氟苯尼考PEG6000固体分散体在大鼠体内的生物利用度研究

于欣洋　赵修华　祖元刚　刘洋

摘要[目的]研究氟苯尼考PEG6000固体分散体在大鼠体内的生物利用度。[方法]建立大鼠血浆中氟苯尼考的HPLC检测方法。用灌喂药物水溶液的方法，通过高效液相分析技术对氟苯尼考PEG6000固体分散体的血药浓度进行测定，与氟苯尼考原粉进行对照。[结果]氟苯尼考PEG6000固体分散体在大鼠体内吸收及代谢良好，氟苯尼考固体分散体和氟苯尼考原药的最高血药浓度分别为13.44 和3.88 μg/ ml，提高了3.46倍；药-时曲线下面积分别为：氟苯尼考原粉AUC0～8 h= 20.12 25 μg/（ ml·h）、氟苯尼考固体分散体AUC0～8 h= 23.22 μg/（ml·h），氟苯尼考-PEG6000固体分散体口服生物利用度与氟苯尼考原粉相比提高了15.39%。[结论]氟苯尼考PEG6000固体分散体能显著提高氟苯尼考的生物利用度。

关键词氟苯尼考PEG6000固体分散体；生物利用度；高效液相分析技术

中图分类号S859文献标识码A文章编号0517-6611（2014）09-02513-02

基金项目国家科技支撑计划课题（2012BAD21B05）。

作者简介于欣洋（1988- ），女，山东潍坊人，硕士研究生，研究方向：植物化学与植物药。*通讯作者，教授，博士，博士生导师，从事植物生态学和植物资源学的教学与研究。

氟苯尼考（Florfenicol），中文名称为氟洛芬、氟苯尼考、氟甲砜霉素，是在20世纪80年代后期成功研制的一种新的兽医专用氯霉素类的广谱抗菌药，用于敏感细菌所致的猪、鸡及鱼的细菌性疾病，尤其对呼吸系统感染和肠道感染疗效显著[1-2]。刘洋等[3]选用无溶剂熔融法固体分散技术以高分子水溶性物质PEG作为载体对氟苯尼考的水溶性粉进行研究，成功改善了其溶解度和溶出速度，制备了氟苯尼考PEG6000固体分散体。笔者以大鼠作为实验动物，用灌喂药物水溶液的方法，通过高效液相分析技术，对氟苯尼考PEG6000固体分散体的血药浓度[4]进行测定，与氟苯尼考原粉进行对照，以期为氟苯尼考的临床应用提供依据，并为该药在其他动物体内的药动学研究提供参考[5]。

1材料与方法

1.1仪器分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；固相萃取小柱（Agilent公司C18，1.0 ml）；玻璃点样毛细管（0.5 mm×100 mm，华西医科大学仪器厂）；高效液相色谱仪（Waters公司）；高速离心机（3K30型，Sigma公司）；数控超声波清洗器（KQ250DE型，昆山市超声仪器有限公司）。

1.2试剂和药品氟苯尼考对照品（SigmaAldrich公司，产品货号F1427）；氟苯尼考-PGE6000固体分散体（实验室自制）；氟苯尼考原粉（湖北龍翔药业有限公司，含量大于980%，生产批号为091007）；甲醇（百灵威公司J&K，色谱纯）；乙腈（百灵威公司J&K，色谱纯）；冰醋酸（天津市天力化学试剂有限公司，分析纯）；肝素钠（中国惠世生化试剂有限公司，效价150 IU/mg，批号为080808）；去离子水（实验室自制）。

