新药长毒试验动物血液生化检验过程中的影响因素及解决对策

摘要血液生化指标检验是新药长毒动物试验中一类常用的检测技术，对于评价受试药物对动物的安全性有重要意义。但在血液生化指标检验过程中常存在多种因素影响结果的准确性，可能导致药物评价机构对某些新药毒理学性质的误判，甚至造成严重后果。对血液生化检验中常见的影响因素进行了总结，并制定了相关解决对策，以提升血液生化指标检验的准确性，为药物的动物安全评价试验提供更为可靠的数据。

关键词药物安全评价；血液生化检验；影响因素；解决对策

中图分类号S859文献标识码A文章编号0517-6611（2014）09-02611-02

作者简介樊静（1983- ），女，四川成都人，研究实习员，从事实验动物学的教学与研究工作。

在新药研发过程中，药物安全性评价是新药研究开发的重要前提， 而长期毒性试验又是安全性评价试验中的重中之重[1]。长毒试验需要检测的血液生化指标包括：丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转碱性磷酸酶移酶和总胆红素等10余项指标，是评判受试药物对实验动物肝、肾等重要脏器功能损伤的重要指标。生化指标检测的准确性对于新药的安全性评价至关重要，而采血、离心、保存及检测等的各环节均可能影响结果的准确性[2]。

只有对采样前后影响血液生化检验的各种因素进行有效控制，才能使检测结果具有可靠的参考价值，如果血生化检测结果不可靠，会导致人们对受试药物的毒理学性质造成误判，甚至造成严重后果[3]。因此，笔者对从血样采集到实验室检查的各个环节中的影响因素进行了总结，并制定了有效的解决方案，从而提升检验结果的准确性，以更好地为新药的安全性评价提供可靠的依据。

1血液生化检验过程中的影响因素

1.1采血过程中的影响因素

1.1.1应激。动物生理状态受到年龄、性别、人员操作技术等因素的影响。例如，在动物的捉取和保定过程中动作粗鲁、落地摔伤、用力过猛等操作不当行为，则容易引起试验动物的应激，造成血糖及乳酸的含量升高。

1.1.2饮食。采集血样时，实验动物应处于空腹状态，喂食后食物中的色素、维生素等多种有效成分可能会对检测结果造成干扰。喂食会增加血清中 ALT和AST等的水平。饲料中维生素C可使实验动物血中乳酸脱氢酶含量降低[4]。

1.1.3溶血。造成标本溶血的因素有很多，包括采血针头过细、抽吸用力过猛，剧烈振荡试管或采血管负压过大等均可造成血样溶血。溶血标本中碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶和钾离子等的含量会发生异常增高，对检验结果造成影响[5]。

1.2保存与检测中的影响因素

1.2.1血样的保存。因为血样采集后未及时进行检测，可引起血液中化学物质的改变，甚至可能发生病原菌污染，因此采集血样后应及时进行检测[6]。

1.2.2处理不当。血样应放置应在恒定温度的环境中，分离血清时应在低温离心机中进行，气温过高等因素都有可能造成血清化学成分变化，从而导致检测结果不准确。

1.2.3试剂盒选择。试剂盒种类、保存方法、有效期及操作步骤等均可能对检验结果造成影响，如试剂盒保存不当或超过有效期等也可对检验结果造成误差。

1.2.4检测仪器。血液生化检验中一般使用全自动血生化分析仪进行检测，仪器的维护保养及工作状态均对血生化指标的检测产生影响，如长时间未清洗造成污染、长时间未校准等均可影响检验结果的准确性[7]。

2采取的解决对策

2.1血样采集时的注意事项①要求试验动物采集血样前禁食禁水。②防止动物在检查前受到外界环境或人为的剧烈刺激，导致其受到惊吓并避免剧烈的活动。这些因素均可导致应激，引起体内激素分泌过多，血液中化学成分发生变化，从而影响检验结果[8]。③提高采血人员的静脉穿刺操作水平，防止由于操作不当而造成的溶血或凝血等影响血样质量的情况出现。④前壁头静脉采血时，避免结扎的止血带过紧，结扎后1 min内将穿刺工作完成，结扎太久会导致采血部位血液循环不良，血液中成分发生变化。⑤采取有效手段防止血样发生溶血。按照操作规则合理使用抗凝剂，采样前检测抗凝剂的抗凝效果，及时淘汰抗凝效果不好的抗凝管；采血过程中轻轻摇动采血管，使血液与抗凝剂成分充分混合；尽量不要使用太细的针头采血且在采血时操作要迅速，避免延迟，以免造成溶血；采血后禁止剧烈摇动采血管。另外，若发现采集的血样出现溶血现象，应及时补采血样[9]。

2.2血样保存过程中的注意事项①采集的血样应尽快进行检测，避免因长时间放置血样而造成微生物的污染或血样内化学物质的变化。②对于未能及时检测的血样应做好保存工作，可根据检测的指标及样本情况进行合理保存，通常的方法是分离血清后进行保存，血液样本以2 000～3 000 r/min，4 ℃离心下10 min，分离上层血清后先暂时保存在4 ℃冰箱中，检测时再取出。样本尽量当天测完，特别是血糖、乳酸脱氢酶、肌酸激酶及其同工酶、尿酸、钾离子等必须在当日检测完毕，否则存储24 h 后血清生化指标会受到明显影响[9]。③制定血样收验制度，严格审查血样标本的质量，对于质量较差的血样特别是溶血血样应及时发现，并及时重新采集样本，提升检验准确性。对于检测结果异常的数据，及时对该样本进行重新检测，并反复比对，及时校对由于个人操作失误导致的检测结果误差。

2.3血样检测过程中的注意事项①检验室的环境条件因素可直接或间接影响检验结果的准确性，环境条件要符合标准，湿度、温度等应控制在规定范围内，并注意定期消毒。②严格按照操作说明使用仪器，每次检测前对仪器进行标准品标定，并做好仪器的日常维护保养，加样时注意血清中是否有蛋白凝集物形成，避免堵塞仪器。每次检测后要及时清洗，避免因仪器污染或运转不正常造成结果上的误差[10]。③校准检验所需的临界值及背景参考值等，要求工作人员能够对各种标准值进行核对，以便于更加准确地评估检测结果。

3小结

影响实验动物血液生化检验的因素很多，為进一步提高新药长期毒性试验中实验动物血液生化指标检测结果的准确性，对可能影响血生化检查结果的常见因素进行了分析，并制定了可靠的方案，有效防止了影响血清生化指标的大部分因素的干扰，减少了检测误差，提高了临床检验结果的准确性，为评估新药的安全性提供了可靠依据。

参考文献

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[2] 齐云，蔡润兰，宋杨，等.新药长毒试验动物血液生化测定规范化研究系列之—采血部位对血液生化值的影响[J].中国比较医学杂志，2006，16（2）：65-68.

[3] 包玉龙，杜佳林，李显华，等.不同存放时间对实验动物血清生化值影响[J].实用中医内科杂志，2011，25（10）：10-12.

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[10] 丛玉隆.临床实验室分析前质量管理及对策[J].中华检验医学，2004，27（8）：483-487.