五羟色胺转运体启动子区基因多态性、应激事件与抑郁症的相关性*

靳自斌 赵后锋 朱相华 耿德勤 乔娟

五羟色胺转运体启动子区基因多态性、应激事件与抑郁症的相关性*

靳自斌1赵后锋2朱相华2耿德勤3乔娟1

目的探讨5－羟色胺转运体启动子区(5－HTTLPR)基因多态性与抑郁症的关系以及基因型、应激事件对抑郁症状的影响。方法运用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态性(PCR－RFLP)测定100例抑郁症患者(研究组)和100例健康对照者(对照组)的5－HTTLPR基因多态性的分布频率。应用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评定抑郁症患者的严重程度，应用生活事件量表(LES)评定抑郁症患者的应激事件。结果两组5－HTTLPR基因型频率和等位基因频率比较差异均无统计学意义(P＞0．05);研究组SS基因型的HAMD总分大于LL、LS基因型患者(P＜0．05);SS基因型患者焦虑/躯体化、核心因子、睡眠因子分高于SL及LL基因型患者(P＜0．05);5－HTTLPR基因多态性与应激事件的交互作用对抑郁症的严重程度存在影响(P=0．002)。结论5－HTTLPR基因多态性可能与抑郁症的发病无关，但与应激事件的交互作用影响抑郁症严重程度，其基因型与抑郁症患者的临床症状有关。

抑郁症5－羟色胺转运体基因多态性应激事件

目前关于5－羟色胺转运体基因启动子区多态性(5－HTTLPR)与抑郁症之间的关系一直是研究的焦点，但有关的研究存在不少相互矛盾的结果。Scott J等［1］随访研究认为，重大的应激事件应激或长期存在一定程度的应激事件应激常常是许多抑郁症患者症状反复并持续存在的重要原因。关于5－HTTLPR与生活应激联合作用对抑郁症患者的影响研究较少，本研究将5－HTTLPR基因多态性，应激事件与抑郁症相结合探讨抑郁症发病与两者之间的关系。

1 对象与方法

1．1 对象研究组来自于2012年12月～2014年1月徐州市东方人民医院门诊及住院的抑郁症患者。入组标准:(1)符合国际疾病分类第十版(ICD－10)中对抑郁发作的诊断标准;(2)17项汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分≥17分;(3)入组前至少两周内未服药;(4)右利手。排除标准:排除由器质性疾病或其他精神疾病引起的继发性抑郁状态;排除其他精神障碍，头部外伤史及神经系统疾病，精神活性物质及各种非成瘾性物质滥用者，近1个月使用过电抽搐治疗或经颅磁刺激治疗者。对照组来自于徐州市东方人民医院的医护人员、实习同学、保洁人员、来院体检的健康人群。排除有抑郁症和其他精神疾病家族史者，并排除神经系统疾病、明确的躯体疾病、药物或其他精神活性物质依赖史。以上两组均知情同意本研究，并经医院伦理委员会的同意。

1．2 方法

1．2．1 样本采集和储存每名患者清晨空腹采血，取空腹血时间为早上8点，一次抽取肘静脉血5 ml，用EDTA抗凝的真空采血管采血1管，采血后1 h内将血标本4℃离心(3000rpm)15 min，分离血浆后放入－70℃冰箱内储存整批待检;对照组以同样方法采血并保存。

1．2．2 基因型检测(1)DNA的提取:采用DNA提取试剂盒，严格按说明进行。所采用的引物为:正向5'－ATGCCAGCACCTAACCCCTAATGT－3'，反向5'－GGA CCGCAAGGTGGGCGGGA－3'，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，为冻干粉，使用前加双蒸水，使其浓度为20 mol/L，－20℃保存。(2)PCR反应体系:容量为20 μl，反应体系含50 ng基因组DNA，10 pmol引物，1U TaqDNA酶，2 μl 10xBuffer缓冲液，200 mol/L dNTPs。(3)PCR反应条件:即94℃预变性2 min，继94℃变性60 s，60℃退火2 min，72℃延伸2 min，共35个循环，72℃延伸4 min，然后降至4℃，4℃冰箱保存待检。(4)PCR产物基因型鉴定:运用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)技术进行检测。将PCR产物于3%琼脂糖中电泳分离30 min，在紫外光下检视各条带，以100 bp DNA ladder marker为标准物检查各个片段大小。

