饮用水中的总大肠菌群检测

刘凤伟

摘 要：大肠杆菌是肠道的正常寄生菌，能合成对人体有利的维生素B、维生素K，但当机体抵抗力下降或大肠杆菌侵入肠外组织或器官时，则会成为条件致病菌，可引起肠外感染[1]。因而GB5749-2006《生活饮用水卫生标准》规定，每任意100mL水样不得检出总大肠菌群。本论文通过滤膜法实验检测自来水中的总大肠菌群数是否符合国家饮用水标准。

关键词：滤膜法；品红亚硫酸钠培养基；大肠杆菌

引言

饮水水质的好坏直接关系到人民的身体健康，也是反映一个国家文明程度的重要指标之一[2]。《生活饮用水卫生标准》（TJ20-76）和《生活饮用水卫生标准》（GB5749-85）中规定细菌总数不超过100个/mL，总大肠菌群不超过3个/L；而2001年《生活饮用水水质卫生规范》要求更加严格，规定饮用水中总大肠菌群每100mL水样不得检出。国内检测总大肠菌群的方法主要是多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可适用于各种水样，但操作繁琐，所需时间较长，而滤膜法主要适用于杂质较少的水样，操作简单快捷。本论文即采用滤膜法检验自来水中总大肠菌群数，用滤膜过滤器过滤水样，将水中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜放在品红亚硫酸钠培养基上进行培养，计数大肠菌群菌落数，算出每100mL水样中含有的大肠菌群数。从而判定自来水中的大肠菌群数是否符合国家标准。

1.材料与方法

1.1该实验于2013年7月2日、3日在大连经济技术开发区自来水公司水质管理中心微生物室完成。

1.2材料

1.2.1实验材料 自来水（湾里高区水、湾里低区水）及其原水

1.2.2实验试剂 品红亚硫酸钠培养基

1.2.3实验仪器 培养箱：36℃±1℃、冰箱0℃-4℃、天平、药匙、平皿：直径90mm、刻度吸管、锥形瓶、量筒、玻璃棒、酒精灯、滤器、孔径0.45μm滤膜、抽滤设备、无齿镊子。

1.3检验步骤

（1）将酒精棉球点燃，用其火焰灭菌抽滤器，用已在酒精灯上灼烧过并降至室温的镊子夹取已灭菌滤膜的边缘部分，放在已用点燃的酒精棉火焰灭菌过，并已降至室温的滤床上，将滤器固定好，并向滤器中注入100mL水样，打开抽滤阀门，在-5.07×104Pa（负0.5大气压）下抽滤水样。

（2）水样滤完后，再继续抽气约5秒钟，关上滤器阀门，将滤器取下来，用在酒精灯上灼烧过且温度已降至室温的镊子夹取滤膜边缘部分，移放到品红亚硫酸钠培养基上，使滤膜截留细菌面朝上，滤膜与培养基完全贴紧，中间没有气泡，然后倒置平皿，放入37℃恒温箱内培养24h±2h。

2.结果观察与分析

2.1结果

水样菌落照片及相应数据表

（3）结果计算。100mL水样中的总大肠菌群菌落数=数出的总大肠菌群菌落数×100/过滤的水样体积（mL），即自来水中每100mL水样中未检出大肠菌群。

2.2分析。检测结果表明，两个原水样中均存在大肠菌群，而数个自来水水样中都没有大肠菌群生长，说明对原水的处理效果很好，自来水没有受到污染，符合国家饮用水水质标准。

3、讨论

因为数个自来水水样中没有大肠菌群及其疑似菌生长，所以不需要做革兰氏染色与镜检检测。

试验中需要注意：①镊子每次夹取滤膜前必须灭菌，以防感染杂菌。②培养基不能过久保存，若培养基由淡粉色变为深红色，则不能再用。③将滤膜的细菌截留面朝上，放到品红亚硫酸钠培养基上，滤膜与培养基之间不要留有空隙。④配制品红亚硫酸钠培养基时要注意PH值的调节，一定要将其PH值调至7.2-7.4之间。⑤分装品红亚硫酸钠储备培养基时，应每瓶装入固定量的储备培养基（例如200mL），因为铺平皿时，要根据品红亚硫酸钠储备培养基的量，计算出应加入的无水亚硫酸钠与碱性品红乙醇溶液的量。⑥滤膜放入品红亚硫酸钠培养基后，必须先倒置平皿，再放入恒温培养箱中。因为这样可以防止冷凝水从盖上滴落，引起菌落蔓延，使该处菌落生长不均，也可以防止水分蒸发，使得培养基内水分过少而影响菌落生长。

4、结论

本实验将自来水（湾里高区水、湾里低区水）分别进行平行样检测（见图一、表一与图二、表二），均未检出大肠菌群，而100mL原水中有平均29个大肠菌群生长（见图三、表三与图四、表四），且图三、表三与图四、表四是将原水与自来水（湾里高区水、湾里低区水）放在同一个品红亚硫酸钠培养基上，都只有原水长出大肠菌，说明培养基及操作手法均没有问题，结果可信，自来水中的总大肠菌群数符合国家饮用水卫生标准。（作者单位：大连经济技术开发区自来水公司水质管理中心）

参考文献：

[1] 李素玉 主编.环境微生物分类与检测技术.北京：化学工业出版社，2005.8

[2] 彭文启 张祥伟等.现代水环境质量评价理论与方法.北京：化学工业出版社，2005

[3] 金银龙 鄂学礼等.GB5749-2006《生活饮用水卫生标准》. 中国标准出版社出版，2007.5