CK19、Galectin-3在甲状腺良恶性肿瘤中的表达及其临床意义

杜岗 马艳波

甲状腺瘤是最为常见的甲状腺良性肿瘤，包括滤泡状腺瘤和乳头状囊性腺瘤。甲状腺癌是最为常见的甲状腺恶性肿瘤，包括有源自于滤泡上皮细胞的乳头状癌、滤泡状腺癌、未分化癌；源自于滤泡旁降钙素分泌细胞（C细胞）的髓样癌；未分化癌的预后最差[1]。甲状腺腺瘤有引起甲亢和恶变的可能，应该早期行患侧甲状腺大部分或者部分切除。甲状腺癌的手术治疗包括甲状腺本身的手术切除以及颈部淋巴结的清扫，甲状腺的手术切除范围大小存在分歧，同时颈部淋巴结的清扫效果固然好，但是对患者的生活质量影响比较大。术前对甲状腺疾病良恶性质的诊断决定着甲状腺手术的方式，所以甲状腺良恶性质的误诊将对患者造成巨大的伤害。目前尽管对CK19、Galectin-3进行了很多的研究，许多的作用环节仍然不够明确，且在甲状腺癌与甲状腺腺瘤中CK19、Galectin-3阳性高表达所具有的鉴别诊断价值受到质疑，为提高甲状腺癌的诊断正确率、为鉴别甲状腺良恶性肿瘤提供一种强有力的证据，这就是本课题研究的目的和意义所在。

1 材料与方法

1.1 组织标本来源 病理标本来自2012年1月-2013年12月山西医科大学第一附属医院普外科行外科手术治疗且经病理学证实的80例甲状腺肿瘤患者，包括甲状腺癌病理组织标本40例、甲状腺瘤病理组织标本40例，术前均未行放化疗。其中甲状腺癌病理组织标本男8例，女32例，年龄28~56岁，平均43.5岁；甲状腺癌瘤病理组织标本男5例，女35例，年龄19~38岁，平均26.3岁。病理组织标本均取材于肿瘤原发灶，同时避开炎症区以及坏死区。

1.2 试剂 兔抗人CK19购自于上海亿欣生物科技有限公司、兔抗人Galectin-3购自于武汉博士德生物科技有限公司、链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（SABC）法免疫组织化学试剂盒购自于北京四柏生物科技有限责任公司、枸橼酸钠抗原修复液及联苯二胺（DAB）显色剂购自于中国福州迈新生物科技公司。

1.3 免疫组化技术检测CK19、Galectin-3在甲状腺良恶性组织中的阳性表达 具体步骤按照试剂盒的操作说明进行，其中兔抗人CK19以1：80进行稀释、兔抗人Galectin-3同样以1：80进行稀释；将制作完成病理标本切片置于光镜下（200倍）进行观察，抗原阳性表现为细胞胞浆中出现棕黄色或棕褐色的颗粒；评价依据阳性表达细胞的染色强度和百分比分别计分，然后相加得到总积分，具体标准是：（1）根据阳性表达细胞着色强度评分：没有染色计0，弱染色（很少量的着色细胞表现为棕黄、或着色细胞表现为淡黄）计1，强染色（着色细胞表现为棕黄）计3，中度染色（介于强染色与弱染色）计2；（2）依据阳性表达细胞百分比计分：低于5%计0，5%~25%计1，25%~50%计2，51%~75% 计 3，大于 75% 计 4；（3）总积分 =（1）+（2），0分为阴性（-）、l~2分为弱阳性（+）、3~5分为阳性（++）、6~7分为强阳性（+++）。

1.4 统计学处理 所有资料均用SPSS 13.0统计软件进行分析。两组间样本率比较采用独立样本 字2检验（检验水准α=0.0167）；采用灵敏度、特异度和诊断符合率来评价CK19、Galectin-3在鉴别诊断甲状腺良恶性疾病中的价值，其中灵敏度=真阳性数/（真阳性数+假阴性数）×100%、特异度=真阴性数/（真阴性数+假阳性）、诊断符合率=（真阴性数+真阳性数）/总测定数×100%。

2 结果

2.1 CK19、Galectin-3阳性表达为细胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒。细胞角蛋白-19（CK19）在40例甲状腺癌组织中阳性表达的例数为40例，阳性率为100%；40例甲状腺瘤组织中阳性表达的例数为15例，阳性率为37.50%，差异具有统计学意义（P<0.001），见表1。半乳糖凝集素-3（Galectin-3）在40例甲状腺癌组织中阳性表达的例数为32例，阳性率为80.00%；40例甲状腺瘤组织中阳性表达的例数为10例，阳性率为25.00%，差异具有统计学意义（P<0.001），见表2。

