AVE-764B尿沉渣分析仪红细胞、白细胞计数评价及影响因素

姚晓宾,王 丹,马卫国,曹伟娟,盛家和

(河南省肿瘤医院检验科,河南郑州450008)

AVE-764B尿沉渣分析仪红细胞、白细胞计数评价及影响因素

姚晓宾,王 丹,马卫国,曹伟娟,盛家和

(河南省肿瘤医院检验科,河南郑州450008)

目的 评价AVE-764B尿沉渣分析仪计数红细胞、白细胞的准确性及存在的干扰因素,从而为仪器检测的结果审核提出参考建议。方法 选取抗凝全血倍比稀释和临床尿液标本作为检测对象,使用AVE-764B尿沉渣分析仪和Fuchs-Rosenthal血细胞计数盘对样本中红细胞、白细胞进行定量计数,分析结果差异及干扰因素。结果血液和尿液标本红、白细胞计数,仪器和手工法差异无统计学意义,但是血液稀释标本未加冰醋酸破坏红细胞时,白细胞计数两种方法差异显著,仪器法计数结果偏高;当尿液中其他颗粒成分镜检大于1+时,两种方法计数结果差异显著,仪器法计数结果偏高。结论 AVE-764B尿沉渣分析仪对红、白细胞计数准确可靠,但是标本中有大量其他颗粒成分存在时计数结果明显偏高,此时结果审核可考虑手工计数或手工半定量计数。

AVE-764B;尿沉渣分析仪;红细胞;白细胞;颗粒成分

随着计算机和生物技术的发展和广泛应用,尿液有形成分分析仪的自动化得到迅速发展。目前为止尿液有形成分分析仪大致分为两种,一种是流式细胞术结合电阻抗或化学染色等综合技术进行定量分析,以日本东亚医疗电子有限公司UF-100尿沉渣分析仪为代表[1];另一种是自动化的显微镜检取图,计算机模拟分析,得出定量结果。具有代表性的仪器是2002年美国国际遥控影像系统有限公司(Interna-tional Remote imaging systems,IRIS)推出的IQ-200尿沉渣检测工作站,在尿液有形成分定量分析方面得到国际认可[2]。2002年8月,国内长沙爱威公司将“机器视觉”技术应用于临床显微镜镜检,取得了尿液有形成分自动化分析国内自主研发的突破,尿液标本经自动进样、初筛、低倍和高倍镜检,取图后利用机器视觉的图像处理系统进行自动判别和定量分析。

流式细胞术是对颗粒成分的直接计数,实现了尿液有形成分真正意义上的定量计数。但是尿液存在成分复杂,缺乏稳定的酸碱度和渗透压,随时间和周围环境介质的变化,有形成分形态多易发生改变,影响计数的准确性[3]。图像采集技术在这方面具有优势,AVE尿沉渣分析仪逐渐被推广和应用,其对于尿液中有形成分的定量分析价值得到了市场认可。马骏龙等[4]认为AVE-763具有很高的临床应用价值。袁舟亮等[5]比较了AVE-763B尿沉渣分析仪对红细胞、白细胞、上皮细胞、管型四种成分与手工镜检的检出差异得出结论,AVE-764B对尿液有形成分的检出率优于人工直接显微镜镜检法。但是他们均认为仪器镜检还不能完全替代人工识别,有时需与人工识别相结合以保证结果的准确无误。为探索由仪器分析和手工镜检引起差异的因素及纠正措施,作者对比了两种检测方法在稀释全血和临床尿液标本检测的差异,试图找出存在的影响因素和可能的纠正措施,以更好的指导日常工作和结果的审核。

1 材料和方法

1.1 全血稀释后AVE-764B和手工检测

采集2 m L EDTA-K2抗凝全血,希森美康1800i血细胞计数仪计数,选取红细胞数值介于(3.5～4.5)×1012、白细胞值介于(4～10)×109之间的样本。抗凝全血经生理盐水倍比稀释,稀释管分两排,微量移液器取100μL全血,加入到900μL稀释液中,充分吹打、颠倒混匀稀释到105倍。其中1排加2滴冰醋酸用于破坏红细胞,放置5～10 min,显微镜观察红细胞破坏完全,白细胞未被破坏后用于白细胞计数。另一排未加冰醋酸用于红细胞计数。

手工计数采用Fuchs-Rosenthal血细胞计数盘计数红细胞和白细胞数值[6]。充池和计数方法为一次性塑料试管取少量稀释后的血液充入计数池,静置5 min,先用低倍镜扫描整个计数盘,保证颗粒分布均匀,用高倍镜计数颗粒数量。为了达到颗粒计数的统计学精度,必须计算足够的颗粒数,白细胞和红细胞至少计数200个。

1.2 临床采集尿液标本AVE-764B和手工定量检测

连续两周收集临床各科送检的尿常规标本1 047份,留取后到检测结束时间不超过2 h,留取量不少于10 m L,留取前女性患者避开经期。AVE-764B尿液有形成分分析仪操作严格按照仪器SOP要求进行,低倍镜和高倍镜颗粒成分均经人工复判。手工检测采用Fuchs-Rosenthal血细胞计数盘计数,尿液标本充分混匀,取底部少量充池,静置5 min,管型和鳞状上皮细胞低倍镜观察计数,红细胞和白细胞高倍镜至少计数200个,以保证计数的准确性。