1．2．3 量表评定(1)一般状况调查:采用自制的一般状况调查量表收集入组者的相关资料，内容包括:年龄、性别、受教育程度、家族史、病前性格等。(2) HAMD:抑郁症严重程度使用17项HAMD评定，由两名经过严格评定操作培训精神科主治医师评定，一致性监测的Kappa=0．83。HAMD量表中第4、5、6项条目均为睡眠障碍相关条目，分别为入睡困难、睡眠不深和早醒。1、7、8、14条目为迟滞因子，由抑郁情绪、工作和兴趣、阻滞和性症状等4项组成;l、2、7、8、9、10项为Maier症状条目，由抑郁情绪、有罪感、工作和兴趣、阻滞、激越、精神性焦虑等6项组成;10、11、12、13、15、17为焦虑/躯体化条目，由精神性焦虑、躯体性焦虑、胃肠道症状、全身症状、疑病和自知力等5项组成;l、2、3、4、7为核心条目，由抑郁情绪、有罪感、自杀、入睡困难、工作和兴趣等5项组成。(3)生活事件量表(Life Event Scale，LES):评定应激事件，采用了我国常见的48条应激事件，量表由患者自行答题完成，包括家庭生活问题(28条)，工作学习问题(13条)，社交问题及其他方面的相关问题(7条)。LES分值越高说明受试者的压力越大。量表由患者按指导语自行答题完成，评定人员要记录应激事件发生的次数及影响程度。

1．2．4统计学方法采用SPSS13．0统计软件分析，计量资料用均数±标准差表示，两组比较采用独立样本t检验，两组以上比较参用单因素方差分析，组间相互比较采用q检验，多元回归分析分析影响抑郁症的相关因素，计数资料采用χ2检验，P＜0．05为具有统计学意义。

2 结果

2．1 HTTLPR基因多态性Hardy－Weinberg遗传平衡性检验研究组和对照组中LL、LS、SS基因型分布频率与期望频率的差异无统计学意义(χ2=2．32，P= 0．31;χ2=5．74，P=0．06)。见表1。符合H－W平衡定律，HTTLPR群体基因遗传平衡。

表15 －HTTLPR基因多态性遗传平衡检测［n(%)］

2．25 －HTTLPR基因多态性检测比较两组5－HTTLPR基因型频率和等位基因频率的差异均无统计学意义(P＞0．05)。见表2。

2．3 HAMD总分及各因子分与基因型的关系利用方差分析对两组所有受试者的HAMD总分与每位受试者的基因型进行分析，结果表明3组基因型HAMD总分比较，差异有统计学意义(F=6．238，P=0．002)，其中SS型患者在睡眠、核心因子和焦虑/躯体化评分显著高于LS及LL型患者(F=3．365，P=0．016;F= 5．371，P=0．001;F=6．452，P=0．001)。见表3。

表3 HAMD总分及因子分与5－HTTLPR基因型的关系()

表3 HAMD总分及因子分与5－HTTLPR基因型的关系()

HAMDLLLSSSF值P值总分25．98±5．2228．53±4．6832．05±5．716．2380．002核心因子10．43±2．6711．50±2．4812．45±2．195．3710．001迟滞8．09±1．719．05±1．599．56±1．460．8300．410睡眠3．52±1．044．01±1．075．22±1．583．3650．016焦虑/躯体化6．85±2．047．57±2．539．24±2．156．4520．001

2．4 应激事件与5－HTTLPR基因型的交互作用对抑郁程度的影响采用逐步回归方程分析5－HTTLPR基因型、应激事件及两者相互作用对抑郁症严重程度的影响，结果表明5－HTTLPR基因型与应激事件的交互作用对抑郁症严重程度存在影响，差异有统计学意义(R2=0．645，F=19．23，P=0．002)。见表4。

表4 应激事件、基因型及其交互作用与抑郁症的相关性

3 讨论

5－HTTLPR是抑郁症历年来涉及次数最多的候选基因位点。国内外大量的研究提示:S/S等位基因和抑郁症发病相关［2，3］也有很多研究显示5－HTTLPR与抑郁症不相关［4，5］。结果有很多矛盾之处，本研究结果显示，研究组和对照组的5－HTTLPR基因型频率和等位基因频率都无显著性差异，说明5－HTTLPR基因多态性与抑郁症的发病不存在直接的相关性。不同基因型患者的HAMD评分不同，其中SS基因型评分最高，LS次之，LL最低，表明5－HTTLPR基因多态性与抑郁症的严重程度相关。

本研究显示SS基因型不但影响抑郁症患者的严重程度，还与抑郁患者的核心症状、睡眠和焦虑/躯体化症状有关，而对Maire因子及迟滞因子的影响相对较小。这一结果与国内部分研究结果一致，部分研究结果不一致，宋亚静等［6］的研究表明S等位基因可能是抑郁症患者自杀的危险基因，SS基因型人群可能是抑郁症患者自杀的危险人群，特别是携带S等位基因的重度抑郁症患者更易自杀。张莉等［7］研究5－HTTLPR基因多态性等位基因和基因型分别与抑郁症患者HAMD睡眠障碍的3个条目(入睡困难、睡眠不深、早醒)评分及总因子分均相关。考虑不一致的因素可能有:抑郁症及对照组入组评估是否严格、抑郁症的诊断标准和诊断准确程度、基因检测结果是否可靠、统计方法是否正确使用等。关于抑郁症与应激因素的相关性，也有很多让人无法解释的地方，比如说:为什么不同的两个人，即使受到相同的刺激，有的人会发病，有的人不会发病，也就引起人们对遗传与应激交互作用的研究，2009年，Risch N等［8］在分析了14项相关研究的一项Meta分析后报道:无论是5－HTTLPR单独作用，还是其他应激事件交互作用，均不能影响抑郁症的发病。国内，李忻蓉［9］在研究中发现，纳入抑郁症和正常对照各239例，5－HTT基因多态性与人格、应激事件、应对方式和社会支持间均存在交互作用。本研究结果亦证实5－HTTLPR基因型及其与应激事件的交互作用可影响抑郁症的严重程度。Caspi A等［10］研究发现5－HTTLPR基因多态性在有童年应激事件的交互作用下才会增加患抑郁症的危险。本研究发现:5－HTTLPR基因多态性与应激事件的交互作用影响抑郁症的严重程度。

