常青白参颗粒防治兔球虫病的试验研究

刘向东等

摘 要：该试验旨在研究常青白参颗粒对兔球虫病的防治效果。选用（35±2）日龄仔兔80只，随机分为4个处理组，每组20只，分别为空白对照组、模型对照组、阳性药物组和中药防治组。采用人工接种球虫孢子化卵囊的方法建立实验动物模型。

关键词：常青白参颗粒；兔球虫病；化学药物；药效

中图分类号：S858.291 文献标识码：A 文章编号：2095-6835（2014）07-0123-02

兔球虫病是严重危害养兔生产的寄生虫病，是由艾美耳属的多种球虫寄生在肠道和肝脏上皮细胞内引起的一种原虫病。该病分布广、传染快、死亡率高，特别是4月龄内的仔兔最易感染，而且对不同品种、年龄的兔都具有易感性。根据感染的种类和寄生的部位不同，可分为肠型、肝型和混合型，但在临床上多见混合型。目前，对该病的控制主要采用药物防治和疫苗接种两种手段。用于防治球虫病的药物以化学药物为主，但这些化学药物的长期使用易产生耐药性，使畜产品化学药物残留而影响人类的健康。使用球虫疫苗可以防治耐药性的产生，但是，强毒苗和弱毒苗可能造成球虫病原的扩散和毒力返强，球虫基因工程疫苗目前还处于实验室研究阶段。药物的毒性和残留日益受到了人们的重视，一些毒性大、安全性低的化学合成抗球虫药物逐渐被淘汰，而且要研究生产一种新型的高效、低毒、安全的化学合成抗球虫药物十分困难，且费用昂贵。中药相对化学药物有诸多优点，比如毒副作用小、使用安全、不易产生耐药性和药物残留等。现已开发出许多有抗球虫效果的中药复方制剂和添加剂应用于临床。但由于制剂水平低下（主要以散剂为主）和组方庞大等原因，导致很多复方的临床疗效不明显。山西有丰富的党参资源，且潞党参为党参地道药材。为了对党参药材进行有效的开发和利用，课题组在中兽医药理论的指导下，结合球虫病的发病特点，精选常山、青蒿、白头翁、党参4味中药，研制成了防治兔球虫病的新型中兽药——常青白参颗粒。该试验以人工感染兔球虫卵囊疾病为模型，研究了常青白参颗粒对兔球虫病的防治效果。

1 材料与方法

1.1 实验药物

常青白参颗粒：由常山、青蒿、白头翁、党参4味中药组成，由山西省新型中兽药协同创新基地研制而成，规格为50 g/袋（1 g相当于原生药7.15 g）。

地克株利溶液：购于四川齐金动物药业有限公司，规格为100 mL∶0.5 g。

1.2 攻毒用卵囊

试验所用的卵囊分离自山西临汾某养兔场，按漂浮法收集卵囊，将收集到的卵囊经3 000 r/min离心5 min，取沉淀物置于含有质量分数为2.5%的重铬酸钾溶液的平皿中，29 ℃恒温孵育3 d，卵囊孢子化后贮存于4 ℃的冰箱中备用。

1.3 试验动物及分组设计

选用体重相近的（35±2）日龄断奶幼兔80只，经饱和盐水漂浮法检查，粪便中均无卵囊。随机分为4个处理组，每组20只，分别为空白对照组、模型对照组、阳性药物组、中药治疗组。空白对照组不感染球虫卵囊，也不用药。其余各组兔均经口感染5×105个球虫卵囊。模型对照组感染前后不用药；阳性药物组从感染当天开始，在饮水中添加地克珠利溶液（每100 mL兑水500 L），连用14 d；中药治疗组从感染当天开始，灌服常青白参颗粒（用纯净水稀释，每50 g用水1 000 mL），10 mL/只，1次/d，连用14 d。

1.4 测定指标与方法

球虫感染当天对所有的兔进行称重，随后在球虫感染14 d时，称重、剖检、取样。

1.4.1 相对增重率

相对增重率（%）=给药组或感染不投药组平均增重率/不感染不投药组平均增重×100%.

1.4.2 存活率

存活率（%）=组内存活兔/组内总兔数×l00%.