表1 CK19在甲状腺癌组织与甲状腺瘤组织中的阳性表达比较

表2 Galectin-3在甲状腺癌组织与甲状腺瘤组织中的阳性表达比较

2.2 CK19在鉴别诊断甲状腺良恶性疾病中的灵敏度为100%、特异度为62.50%、诊断符合率为81.25%；Galectin-3在鉴别诊断甲状腺良恶性疾病的灵敏度为80.00%、特异度为75.00%、诊断符合率为77.50%。CK19、Galectin-3在甲状腺癌中的阳性表达率增强，是甲状腺良恶性疾病进行鉴别诊断的重要辅助指标，联合检测可以提高甲状腺癌的诊断率。

3 讨论

在临床病理工作中，甲状腺良恶性病变仅仅凭借HE染色进行诊断有很大的困难，同时由于甲状腺癌起病隐匿以及生物学特性多变，现有的影像学、病理学、细胞学、免疫学等等均存在着很高的误诊可能性，因此寻找敏感性、特异性更强的肿瘤标志物进行鉴别诊断将很有价值。

CK19是一种分子量约40 KD的低分子量角蛋白，存在于正常上皮以及各种上皮来源的肿瘤中，在单层上皮细胞和间皮、成人皮肤、肝细胞和角膜细胞中呈现阴性表达，在子宫上皮、羊膜上皮细胞和间质细胞中呈现阳性表达[2]。CK19基因具有上皮细胞表达特异性，其符合上皮组织特异性标志物的条件，不同大小的CK代表着不同类型的上皮标志，理论上讲，大多数的单层上皮细胞表达着低分子量的CK，CK19单克隆抗体分子量大小为40 KD，主要应用于腺癌的诊断。

Cheung等[3]报告显示：CK19弥漫性地存在于甲状腺乳头癌中（80.00%， 43/54），仅仅很少甲状腺腺瘤为弥漫性染色（3%，1/35），也有一定比例的甲状腺腺瘤呈局灶性染色（17% ，6/35）。Rapheal[4]研究发现：CK19是区分乳头状和甲状腺良性病变的一个有用的标记物。Baloch等[5]研究发现：CK19在具有乳头状癌核特征的区域呈现强阳性，在小于1 cm的隐匿性乳头状癌或者在甲状腺微小转移灶也呈现弥漫阳性，而在癌旁甲状腺组织、腺瘤结节性甲状腺肿乳头状增生呈现阴性或者小灶性阳性。因此CK19有助于PTC与甲状腺组织、滤泡性腺瘤、结节性甲状腺肿、乳头状增生的鉴别，同样也可用于隐匿性乳头状癌与甲状腺良性结节的鉴别，同样也可以判断甲状腺组织内是否存在微小转移灶。

Galectin-3作为半乳糖凝集素家族中的一种蛋白，广泛存在于人体的多种正常组织细胞和肿瘤细胞中，正常组织细胞如：巨噬细胞、血管上皮细胞、正常的胃肠道黏膜细胞；肿瘤细胞如胃肠道恶性肿瘤细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、垂体瘤细胞等[6-10]。

新近有学者研究报告显示：Galectin-3mRNA在甲状腺癌、良性病变、癌旁组织中的阳性表达率为78.12%、26.67%、27.78%，差异具有统计学意义；但是在甲状腺癌中，在甲状腺乳头癌、甲状腺滤泡癌、甲状腺髓样癌的阳性表达率分别为78.26%、80.00%、75.00%，差异无统计学意义，也就是说在甲状腺癌中，其表达与临床病理分期无关；通过免疫组化技术进行检测，其结果与RT-PCR检测结果基本一致[11]。也就是说，该因子在良恶性的鉴别诊断中具有一定的意义，但是在鉴别诊断甲状腺癌的亚型中意义不大。

本研究通过检测细胞角蛋白-19（CK19）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）在甲状腺良恶性病变中的阳性表达情况，探讨其在诊断甲状腺癌以及在鉴别诊断甲状腺良恶性病变中的意义。本实验的研究结果显示细胞角蛋白 -19（CK19）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）在甲状腺癌组织中呈现高度的阳性表达，而在甲状腺瘤组织中没有表达或者呈现仅有微弱的表达，提示CK19、Galectin-3可能在甲状腺癌的发生发展过程中发挥着某种重要作用，推测这两种因子有可能作为甲状腺良恶性疾病鉴别诊断的重要辅助指标。同时CK19、Galectin-3灵敏度、特异度、诊断符合率均较高，同样提示可作为甲状腺癌的辅助诊断指标，联合检测可以提高甲状腺癌的诊断率。

综上所述，本实验检测了CK19、Galectin-3在甲状腺良恶性肿瘤中的表达情况，探讨两者在甲状腺癌诊断中的价值以及与良性病变的鉴别诊断价值。结合新近一些学者在甲状腺肿瘤方面的研究成果，其研究成果显示了CK19、Galectin-3在甲状腺癌组织中也有高度的表达，与本实验的结果无明显不符。因此CK19、Galectin-3有望作为新的指标诊断甲状腺癌以及鉴别诊断甲状腺良恶性组织，且联合检测可以提高诊断的准确率。

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