p21与PCNA在子宫内膜癌中表达水平及相关性研究*

孙 炯 杨留才 李仕红 徐红涛

(1.亭湖区人民医院妇产科,江苏 盐城 224000； 2 盐城卫生职业技术学院, 江苏 盐城 224006)

子宫内膜癌是一种比较常见的女性生殖系统恶性肿瘤，其发病率仅次于宫颈癌，占女性生殖系统恶性肿瘤发病率的20%以上，并且发病率逐年上升[1]。研究表明，恶性肿瘤的发生和细胞周期的失控存在密切关系，而细胞因子表达量的紊乱往往直接导致了细胞周期的紊乱，甚至出现无限制生长，并且发展为肿瘤[2]。本次研究通过免疫组化染色的方法检测p21Cipl/Wafl与增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen ,PCNA)在子宫内膜癌中的表达水平，并研究两者之间是否存在相关性，现报告如下。

1 资料和方法

1.1病例资料 选取自2009年1月至2012年12月在我院就诊并确诊为子宫内膜癌患者268例作为实验组，年龄35～72岁，平均年龄为(52.31±17.31)岁。临床Ⅰ期患者有83 例，Ⅱ期有51例，Ⅲ期有69 例，Ⅳ期有65例。按照病理类型分为内膜样腺癌、腺鳞癌、透明细胞癌、乳头状腺癌，其中内膜样腺癌138例，腺鳞癌63例，透明细胞癌36例，乳头状腺癌31例。Ⅰ+Ⅱ期患者均予以行全子宫、双侧附件、大网膜、阑尾切除和腹膜后淋巴结清扫术，Ⅲ+Ⅳ期患者行肿瘤减灭术。肿瘤分化程度按FIGO判定的三级分级标准，其中高分化(G1)76 例，中分化(G2)124例，低分化(G3)68 例。另外选取同期在我院门诊刮宫正常子宫内膜组织80例作为对照组，平均年龄(53.26±17.43)岁。对照组人群经过各项检查排除了恶性肿瘤的可能。实验组与对照组的年龄均无统计学差异(P>0.05)。

1.2免疫组化方法 所有标本常规脱水包埋，5 μm连续切片，石蜡切片常规脱蜡水化，微波修复5 min，3%过氧化氢孵育10 min去除内源性过氧化物酶，加羊抗人PCNA一抗( 1∶200, 美国Santa Cruz公司) ，羊抗人p21一抗(1∶200, 美国Santa Cruz公司)，室温过夜，PBST清洗，加辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgG二抗( 1-100，美国Santa Cruz公司)室温孵育40 min；PBST清洗，加Elite-AP(英国Vector公司)孵育15min，PBST清洗，DAB底物液(英国Vector公司)显色20 min，苏木素复染10 s，常规酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，待干燥后光镜下观察摄片。

1.3染色结果判断 染色结果显示PCNA定位于胞核中，p21定位于胞浆中，以细胞核或者细胞浆出现棕黄色染色作为阳性。在高倍镜下随机选取5个视野，每个视野计数200个细胞，根据阳性细胞在全部组织细胞中所占比例判定实验结果，p21以阳性细胞数占全部组织细胞数比例<10%判断为(-)，阳性细胞数占全部组织细胞数比例≥10%判断为(+)；PCNA阳性细胞数占全部组织细胞数比例<50%判断为低增殖，阳性细胞数占全部组织细胞比例阳性细胞数≥50%判断为高增殖。

1.4统计学方法 所有的数据使用SPSS13.0统计学软件进行分析，各组样本之间的比较采用χ2检验进行统计分析，PCNA和p21之间的相关关系采用Spearman等级相关检验进行统计分析，以P≤0.05作为有统计学意义。

2 结 果

2.1实验组与对照组PCNA和p21的表达比较 见表1。

表1 实验组与对照组PCNA和p21表达情况比较

2.2子宫内膜癌临床病理指标与p21和PCNA表达的关系 见表2。

表2 子宫内膜癌临床病理指标与p21和PCNA表达情况的关系

2.3p21和PCNA表达的相关性 p21和PCNA在子宫内膜癌组织中的表达呈负相关(r=-0.79，P<0.05)，见表3。

表3 p21和PCNA表达的相关性

3 讨 论

本次研究通过检测p21和PCNA在子宫内膜癌以及正常组织中的表达情况，并且检测二者之间的相关性。研究结果发现p21在子宫内膜癌中的阳性表达率低于正常组织，差异具有统计学意义(P<0.05)；同时，PCNA在子宫内膜癌的高增殖率高于正常组织，差异也具有统计学意义(P<0.05)。通过研究子宫内膜癌临床病理指标和p21、PCNA的表达之间的关系，结果同样发现，PCNA和p21的表达和年龄无关，但是在较晚临床分期、较低分化和有淋巴结转移患者的p21的阳性表达率低于较早临床分期、较高分化和没有淋巴结转移的患者，并且差异具有统计学意义(P<0.05)。而PCNA在较早临床分期、较高分化和没有淋巴结转移的患者中的高增殖率低于较晚临床分期、较低分化和有淋巴结转移患者并且差异具有统计学意义(P<0.05)。

p21是一种重要的细胞周期调控因子，研究表明p21在多种恶性肿瘤特别是实体肿瘤如胃癌[3]、食管癌[4]的表达出现异常，主要表现为表达水平的下调。p21是位于p53基因下游的细胞周期素依赖性激酶抑制因子，p21通过和p53结合，阻止DNA损伤后组织细胞进入S期，减少了受损DNA的复制和积累，减少恶性肿瘤的发生，而在恶性肿瘤中，p21的表达量明显下调，导致了细胞增殖明显增加[5]。上述研究的结果表明，p21的表达水平的改变可能和恶性肿瘤的发生有关。

研究表明，PCNA有细胞核合成是DNA聚合酶δ的辅助蛋白，并且主要定位于细胞核内发挥作用[6]。在细胞周期中PCNA表达水平从G1期出现上调，到S期PCNA的表达水平达到最顶峰，到G2期PCNA的表达水平开始下调[7]，同时，PCNA主要在增殖细胞中表达，因此PCNA可以作为肿瘤增殖状态一个重要的指标[8]。国内学者韦瑞红等人[9]通过研究PCNA在子宫内膜癌细胞中的表达情况，结果发现癌细胞的PCNA阳性表达率明显高于正常直肠黏膜组织，和我们的研究结果基本一致。

此外，我们的研究结果还显示，PCNA与p21在子宫内膜癌中的阳性表达率呈负相关，通过对乳腺癌肿瘤的研究表明，p21的阳性表达率与肿瘤分化程度相关，p21的表达越低，肿瘤分化越差，PCNA 的阳性表达率也越高，而肿瘤的增殖活性越高[10]，和我们的研究结果也基本一致。

我们的研究结果表明，PCNA和p21在子宫内膜癌的组织中高表达，并且其表达水平和临床分期、病理分级、以及淋巴结转移相关；PCNA和p21在子宫内膜癌组织中的表达呈负相关，提示PCNA和p21共同促进子宫内膜癌的发生和发展。

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