1.4.3 病变值

根据病变的严重程度，用Johnson标准进行病变记分，具体记分方法为：肠道壁无肉眼可见病变者记为0分；肠道壁有少量散在的淤血点，肠道壁不增厚，内容物正常者记为1分；肠道壁有较多的淤血点，肠道内容物明显带血，肠道壁增厚，盲肠内容物正常者记为2分；肠道有较多血液或有盲肠芯（血凝块或灰白色干酪样块状物）、肠道壁明显增厚者记为3分：肠道充满大量血液或盲肠芯很大，致使盲肠肿大或死亡者记为4分，对每只兔分别记分后算出各组的平均病变并记分，再按下式计算每组的病变值：病变值 = 组内平均病变记分×10.

1.4.4 平均卵囊值

取1 g肠道内容物于10 mL水中，充分搅拌成悬液后，用微量移液器吸取2 μL于载玻片上，在显微镜下计数卵囊数量，重复3次。用3次的平均数算出1 g肠道内容物中的卵囊数，按下式算出克卵囊数（Oocyst pergram，OPG）：

克卵囊数=l g肠道内容物的卵囊数×10. （1）

当0≤OPG<0.1时，卵囊值为0；当0.1≤OPG<1时，卵囊值为1；当1≤OPG<6时，卵囊值为10；当6≤OPG<11时，卵囊值为20；当OPG≥11时，卵囊值为40.

1.4.5 抗球虫指数

按以下方法计算药物的抗球虫指数（Anticoccidial Index，ACI）：抗球虫指数（ACI）=（相对增重率+存活率）-（病变值+平均卵囊值）。

判定标准为：ACI≥180者为高效；180>ACI≥160者为中效；160>ACI≥120者为低效；ACI<120者为无效。

由表1可知，中药治疗组的相对增重率为92.48%，存活率为100%，抗球虫指数为186.48，疗效达到高效。阳性对照药地克珠利的相对增重率为73.94%，存活率为95%，抗球虫指数为146.94，疗效仅为低效。试验结果表明，常青白参颗粒具有明显的抗球虫作用，其临床疗效优于阳性对照药地克珠利。

3 讨论

该试验除了空白对照组外，其他试验组在球虫感染后均表现出不同程度的临床症状，比如精神不振、采食量减少、排血便等。模型对照组的相对增重率为46.25%，病变值为33，存活率为75%，抗球虫指数为48.25，这表明人工感染模型成功建立。常青白参颗粒是课题组根据中兽医学理论，结合球虫病的发病特点以祛除病虫、清热解毒燥湿、凉血止血、益气补血为治法，精选常山、青蒿、白头翁、党参4味药，在现代中药研究成果的基础上，采用现代制药技术研制而成的纯中药颗粒剂。方中常山苦、辛、寒，入肝、肺经，抗疟杀虫、清热利水，为治疟要药。青蒿苦、辛、寒，入肝、胆、肾经，退虚热、解暑热，截疟。白头翁苦、寒，入大肠、肝、胃经，清热解毒、凉血止痢、杀虫截疟。青蒿、白头翁为辅药，协助常山抗疟杀虫，兼有清热解毒、凉血止痢之效。党参甘、平，入脾、肺经，补脾益气、生津补血。党参作为佐药，期药效主要体现在以下两方面：①呵护胃气，克制前三味药苦寒伤胃的副作用；②与前三味药的祛邪功效形成互补，达到“祛邪兼扶正”的目的。该试验结果表明，常青白参颗粒的抗球虫指数为186.48，具有明显的抗球虫作用，其临床疗效优于阳性对照药地克珠利。此试验结果为后续扩大临床试验提供了可靠的依据。

参考文献

[1]刘以民，彭光林.地克珠利、盐霉素、氯苯胍对兔球虫病的影响[J].中国养兔杂志，2008（11）：25-26.

[2]宋鸿雁，邵义祥.国内兔球虫病流行现状及防控研究进展[J].畜牧与兽医，2013（9）：89-91.

[3]朱楼英，何忠平，余建国.兔球虫病药物防治的进展[J].福建畜牧兽医，2010，32（3）：35-36.

[4]许金俊.动物寄生虫病学实验教程[M].南京：河海大学出版社，2007.