1.3 手工镜检半定量检测

因视野范围广,且较计数板更为清晰,传统手工显微镜检作为补充实验。临床收集的尿液标本充分混匀,底部吸取少量,取1滴或半滴涂片,以细胞不分层为宜。红、白细胞及上皮细胞以1/4视野为1+, 1/2视野为2+,3/4视野为3+,满视野为4+。其他有形成分半定量分析报告方式见表1。

表1 显微镜观察尿结晶、细菌、真菌、寄生虫等的报告方式[7]

1.4 统计分析

所有数据采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析。全血和尿液检测,计算两种方法的相关系数r和回归方程,两种方法结果的比较采用秩和检验。多元回归分析验证低倍颗粒数对结果换算的影响。

2 结果

2.1 全血稀释后AVE-764B和手工检测结果的比较

抗凝全血10倍稀释后AVE-764B进行检测,进样后发现高倍视野堆满红细胞,细胞重叠无法精确计数,105稀释后,10副高倍图可见数个红细胞或未见,因此全血稀释后用于验证AVE-764B计数红细胞准确性的稀释范围为102～105,在这一范围内红细胞AVE-764B和手工检测比较,仪器和手工检测相关性强,差异无统计学意义(表2),回归方程为Y= 0.887X-2.976。加醋酸破坏红细胞后,白细胞计数稀释范围为101～103,这一范围内白细胞仪器和手工检测比较,差异仍无统计学意义,回归方程为Y= 0.916X-0.534。

全血102～103稀释后未滴加冰醋酸,视野内红细胞未被破坏,散在可分辨的白细胞,白细胞仪器和手工检测比较,仪器计数明显高于手工计数(表2),仪器和手工法仍存在相关性,但相关系数r=0.752,低于滴加冰醋酸组,回归方程为Y= 0.415X-12.748。

表2 全血稀释后AVE-764B和手工检测结果

2.2 临床采集尿液标本AVE-764B和手工定量检测

尿液中结晶、细菌、真菌、寄生虫等其他非红白细胞成分通过手工镜检小于1+时,红细胞仪器和手工检测比较,相关性强,差异无统计学意义(表3),回归方程为Y=0.914X-2.461。白细胞仪器和手工检测比较,差异仍无统计学意义,回归方程Y= 0.906X-0.653。

尿液中其他颗粒成分手工镜检大于等于1+时,红细胞仪器和手工检测比较,差异有统计学意义,仪器法高于手工计数(P＜0.01),两种方法相关系数减低,r=0.647,回归方程Y=0.563X-16.615。白细胞仪器和手工检测比较,差异同样有统计学意义,仪器法高于手工计数(P＜0.01)(表2),两种方法相关分析,相关系数减低,r=0.612,回归方程Y= 0.484X-18.249。

表3 临床尿液标本AVE-764B和手工检测结果

2.3 AVE-764B尿沉渣计数仪低倍颗粒数对红白细胞计数的影响

AVE-764B尿沉渣计数仪有3个通道,存在通道吸样误差,只选取通道1作为分析通道。参数设置为初筛10副图、低倍镜10副图、高倍镜10副图。计数低倍颗粒数,低倍10副图用于计数上皮细胞、管型,高倍10副图用于计数红白细胞。选取并记录低倍颗粒数X1、高倍10副图中红、白细胞数值X2和换算后的每微升红、白细胞数值Y。SPSS多元回归分析建立每微升红、白细胞数值、低倍颗粒数和10副高倍图红、白细胞数值之间的多元回归模型。相关系数r= 0.094,回归模型的方差分析F值为4428.015,P= 0.000,回归显著。回归方程Y=-34.094+ 0.034X1+41.9X2。

3 讨论

AVE尿液有形成分分析仪已在国内各检验科室得到广泛应用,其仪器的准确性和性能也得到了专家和同行的认可[8]。我们的实验收集的临床尿液标本仪器和手工法具有较高的相关系数和回归系数,并且用成分简单的稀释血液进一步验证了仪器的准确性和可靠性。但在有些情况下仪器和手工计数误差较大,仪器法不能取代手工镜检,如标本留取量少,仪器取样不足时检测结果可能会明显低于标本实际含量。尿液标本可能含有手纸或内衣面料混入的纤维堵孔或清洗不干净,样本间可能存在的交叉污染等因素,使得仪器计数结果和人工计数之间存在较大误差,但这些误差通过严格的样本留取要求和谨慎的实验操作,能被识别和矫正。作者在日常操作中还发现另一影响因素,即两个临床标本同样是6副高倍图计数到1个红细胞或白细胞,仪器计数结果为2或43个/μL,差异较大。通过长期的观察和实验数据的收集分析,发现初筛的低倍颗粒数对计数的换算影响较大,因此纳入这一因素并对其进行分析,得出了仪器定量换算的回归方程Y=-34.094+0.034X1+ 41.9X2。低倍颗粒数的回归系数明显低于高倍图细胞数值的回归系数,但是低倍颗粒数是初筛时取图内所有的颗粒数,如果标本中存在较多的结晶、真菌或污染纤维等颗粒成分时,两种方法计数误差较大,仪器法的计数结果明显高于手工计数。张志英等[9]的研究认为尿液中结晶不干扰红细胞的计数。我们认为包括结晶等其他有形成分的量小于1+时,对细胞计数结果影响不大,但是其他有形成分量大于1+时,会造成计数结果偏高。

