颈痛舒口服液中葛根素含量测定方法的研究

2014-07-09 09:32许广华李小伟
中国民族民间医药 2014年7期
关键词:颈痛生产厂家葛根素

许广华 李小伟 韩 双

安徽省太和县中医院,安徽 太和 236608

葛根为豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根,为中风常用的祛风解毒药之一,具有解肌,升阳透疹,解热生津等功效[1],制剂处方中主药葛根的有效成分为葛根素、黄豆苷、黄豆苷元等黄酮类成分,其中葛根素的含量最高。颈痛舒口服液来自于我院推拿科主任、副主任医师朱向阳的经验方,在长期给予颈椎病患者治疗过程中,除用推拿牵引等非药物治疗的同时服用颈痛舒口服液,以缓解病人因气血不足,而引起的头痛、头晕、手臂麻木、酸痛、活动不利等症状。为了有效控制该药品的质量,根据新药审评有关规定,本文建立了测定颈痛舒口服液中葛根素含量的高效液相色谱法,结果分离度好、重现性好、灵敏度高,可作为控制颈痛舒口服液质量的方法[2]。

1 仪器

北京普析L6-DP6型高效液相色谱仪 (生产厂家:北京普析通用设备科技有限公司);101-1A型数显恒温干燥箱 (生产厂家:上海光地仪器设备有限公司);AL-120型电子天平 (生产厂家:瑞士梅特勒-托利多仪器公司);ZF-2三用紫外仪 (生产厂家:上海安亭仪器厂);HS-180型超声波清洗机 (生产厂家:宁波海曙金兰教仪科研究所);GSY电热恒温水浴锅 (生产厂家:北京医疗器械厂)

2 试药

颈痛舒口服液 (太和中医院中药制剂室,批号:20130105,20130203,20130305);颈痛舒口服液阴性对照品三批 (太和县中医院中药制剂室);葛根素对照品 (中国药品生物)。

色谱甲醇 (生产厂家:安徽时联特种溶剂股份有限公司);水为新制纯化水;其余试剂均为分析纯。

3 葛根素含量测定方法学

3.1 色谱条件 色谱柱:依利特Hypersil ODS(4.6mm×250mm,5um);流动相:甲醇-水 (27∶73);检测波长:250nm;流速:1.0ml/min;柱温:30℃;进样量:20μl。理论塔板数按葛根素峰计应不低于4000,分离度大于1.5。

3.2 对照品溶液的制备 精密称定葛根素对照品适量,加甲醇制成每ml含葛根素对照品50μg的溶液,即得。

3.3 供试品溶液的制备[3]精密量取本品1.0ml,置50ml具塞锥形瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,超声处理 (功率100W,频率40kHz)30分钟,滤过,取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

3.4 干扰试验 取按处方比例及生产工艺制备的不含葛根原药材的颈痛舒口服液,按供试品溶液的制备同法制成阴性对照溶液,按上述色谱条件进行测定,结果表明,葛根素含量测定无干扰,色谱图见图1。

图1 颈痛舒口服液HPLC色谱图

3.5 线性关系考察 精密称取葛根素对照品3.51 mg,置25 ml量瓶中,用30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密移取对照品溶液2,4,8,12,20μl,按上述色谱条件进样测定,以对照品进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,得回归方程y=3.3E+6 x-31256,R=0.9998。结果表明,葛根素在0.2808~2.808μg范围内线性关系良好。

3.6 精密度试验 取葛根素对照品溶液,按上述色谱条件,重复进样6次,测定峰面积,结果葛根素峰面积的RSD为0.87%。

3.7 重复性试验 取同一批样品6份,每份约1.0ml,按上述方法制成供试品溶液,按“2.2.1”项下色谱条件测定,计算葛根素含量。结果葛根素平均含量为3.52mg/ml,RSD为1.44%。

3.8 稳定性试验 取同一批供试品溶液,室温下放置,按上述色谱条件,分别于配制后0,2,4,6,8,12 h进样测定,记录葛根素峰面积,结果葛根素峰面积的RSD为1.26%。

3.9 加样回收率试验[4-5]精密量取已知含量的样品6份,每份约1.0ml,分别精密加入葛根素对照品适量,按上述方法制成供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率。结果见表1。

表1 葛根素加样回收率试验结果

3.10 样品含量测定 取3批样品,按上述方法制成供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算含量。结果葛根素的含量分别为3.51,3.57,3.48mg/ml。

4 结果与讨论

4.1 考察了甲醇-0.2%磷酸 (体积比27∶73)、乙腈-水(体积比20∶80)、甲醇 -水 (体积比27∶73)、甲醇 -0.1%磷酸 (体积比75∶25)[6]等流动相,以甲醇-水(体积比27∶73)的保留时间较为适宜,且分离度良好,其余几种条件葛根素保留时间短,分离度差。

4.2 对样品超声处理时间进行了考察,结果表明样品超声时间30min以上,被测组分含量不再增加,说明超声时间30min即可,故将样品处理的超声时间定为30min。

4.3 采用HPLC法测定颈痛舒口服液中葛根素的含量,操作简便,结果准确可靠,重现性好,可用于颈痛舒口服液的质量控制、稳定性考察和有效期,可为颈痛舒口服液的质量标准的建立提供依据。

[1]刘玉国,修彦凤,刘玉红.葛根及其制剂中葛根素的含量测定方法概述[J].基层中药杂志,1999,13(1):42-44.

[2]陆炜琨,曾芳,李媛.反相高效液相色谱法测定益气降糖胶囊中葛根素的含量[J].广州药学学报,2008,26(5):475-477.

[3]张雪荣,董小燕,索伟.HPLC法测定颈复康颗粒剂中葛根素的含量测定[J].中国药品标准,2002,16(6):56-58.

[4]孙法丽,马毅,王春香.高效液相色谱法测定葛瓜降糖胶囊中葛根素含量[J].药物鉴定,2007,16(20):33-34.

[5]宿洁,杨晓云,吴爱英.HPLC法测定天乐胶囊中的葛根素含量[J].中国临床药学杂志,2003,12(2):94-95.

[6]刘必旺,李会芳,赵换,等.HPLC与TLC测定复方葛根胶囊中葛根素含量[J].中华中医药杂志,2007,26(4):695-697.

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