摘 要：该试验旨在研究常青白参颗粒对兔球虫病的防治效果。选用（35±2）日龄仔兔80只，随机分为4个处理组，每组20只，分别为空白对照组、模型对照组、阳性药物组和中药防治组。采用人工接种球虫孢子化卵囊的方法建立实验动物模型。

关键词：常青白参颗粒；兔球虫病；化学药物；药效

中图分类号：S858.291 文献标识码：A 文章编号：2095-6835（2014）07-0123-02

兔球虫病是严重危害养兔生产的寄生虫病，是由艾美耳属的多种球虫寄生在肠道和肝脏上皮细胞内引起的一种原虫病。该病分布广、传染快、死亡率高，特别是4月龄内的仔兔最易感染，而且对不同品种、年龄的兔都具有易感性。根据感染的种类和寄生的部位不同，可分为肠型、肝型和混合型，但在临床上多见混合型。目前，对该病的控制主要采用药物防治和疫苗接种两种手段。用于防治球虫病的药物以化学药物为主，但这些化学药物的长期使用易产生耐药性，使畜产品化学药物残留而影响人类的健康。使用球虫疫苗可以防治耐药性的产生，但是，强毒苗和弱毒苗可能造成球虫病原的扩散和毒力返强，球虫基因工程疫苗目前还处于实验室研究阶段。药物的毒性和残留日益受到了人们的重视，一些毒性大、安全性低的化学合成抗球虫药物逐渐被淘汰，而且要研究生产一种新型的高效、低毒、安全的化学合成抗球虫药物十分困难，且费用昂贵。中药相对化学药物有诸多优点，比如毒副作用小、使用安全、不易产生耐药性和药物残留等。现已开发出许多有抗球虫效果的中药复方制剂和添加剂应用于临床。但由于制剂水平低下（主要以散剂为主）和组方庞大等原因，导致很多复方的临床疗效不明显。山西有丰富的党参资源，且潞党参为党参地道药材。为了对党参药材进行有效的开发和利用，课题组在中兽医药理论的指导下，结合球虫病的发病特点，精选常山、青蒿、白头翁、党参4味中药，研制成了防治兔球虫病的新型中兽药——常青白参颗粒。该试验以人工感染兔球虫卵囊疾病为模型，研究了常青白参颗粒对兔球虫病的防治效果。

1 材料与方法

1.1 实验药物

常青白参颗粒：由常山、青蒿、白头翁、党参4味中药组成，由山西省新型中兽药协同创新基地研制而成，规格为50 g/袋（1 g相当于原生药7.15 g）。

地克株利溶液：购于四川齐金动物药业有限公司，规格为100 mL∶0.5 g。

1.2 攻毒用卵囊

试验所用的卵囊分离自山西临汾某养兔场，按漂浮法收集卵囊，将收集到的卵囊经3 000 r/min离心5 min，取沉淀物置于含有质量分数为2.5%的重铬酸钾溶液的平皿中，29 ℃恒温孵育3 d，卵囊孢子化后贮存于4 ℃的冰箱中备用。

1.3 试验动物及分组设计

选用体重相近的（35±2）日龄断奶幼兔80只，经饱和盐水漂浮法检查，粪便中均无卵囊。随机分为4个处理组，每组20只，分别为空白对照组、模型对照组、阳性药物组、中药治疗组。空白对照组不感染球虫卵囊，也不用药。其余各组兔均经口感染5×105个球虫卵囊。模型对照组感染前后不用药；阳性药物组从感染当天开始，在饮水中添加地克珠利溶液（每100 mL兑水500 L），连用14 d；中药治疗组从感染当天开始，灌服常青白参颗粒（用纯净水稀释，每50 g用水1 000 mL），10 mL/只，1次/d，连用14 d。

1.4 测定指标与方法

球虫感染当天对所有的兔进行称重，随后在球虫感染14 d时，称重、剖检、取样。

1.4.1 相对增重率

相对增重率（%）=给药组或感染不投药组平均增重率/不感染不投药组平均增重×100%.

1.4.2 存活率

存活率（%）=组内存活兔/组内总兔数×l00%.