1.3实验动物昆明系大白鼠12只，雌雄各半，体重（250±15）g，由哈尔滨市肿瘤医院实验动物中心提供。

1.4方法

1.4.1氟苯尼考PEG6000固体分散体的制备。按照质量比为1∶7分别精确称量氟苯尼考原粉及PEG6000。首先，将氟苯尼考原粉置于圆底烧瓶中，置于恒温电磁搅拌电热套上加热至熔融，熔融温度为156～159 ℃；其次，将适量的PEG6000置于70 ℃水浴加热至熔融；然后将后者加入圆底烧瓶中，电磁搅拌至完全混匀。将熔融物倾倒在冰浴的不锈钢板上涂成薄片，置冰箱中存放12 h，用药匙将凝结的固体分散体刮出，置于真空干燥器中，待脆化后用粉碎机进行粉碎，过80目筛，得到氟苯尼考PEG6000固体分散体，密封保存。

1.4.2大鼠试验。将12只大鼠随机分成A、B 2组，A组给药为氟苯尼考原粉（简称为A药），B组给药为氟苯尼考-PEG6000固体分散体（简称为B药）。按给药剂量30 mg/kg体重用去离子水分别配制A、B溶液，药物浓度为1.5 mg/ml，灌喂量为5 ml。根据相关文献资料的研究结果[6]，确定大鼠眼眶采血的时间分别为0（空白血浆）、0.25、0.5、1、1.5、2、4、8、12和24 h。分别将A、B药物溶液以灌胃方式给2组大鼠口服用药，每只剂量为5 ml，给药前及给药过程中大鼠正常进食。用玻璃点样毛细管进行眼眶采血，每个采血点取血量为0.5 ml，置于1%肝素钠1 ml的具塞离心管中。

1.4.3血样处理。取“1.4.2”中所得血样离心管，8 000 r/min离心10 min，取上清液0.5 ml，注入已活化好的固相萃取柱，用2.0 ml 70%甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，25 ℃下吹干，残渣用0.5 ml流动相溶解，12 000 r/min离心10 min，将上清液置于4 ℃下冷藏备用。其中，0 min所取血样是为空白血样。

1.4.4高效液相色谱检测。

1.4.4.1液相色谱条件。用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；流动相为乙腈-水-冰醋酸（500∶985∶15）[7]；流速为1.0 ml/min；柱温为20 ℃；紫外检测波长λ为 224 nm。经“1.4.3”处理后血样按进样量20 μl进行检测，记录色谱图和峰面积。

1.4.4.2标准品血清溶液的制备及检测。称取恒重的氟苯尼考标准品500 mg，置于500 ml容量瓶中，用流动相溶解后，定容成1 mg/ml的标准贮备液。分别量取上述贮备液适量，用蒸馏水稀释为浓度分别为50、20、10、5、2和1 μg/ml的标准溶液。经“1.4.3”方法处理后的空白血样与上述标准溶液混合振荡均匀，高速离心后吸取上层溶液20 μl进行高效液相测定，记录色谱图和峰面积。

2结果与分析

2.1标准曲线的绘制对标准品空白血样溶液的浓度和吸收峰峰面积的关系进行回归分析，其回归方程为y=43 680x+141 128（R2=0.999 0）。从图1可以看出，氟苯尼考标准品在波长224 nm处有最大吸收峰，在0.2～50 μg/ml浓度范围内，浓度与峰面积间线性关系明显。

2.2氟苯尼考的高效液相图谱从图2可以看出，标准品的出峰时间为7.075 min，固体分散体中氟苯尼考的出峰时间为7.064 min。空白血样对氟苯尼考的高效液相图谱没有影响。

2.3血药浓度及药时曲线将高效液相检测得到的数据代入标准曲线方程，计算出不同时间大鼠体内的血药浓度，经软件OriginPro8.0处理可得到氟苯尼考原粉及固体分散体在大鼠体内24 h药时曲线以及氟苯尼考相对生物利用度AUC（0-8h）。从图3可以看出，氟苯尼考原粉与固体分散体的最高血药浓度分别为3.88和13.44 μg/ml；氟苯尼考原粉AUC（0～8h）= 20.122 5 μg/（ml·h），氟苯尼考固体分散体AUC（0～8h）=23.22 μg/（ml·h）。