄酮的含量测定检验方法多采用聚酰胺小柱脱色除杂质，试验操作表明精密度难以控制，且试验中用到强致癌物苯作洗脱极［5］，不利于环境保护和操作者身体健康。本实验样品提取采用30%乙醇为溶剂［6］，回收率试验表明样品提取完全，且不使用苯、甲醇等具有毒性的有机溶剂，更环保和健康。

样品超声提取，经0.45μm微孔滤膜过滤，直接测定，快速、简便、精密度良好，对照品溶液经微孔滤膜过滤前后，吸收度不变，表明过滤前后指标成分没有损失。样品溶液过滤前后吸收度有明显变化，表明经微孔滤膜过滤，使样品更纯净，假阳性干扰减小，与上聚酰胺小柱除杂质效果相同，而精密度明显优于上柱。

［1］龚盛昭．黄酮类化合物保健食品大有开发价值［J］．广州食品工业科技，18(1):63－64．

［2］谭秦丽，刘冬，李玉宝，等．总黄酮化合物药理研究进展［J］．安徽中医学院学报，2009，28(3):62－64．

［3］田永利，刘志宗，葛林，等．总黄酮类化合物含量测定方法和药理作用研究进展［J］．河北医药，2010，32(8):2095－2096．

［4］肖香兰，罗仁才，张楠．保健食品中总黄酮的测定方法［J］．中国卫生检验杂志，2007，17(6):1037－1038．

［5］中华人民共和国卫生部，保健食品检验与评价技术规范［M］．中华人民共和国卫生部，2003．

［6］董宇．黄酮类化合物的提取方法研究及展望［J］．人参研究，2009，22(4):33－35．