1.4.3 病变值

根据病变的严重程度，用Johnson标准进行病变记分，具体记分方法为：肠道壁无肉眼可见病变者记为0分；肠道壁有少量散在的淤血点，肠道壁不增厚，内容物正常者记为1分；肠道壁有较多的淤血点，肠道内容物明显带血，肠道壁增厚，盲肠内容物正常者记为2分；肠道有较多血液或有盲肠芯（血凝块或灰白色干酪样块状物）、肠道壁明显增厚者记为3分：肠道充满大量血液或盲肠芯很大，致使盲肠肿大或死亡者记为4分，对每只兔分别记分后算出各组的平均病变并记分，再按下式计算每组的病变值：病变值 = 组内平均病变记分×10.

1.4.4 平均卵囊值

取1 g肠道内容物于10 mL水中，充分搅拌成悬液后，用微量移液器吸取2 μL于载玻片上，在显微镜下计数卵囊数量，重复3次。用3次的平均数算出1 g肠道内容物中的卵囊数，按下式算出克卵囊数（Oocyst pergram，OPG）：

克卵囊数=l g肠道内容物的卵囊数×10. （1）

当0≤OPG<0.1时，卵囊值为0；当0.1≤OPG<1时，卵囊值为1；当1≤OPG<6时，卵囊值为10；当6≤OPG<11时，卵囊值为20；当OPG≥11时，卵囊值为40.

1.4.5 抗球虫指数

按以下方法计算药物的抗球虫指数（Anticoccidial Index，ACI）：抗球虫指数（ACI）=（相对增重率+存活率）-（病变值+平均卵囊值）。

判定标准为：ACI≥180者为高效；180>ACI≥160者为中效；160>ACI≥120者为低效；ACI<120者为无效。

由表1可知，中药治疗组的相对增重率为92.48%，存活率为100%，抗球虫指数为186.48，疗效达到高效。阳性对照药地克珠利的相对增重率为73.94%，存活率为95%，抗球虫指数为146.94，疗效仅为低效。试验结果表明，常青白参颗粒具有明显的抗球虫作用，其临床疗效优于阳性对照药地克珠利。

3 讨论

该试验除了空白对照组外，其他试验组在球虫感染后均表现出不同程度的临床症状，比如精神不振、采食量减少、排血便等。模型对照组的相对增重率为46.25%，病变值为33，存活率为75%，抗球虫指数为48.25，这表明人工感染模型成功建立。常青白参颗粒是课题组根据中兽医学理论，结合球虫病的发病特点以祛除病虫、清热解毒燥湿、凉血止血、益气补血为治法，精选常山、青蒿、白头翁、党参4味药，在现代中药研究成果的基础上，采用现代制药技术研制而成的纯中药颗粒剂。方中常山苦、辛、寒，入肝、肺经，抗疟杀虫、清热利水，为治疟要药。青蒿苦、辛、寒，入肝、胆、肾经，退虚热、解暑热，截疟。白头翁苦、寒，入大肠、肝、胃经，清热解毒、凉血止痢、杀虫截疟。青蒿、白头翁为辅药，协助常山抗疟杀虫，兼有清热解毒、凉血止痢之效。党参甘、平，入脾、肺经，补脾益气、生津补血。党参作为佐药，期药效主要体现在以下两方面：①呵护胃气，克制前三味药苦寒伤胃的副作用；②与前三味药的祛邪功效形成互补，达到“祛邪兼扶正”的目的。该试验结果表明，常青白参颗粒的抗球虫指数为186.48，具有明显的抗球虫作用，其临床疗效优于阳性对照药地克珠利。此试验结果为后续扩大临床试验提供了可靠的依据。

参考文献

[1]刘以民，彭光林.地克珠利、盐霉素、氯苯胍对兔球虫病的影响[J].中国养兔杂志，2008（11）：25-26.

[2]宋鸿雁，邵义祥.国内兔球虫病流行现状及防控研究进展[J].畜牧与兽医，2013（9）：89-91.

[3]朱楼英，何忠平，余建国.兔球虫病药物防治的进展[J].福建畜牧兽医，2010，32（3）：35-36.

[4]许金俊.动物寄生虫病学实验教程[M].南京：河海大学出版社，2007.

