食管鳞癌组织中骨桥蛋白的表达及其临床意义

任民柱

作者单位：453000 新乡 河南省新乡市中心医院放疗科

临床研究

食管鳞癌组织中骨桥蛋白的表达及其临床意义

任民柱

作者单位：453000 新乡 河南省新乡市中心医院放疗科

目的 研究骨桥蛋白（osteopontin，OPN）在食管鳞癌患者组织中的表达及临床意义。方法分别选取120例食管鳞癌癌组织、46例癌旁不典型增生组织和120例正常食管黏膜组织，分别用免疫组化法检测各种组织中OPN蛋白的表达情况，并分析其临床意义。 结果 在食管鳞癌癌组织、癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织中，OPN的阳性表达率分别为76.67%（92/120）、34.78%（16/46）和0（0/120）。食管鳞癌的临床分期、淋巴结转移、癌组织的浸润深度均与OPN蛋白的阳性表达明显相关（P均＜0.05）。食管鳞癌组织中OPN蛋白阳性表达组与阴性表达组患者的5年生存率分别为10.7%及28.6%（P＜0.05）。 结论 OPN蛋白在食管鳞癌的发生、发展中起到十分重要的作用，检测OPN蛋白的表达具有重要临床意义。

食管肿瘤；骨桥蛋白；临床意义

河南省北部是我国食管癌的高发区，近年来该病的发病率及生存率均无明显下降。因此，制定有效的预防和治疗方案，寻找能够提示食管癌发病和判断预后的分子标志物可能有助于提高治疗的有效率以及患者生存率。骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是人体内重要的钙结合性磷酸化糖蛋白，在肿瘤发生及发展的多个环节中，OPN起到十分重要的作用。本实验探讨OPN在食管鳞癌组织中的表达情况，并分析OPN的表达与食管鳞癌临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料

120例均为河南新乡市中心医院2007年6月至2008年12月收治的食管鳞癌患者，男性56例，女性64例，年龄43～77岁，平均年龄62.05岁。分别采集每例患者食管鳞癌癌组织、癌旁不典型增生组织（距肿瘤组织边缘3 cm以内）和正常食管黏膜组织（距肿瘤组织3 cm以上）。术前所有患者均无放化疗和其他治疗史。截至2013年12月31日，共随访完整资料患者107例。13例患者因多种原因失访。

1.2 实验方法

首先在光学显微镜下将全部标本进行病理学诊断，然后筛选出120例食管鳞癌癌组织、46例癌旁不典型增生组织、120例食管手术残端（距肿瘤组织3 cm以上）正常食管黏膜组织。随后按正常的实验步骤进行免疫组化二步法，石蜡脱蜡水化，抗原修复，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。OPN用己知阳性的组织作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。OPN兔抗人多克隆抗体和免疫组化试剂盒均购于福州迈新试剂公司。

1.3 结果判定

染色结果由2名病理科医生分别独立观察所有切片，结果不一致时，采取协商统一的原则。阳性判定标准：细胞质均染成棕褐色或棕黄色者判定为阳性细胞。⑴按细胞质的染色强度计分：无着色计1分，染成淡黄色计2分，染成棕黄色计3分；⑵按阳性细胞数计分：小于或等于总数的25%计1分，25%～75%计2分，大于75%计3分。以上两者得分相乘，大于7分为阳性，小于7分为阴性。

1.4 统计学分析

用SPSS 17.0统计学软件处理分析实验数据。χ2检验用于计数资料的分析比较，单因素生存分析采用Kaplan-Meier法，Log-rank检验用于组间两两比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 OPN蛋白在食管鳞癌各种组织中的阳性表达

在食管鳞癌癌组织中OPN蛋白的表达明显，其阳性表达率为76.67%（92/120）；在癌旁不典型增生组织中OPN蛋白也有不同程度的表达，其阳性表达率为34.78%（16/46）；在正常食管黏膜组织中OPN蛋白的表达缺失（0/120）。细胞质呈棕黄色为免疫组化染色的阳性部位，见图1。OPN蛋白在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌癌组织中表达的差异均有统计学意义（P均＜0.05）。见表1。

表1 OPN蛋白在食管鳞癌癌组织、癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织中的表达（n）

图1 OPN蛋白在食管鳞癌癌组织、癌旁不典型增生组织中的阳性表达（SP×100）

2.2 OPN蛋白在食管鳞癌癌组织中的表达与临床病理特征的关系

⑴在食管鳞癌癌组织中肿瘤未侵及外膜（T1、T2）者OPN蛋白的阳性表达率为52.38%（22/42），侵及外膜以外区域（T3、T4）者的阳性表达率为89.74%（70/78）（P＜0.05）；⑵在食管鳞癌癌组织中有淋巴结转移者OPN蛋白的阳性表达率为96.55%（56/58），无淋巴结转移者的阳性表达率为58.06%（36/62）（P＜0.05）。⑶TNM分期为早期（玉期+Ⅱ期）者OPN的阳性表达率为61.11%（44/72），晚期（Ⅲ期+Ⅳ期）者的阳性表达率为100%（48/48）（P＜0.05）。OPN蛋白的表达率与患者性别、年龄、肿瘤直径及分化程度等均无关（P均＞0.05）。见表2。

2.3 OPN蛋白的阳性表达与预后的关系

经Kaplan-Meier单因素生存分析，结果显示食管鳞癌癌组织中OPN蛋白阳性表达患者的5年生存率明显低于OPN阴性表达的患者（分别为10.7%及28.6%），经Log-rank检验，差异有统计学意义（χ2=6.325，P＜0.05），提示OPN蛋白的表达与食管鳞癌患者的生存率有关。其生存曲线见图2。