全血稀释计数结果显示,红细胞较多白细胞较少时会影响白细胞计数。全血稀释未加醋酸102～103稀释,视野内以红细胞为主,散在可分辨的白细胞,白细胞仪器和手工检测比较,Y=0.415X-12.748,r= 0.752,秩和检验Z=-2.625,P=0.009,仪器和手工检差异有统计学意义,仪器法高于手工计数。其中的一例对白细胞进行计数,红细胞未被破坏时高倍看到4个白细胞,换算成123个/μL。红细胞被冰醋酸破坏后同样看到4个白细胞,换算后为46个/μL。这些结果进一步验证说明初筛颗粒数参与了仪器结果的换算,虽然不作为结果报告。

遇到尿液中混有中等量及以上结晶、细菌、真菌、寄生虫等非细胞有形成分时,AVE-764B仪器法对红细胞、白细胞的计数结果明显偏高,这种情况下对检测结果应加以干预,建议用以下几种方法:①换人工计数。②手工镜检半定量计数。③对仪器法从图中看到的细胞数到每微升细胞数的换算公式进行纠正。低倍颗粒数的如何纠正,是否还存在其他影响计数换算的因素,是本实验进一步的研究方向。

[1]Brilha S,Proenca H,Cristino J M,et al.Use of flow cytometry(Sysmex)UF-100)to screen for positive urine cultures:in search for the ideal cut-off[J].Clin Chem Lab Med,2010,48(2):289-292.

[2]Altekin E,Kadicesme O,Akan P,et al.New generation IQ-200 automated urine microscopy analyzer compared with KOVA cell chamber[J].J Clin Lab Anal,2010,24 (2):67-71.

[3]薛冰蓉,杨渝伟,陈曦,等.UF-1000i尿沉渣分析仪检测尿红细胞、白细胞影响因素的探讨[J].国际检验医学杂志,2011,32(11):82-84.

[4]马骏龙,陆玉静,黎晓晖,等.尿液红、白细胞定量不同方法的探讨[J].临床检验杂志,2006,24(5):348-350.

[5]袁舟亮,胡安群,曹月中,等.AVE-763B全自动尿沉渣分析仪检测尿液有形成分性能评估[J].检验医学与临床, 2012,9(8):913-914.

[6]Manoni F,Tinello A,Fornasiero L,et al.Urine particle evaluation:a comparison between the UF-1000i and quantitative microscopy[J].Clin Chem Lab Med,2010, 48(8):1 107-1 111.

[7]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社,2006:294.

[8]蔡民,李涛,司力,等.国产AVE-763全自动尿有形成分分析仪结果评价[J].现代检验医学杂志,2010,25(4): 72-75.

[9]张志英,朱丽萍,戴燕,等.AVE-764B尿液有形成分分析仪的性能评价及临床应用价值[J].检验医学与临床, 2013,10(6):48-50.

[责任编辑 姬 荷]

Evaluation of the results and influencing factors with AVE-764B urine sediment analyzer

YAO Xiaobin，WANG Dan，MA Weiguo，CAO Weijuan，SHENG Jiahe
（Department of Clinical Laboratory，Henan Tumor Hospital|Affiliated Tumor Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou，Henan 450008，China）

Objective Accuracy evaluation of RBC，WBC count with interference factors on AVE-764B urinary sediment analyzer，thereby to make reference to the proposed audit.Methods Selected anticoagulated whole blood and clinical urine specimens as a detection object，while used AVE-764B urinary sediment analyzer and Fuchs-Rosenthal cytometer for quantitative counting of RBC，WBC.Analyzed the differences and confounding factors. Results Instruments and manual method showed no significant difference with blood and urine samples of RBC，WBC count，but WBC count significantly in two ways，instruments act count results high when hemodilution specimens without glacial acetic acid damage of RBC.Count results significantly in two ways，instrumental method count high when other particulate component of urine microscopy is greater than 1+.Conclusion AVE-764B urinalysis analyzer for RBC and WBC count is accurate and reliable，but count results were significantly higher than manual counting when there are a large number of other particle composition is present in the specimen.At this time suggest manual counting or semi-quantitative count by hand.

AVE-764B；urinary sediment analyzer；RBC；WBC；particle component

R446.12

A

1672-7606(2014)04-0270-04

2014-08-10

姚晓宾(1979-),男,河南灵宝人,硕士,主管技师,从事临床检验诊断的工作。