摘 要：该试验旨在研究常青白参颗粒对兔球虫病的防治效果。选用（35±2）日龄仔兔80只，随机分为4个处理组，每组20只，分别为空白对照组、模型对照组、阳性药物组和中药防治组。采用人工接种球虫孢子化卵囊的方法建立实验动物模型。

关键词：常青白参颗粒；兔球虫病；化学药物；药效

中图分类号：S858.291 文献标识码：A 文章编号：2095-6835（2014）07-0123-02

兔球虫病是严重危害养兔生产的寄生虫病，是由艾美耳属的多种球虫寄生在肠道和肝脏上皮细胞内引起的一种原虫病。该病分布广、传染快、死亡率高，特别是4月龄内的仔兔最易感染，而且对不同品种、年龄的兔都具有易感性。根据感染的种类和寄生的部位不同，可分为肠型、肝型和混合型，但在临床上多见混合型。目前，对该病的控制主要采用药物防治和疫苗接种两种手段。用于防治球虫病的药物以化学药物为主，但这些化学药物的长期使用易产生耐药性，使畜产品化学药物残留而影响人类的健康。使用球虫疫苗可以防治耐药性的产生，但是，强毒苗和弱毒苗可能造成球虫病原的扩散和毒力返强，球虫基因工程疫苗目前还处于实验室研究阶段。药物的毒性和残留日益受到了人们的重视，一些毒性大、安全性低的化学合成抗球虫药物逐渐被淘汰，而且要研究生产一种新型的高效、低毒、安全的化学合成抗球虫药物十分困难，且费用昂贵。中药相对化学药物有诸多优点，比如毒副作用小、使用安全、不易产生耐药性和药物残留等。现已开发出许多有抗球虫效果的中药复方制剂和添加剂应用于临床。但由于制剂水平低下（主要以散剂为主）和组方庞大等原因，导致很多复方的临床疗效不明显。山西有丰富的党参资源，且潞党参为党参地道药材。为了对党参药材进行有效的开发和利用，课题组在中兽医药理论的指导下，结合球虫病的发病特点，精选常山、青蒿、白头翁、党参4味中药，研制成了防治兔球虫病的新型中兽药——常青白参颗粒。该试验以人工感染兔球虫卵囊疾病为模型，研究了常青白参颗粒对兔球虫病的防治效果。

1 材料与方法

1.1 实验药物

常青白参颗粒：由常山、青蒿、白头翁、党参4味中药组成，由山西省新型中兽药协同创新基地研制而成，规格为50 g/袋（1 g相当于原生药7.15 g）。

地克株利溶液：购于四川齐金动物药业有限公司，规格为100 mL∶0.5 g。

1.2 攻毒用卵囊

试验所用的卵囊分离自山西临汾某养兔场，按漂浮法收集卵囊，将收集到的卵囊经3 000 r/min离心5 min，取沉淀物置于含有质量分数为2.5%的重铬酸钾溶液的平皿中，29 ℃恒温孵育3 d，卵囊孢子化后贮存于4 ℃的冰箱中备用。

1.3 试验动物及分组设计

选用体重相近的（35±2）日龄断奶幼兔80只，经饱和盐水漂浮法检查，粪便中均无卵囊。随机分为4个处理组，每组20只，分别为空白对照组、模型对照组、阳性药物组、中药治疗组。空白对照组不感染球虫卵囊，也不用药。其余各组兔均经口感染5×105个球虫卵囊。模型对照组感染前后不用药；阳性药物组从感染当天开始，在饮水中添加地克珠利溶液（每100 mL兑水500 L），连用14 d；中药治疗组从感染当天开始，灌服常青白参颗粒（用纯净水稀释，每50 g用水1 000 mL），10 mL/只，1次/d，连用14 d。

1.4 测定指标与方法

球虫感染当天对所有的兔进行称重，随后在球虫感染14 d时，称重、剖检、取样。

1.4.1 相对增重率

相对增重率（%）=给药组或感染不投药组平均增重率/不感染不投药组平均增重×100%.

1.4.2 存活率

存活率（%）=组内存活兔/组内总兔数×l00%.