表2 OPN蛋白在食管鳞癌癌组织中的表达与临床病理特征的关系（n）

图2 食管鳞癌癌组织中OPN蛋白表达阳性组与OPN蛋白表达阴性组患者的生存曲线

3 讨论

OPN是分子量为441kD的分泌型糖基化磷蛋白，是一种重要的细胞外基质非胶原蛋白，由近300个氨基酸残基组成，其中丝氨酸、天门冬氨酸及谷氨酸残基占很高的比例。在细胞外基质的非胶原蛋白中起到非常重要的作用。OPN具有明显的抑制肿瘤细胞凋亡的作用，可以通过与磷脂酞肌醇3激酶信号途径中的蛋白激酶B的结合，调节体内物质代谢，抑制细胞凋亡［1］，同时OPN还有促进肿瘤血管增生和免疫调节的作用［2，3］，从而进一步促进肿瘤的发展。OPN的受体家族包括CD44受体和整合素受体，CD44受体是黏附分子，主要介导细胞与基质以及细胞与细胞之间的相互作用。由于OPN蛋白中的RGD（Arg-Gly-Asp，RGD）序列容易与整合素受体结合，之后再与CD44结合，介导成纤维细胞、T细胞和骨髓细胞的趋化作用与黏附作用，结果显著提高肿瘤细胞的黏附能力，从而引起癌组织中OPN阳性率升高［4］。有研究显示在胃癌组织中OPN蛋白的阳性表达率为72.5%（29/40），且随肿瘤病理分级的升高其阳性表达率也升高［5］。这与本实验的研究结果一致。OPN蛋白在食管鳞癌癌组织中的阳性表达率高于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织。肿瘤TNM分期与OPN蛋白的表达水平密切相关，食管鳞癌癌组织分期越晚，OPN蛋白的表达越高。

另外，本研究结果表明淋巴结转移与OPN蛋白的表达密切相关。有淋巴结转移者OPN蛋白的表达明显升高。表明OPN蛋白表达阳性的肿瘤细胞较阴性者具有更高的转移潜能，可趋向性地运动到其他相邻淋巴结及器官，形成更多的转移灶。

本研究结果显示食管鳞癌组织浸润越深，OPN蛋白的表达越高。这是因为在肿瘤浸润、转移过程中OPN发挥了重要的作用，特别是在具有侵袭和转移特性的肿瘤细胞中其表达尤为明显［6］。张惠忠等［7］的研究显示在食管鳞癌癌组织中OPN的阳性表达率为100%（80/80），与食管鳞癌的淋巴结转移以及分化程度都有密切关系。本研究中OPN蛋白在低分化食管鳞癌的表达高于中-高分化者，但差异无统计学意义（P＞0.05），分析可能与样本量较小有关。

本实验显示在食管鳞癌发展过程中可能会伴随OPN的过度表达，表现为超出常规的分化、过度增殖和凋亡极度减少，进一步引起肿瘤细胞增殖和分化出现异常，产生癌变，从而引起肿瘤的发生。

有研究显示，OPN蛋白表达阳性的乳腺癌、胃癌及肝癌患者，其生存率均低于阴性表达组的患者［8～10］。刘金耿等［11］报道食管癌中OPN蛋白的表达水平越高，患者的术后生存时间越短，这与本实验的研究结果基本一致。我们认为，随着食管肿瘤的发展，OPN蛋白高表达的细胞更趋向恶性的生物学行为，表现为具有更强的侵袭性和更差的预后。目前，关于OPN与食管癌预后的相关报道相对较少，还没有一致认同的结论。本实验结果显示食管鳞癌患者中OPN蛋白表达阳性的患者比阴性表达者有更低的5年生存率，差异有统计学意义（P＜0.05）。

OPN蛋白及其受体能被其抗体或合成的多肽所抑制，OPN的受体CD44已被用作多种肿瘤治疗的靶点，故OPN蛋白在食管鳞癌的发生、发展中具有重要作用，在目前尚缺乏有效预测食管癌预后指标的背景下，OPN的检测将提供一个新的思路和方法。

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［2014-08-16收稿］［2014-09-15修回］［编辑 阮萃才］

Expression and clinical significance of osteopontin in esophageal squamous carcinoma

Ren Min-zhu（Department of Radiotherapy，Xinxiang Centre Hospital of Henan Province，Xinxiang 453000，P.R.China）

Objective To analyze the expression and clinical significance of osteopontin（OPN）in esophageal carcinoma.Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of OPN in normal esophageal tissue and in 120 specimens of esophageal carcinoma tumor tissue and tumor-adjacent tissue showing atypical hyperplasia.Results OPN expression density was lowest in normal esophageal tissues（0），higher in tumor-adjacent tissues showing atypical hyperplasia（34.78%）and highest in esophageal carcinoma tissues（76.67%）.Expression of OPN protein correlated with tumor TNM stage，lymph node metastasis and infiltrative depth of esophageal squamous cell carcinoma（P＜0.05）.The five-year survival rate was significantly higher in patients negative for OPN expression than in those positive for OPN expression（28.6%vs 10.7%，P＜0.05）.Conclusion Studying OPN expression may generate insights into the pathogenesis，invasion and metastasis of esophageal carcinoma，and it may provide tools for predicting the prognosis of patients with the disease.

Esophageal neoplasm；Osteopontin；Clinical significance

R735.1

A

1674-5671（2014）04-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2014.04.13