综上所述，抑郁症发病机制非常复杂。大多数的研究只涉及一种基因型，而未深入考虑到多个基因之间和基因与应激事件，人格特征交互作用对抑郁症的影响，而这些因素综合作用将是解释抑郁症发病机制的新趋势。本研究将继续扩大样本量，开展多中心、多个基因型的研究，期望能够对抑郁症的遗传学研究提供理论依据。

［1］Scott J，Eecleston D，Boys R．Can we predict the persistence of depression［J］．Br J Psychiatry，1992，161:633－637

［2］张兰，宋亚静，殷宏，等．5－羟色胺转运体基因多态性和抑郁症的相关性研究［J］．临床荟萃，2008，23:1300－1302

［3］曹美群，胡随瑜，张春虎，等．5－羟色胺转运体、G蛋白B3亚单位基冈多态性与抑郁症的相关性研究［J］．中国临床心理学杂志，2007，15:318－320，317

［4］范娟，乇立伟，禹顺英，等．5－羟色胺转运体基因多态性与青少年抑郁症的关联研究［J］．上海精神医学，2007，19: 88－91

［5］Chan F，Lanctst KL，Feinstein A，et al．The serotonin transporter polymorphisms and major depression following traumatic brain injury［J］．Brain Inj，2008，22(6):47l－479

［6］宋亚静，张兰，殷宏，等．5－羟色胺转运体基因多态性和抑郁症的发病、性别、严重程度及自杀行为的相关性［J］．西安交通大学学报，2008，29(6):674－678

［7］张莉，徐勇，孙燕，等．5－羟色胺转运体基因多态性与抑郁症睡眠障碍数量性状的相关研究［J］．中国神经精神疾病杂志，2009，35(4):234－237

［8］Risch N，Herrell R，Lehner T，et al．Interaction between the serotonin transporter gene(5－HTTLPR)，stressful life events，and risk of depression:a meta－analysis［J］．JAMA，2009，301 (23):2462－2471

［9］李忻蓉．5－HT基因，社会心理因素及其交互作用与重性抑郁症的关联研究［D］．太原:山西医科大学，2007

［10］Caspi A，Sugden K，Moffitt TE，et al．Influence of life stress on depression:moderation by a polymorphism in the 5－HTT gene［J］．Science，2003，301(5631):386－389

Correlation of polymorphism of 5-HT transporter gene-linked promoter region，stress events with depression．

JIN Zibin，ZHAO Houfeng，ZHU Xianghua，et al．Dongfang Hospital，Xuzhou Medical College，Xuzhou 221004，China

ObjectiveTo explore the relationship between polymorphism of 5－HT transporter gene－linked promoter region (5－HTTLPR)and depression，to explore the effect of genotype and stress events on depression．MethodsThe distribution of 5－HTTLPR polymorphism was detected by polymerase chain reaction－restriction fragment length polymorphism(PCR－RFLP)in100 patients with depression and 100 healthy controls．Hamilton depression rating scale(HAMD)was used to evaluate the severity of depression and the life events scale(LES)was used to assess the stress events．ResultsThere were no significant differences in 5－HTTLPR genotype frequency and allele frequency between depression group and control group(P＞0．05)．Score of HAMD in depressive patients with SS genotype was significantly higher than those with LL and LS genotype(P＜0．05)．Factor scores of anxiety/somatization，core factor and sleep factor in depressive patients with SS genotype were significantly higher than those with SL and LL genotype(P＜0．05)．The interaction between 5－HTTLPR polymorphism and life events affected the severity of depression significantly(P=0．002)．ConclusionThe polymorphism of 5－HTTLPR may not be associated with the pathogenesis of depression，but the interaction of 5－HTTLPR gene polymorphism with stress events may influence the severity of depression．And the genotypes of 5－HTTLPR are associated with different depressive symptoms．

Depression5－hydroxytrypamine transporterGene polymorphismStress event

R749．4

A

1009－7201(2014)－06－0434－03

10．3969/j．issn．1009－7201．2014．06．011

2014－10－20)

江苏省徐州市科技指导性计划项目(编号:XZZD1267)

1．221004江苏徐州，徐州医学院附属东方人民医院2．江苏省徐州市东方人民医院心研所3．徐州医学院附属医院

乔娟，E－mail:xzdfqj@163．com