1.4.3 病变值

根据病变的严重程度，用Johnson标准进行病变记分，具体记分方法为：肠道壁无肉眼可见病变者记为0分；肠道壁有少量散在的淤血点，肠道壁不增厚，内容物正常者记为1分；肠道壁有较多的淤血点，肠道内容物明显带血，肠道壁增厚，盲肠内容物正常者记为2分；肠道有较多血液或有盲肠芯（血凝块或灰白色干酪样块状物）、肠道壁明显增厚者记为3分：肠道充满大量血液或盲肠芯很大，致使盲肠肿大或死亡者记为4分，对每只兔分别记分后算出各组的平均病变并记分，再按下式计算每组的病变值：病变值 = 组内平均病变记分×10.

1.4.4 平均卵囊值

取1 g肠道内容物于10 mL水中，充分搅拌成悬液后，用微量移液器吸取2 μL于载玻片上，在显微镜下计数卵囊数量，重复3次。用3次的平均数算出1 g肠道内容物中的卵囊数，按下式算出克卵囊数（Oocyst pergram，OPG）：

克卵囊数=l g肠道内容物的卵囊数×10. （1）

当0≤OPG<0.1时，卵囊值为0；当0.1≤OPG<1时，卵囊值为1；当1≤OPG<6时，卵囊值为10；当6≤OPG<11时，卵囊值为20；当OPG≥11时，卵囊值为40.

1.4.5 抗球虫指数

按以下方法计算药物的抗球虫指数（Anticoccidial Index，ACI）：抗球虫指数（ACI）=（相对增重率+存活率）-（病变值+平均卵囊值）。

判定标准为：ACI≥180者为高效；180>ACI≥160者为中效；160>ACI≥120者为低效；ACI<120者为无效。

由表1可知，中药治疗组的相对增重率为92.48%，存活率为100%，抗球虫指数为186.48，疗效达到高效。阳性对照药地克珠利的相对增重率为73.94%，存活率为95%，抗球虫指数为146.94，疗效仅为低效。试验结果表明，常青白参颗粒具有明显的抗球虫作用，其临床疗效优于阳性对照药地克珠利。

3 讨论

该试验除了空白对照组外，其他试验组在球虫感染后均表现出不同程度的临床症状，比如精神不振、采食量减少、排血便等。模型对照组的相对增重率为46.25%，病变值为33，存活率为75%，抗球虫指数为48.25，这表明人工感染模型成功建立。常青白参颗粒是课题组根据中兽医学理论，结合球虫病的发病特点以祛除病虫、清热解毒燥湿、凉血止血、益气补血为治法，精选常山、青蒿、白头翁、党参4味药，在现代中药研究成果的基础上，采用现代制药技术研制而成的纯中药颗粒剂。方中常山苦、辛、寒，入肝、肺经，抗疟杀虫、清热利水，为治疟要药。青蒿苦、辛、寒，入肝、胆、肾经，退虚热、解暑热，截疟。白头翁苦、寒，入大肠、肝、胃经，清热解毒、凉血止痢、杀虫截疟。青蒿、白头翁为辅药，协助常山抗疟杀虫，兼有清热解毒、凉血止痢之效。党参甘、平，入脾、肺经，补脾益气、生津补血。党参作为佐药，期药效主要体现在以下两方面：①呵护胃气，克制前三味药苦寒伤胃的副作用；②与前三味药的祛邪功效形成互补，达到“祛邪兼扶正”的目的。该试验结果表明，常青白参颗粒的抗球虫指数为186.48，具有明显的抗球虫作用，其临床疗效优于阳性对照药地克珠利。此试验结果为后续扩大临床试验提供了可靠的依据。

参考文献

[1]刘以民，彭光林.地克珠利、盐霉素、氯苯胍对兔球虫病的影响[J].中国养兔杂志，2008（11）：25-26.

[2]宋鸿雁，邵义祥.国内兔球虫病流行现状及防控研究进展[J].畜牧与兽医，2013（9）：89-91.

[3]朱楼英，何忠平，余建国.兔球虫病药物防治的进展[J].福建畜牧兽医，2010，32（3）：35-36.

[4]许金俊.动物寄生虫病学实验教程[M].南京：河海大学出版社，2007.