6—BA浓度对桔梗胚珠愈伤组织分化率的影响

徐芳芳　赵丽莉　荀洋等

摘要[目的]研究6BA浓度对桔梗胚珠愈伤组织分化率的影响。[方法]以桔梗未受精胚珠为外植体，利用N6+1.0 mg/L 2，4D+01 mg/L KT培养基诱导出的愈伤组织作为接种材料，分别接在0.5 mg/L NAA与不同6BA浓度的分化培养基上，对其愈伤组织分化率进行研究。[结果]6BA浓度在0.25、1.25和1.00 mg/L（即3种分化培养基为N6+0.5 mg/L NAA+0.25 mg/L 6BA、N6+0.5 mg/L NAA+1.25 mg/L 6BA、N6 +0.5 mg/L NAA + 1.00 mg/L 6BA）时的分化率高，分别为88.3%、85.0%和80.0%。[结论]6BA浓度为0.25 mg/L 时有利于桔梗未受精胚珠愈伤组织的分化。

关键词桔梗；胚珠；愈伤组织；分化率； 6BA

中图分类号S682.1+9文献标识码A文章编号0517-6611（2014）09-02552-02

作者简介徐芳芳（1989- ），女，吉林白城人，硕士研究生，研究方向：作物遗传育种。*通讯作者，副教授，博士，从事中药材桔梗的栽培和育种方面的研究。

桔梗[Platycodon grandiflorum（Jacq.） A.DC.]为桔梗科桔梗属（Platycodon）多年生直立草本植物，别名道拉基、绿花根、铃铛花、四叶菜等。桔梗既是一种资源植物又是一种药、食、观赏兼用的经济植物[1]。近年来，国内外市场对桔梗的需求量急增，导致价格上涨，由此也推动了桔梗生产的发展。但是目前，桔梗生产中存在的主要问题是质量上不去，造成上等品紧缺，次等品积压。造成这种局面的主要原因是品种混乱和种子质量低劣等。

桔梗是异花授粉植物，主要进行有性繁殖，自然界中和生产上推广的桔梗是混杂的群体，到目前为止还没有纯系，这严重影响着桔梗遗传规律的研究和杂种优势的利用。而通过花药培养和胚珠培养获得单倍体，采用秋水仙素进行染色体加倍的途径可以培育出桔梗纯系，可为今后桔梗自交系的培育提供理论依据和试验材料。

以桔梗种子萌发的无菌苗叶片、茎段和茎尖为外植体进行组织培养已有报道[2-3]，但以桔梗未受精胚珠作为外植体诱导组培苗的研究报道却很少见。笔者以未受精桔梗胚珠为试验材料，N6作为基本培养基，以1.0 mg/L 2，4D + 0.1 mg/L KT为诱导培养基诱导出的愈伤组织作为分化培养的接种材料，将其分别接在添加0.5 mg/L NAA与不同6BA浓度组合的分化培养基中，以筛选出适于桔梗胚珠愈伤组织的分化培养基，从而为今后桔梗未受精胚珠组织培养研究提供依据。

1材料与方法

1.1材料诱导培养基是以N6作为基本培养基，添加1.0 mg/L 2，4D + 0.1 mg/L KT；琼脂为7 g/L，蔗糖为50 g/L，pH值为5.8。取单核胚囊期[4]（1.7 cm左右的花蕾）的胚珠消毒，将消毒好的花蕾用解剖刀剖离，取出胚珠接到诱导培养基上，在温度为25 ℃，12～14 h光照条件下培养40 d，以此愈伤组织作为分化培养的接种材料。

1.2分化培养基的配方分化培养基以N6为基本培养基，生长素为0.5 mg/L NAA，细胞分裂素为不同浓度的6BA，8种组合如表1所示。各组培养基加入琼脂为7 g/L，蔗糖为50 g/L，pH值为5.8。

1.3接种方法将诱导出的愈伤组织分别接在添加0.5 mg/L NAA與不同6BA浓度组合的8种培养基上，每种处理设置3次重复，每次重复接种10块愈伤组织，50 d后统计分化出苗的愈伤组织块数，并计算分化率。分化率（%）= 长出幼苗的愈伤组织块数/接种愈伤组织块数×100。

2结果与分析

2.1不同6BA浓度处理下的愈伤组织分化率对8组处理数据进行方差分析，结果表明重复间F值是0.095，差异不显著（P>0.05）。处理间F值为31.638，大于F0.05和F0.01，说明各个处理间存在极显著差异（P<0.01）。

为比较不同6BA浓度对桔梗胚珠愈伤组织分化率的影响，采用新复极差法（LSR）进行多重比较，结果见表3。无论在5%和1%显著水平上，处理1、5、4之间差异不显著（P>0.05）。它们的分化率分别为88.3%、85.0%和80.0%。处理6除了与处理3、7之间差异不显著外（P>0.05），与其他处理均差异显著（P<0.05），其分化率为65.0%。最低的是处理8，其分化率仅为35.0%，且显著小于其他所有处理（P<0.05）。

参考文献

[1] 高文远，李志亮，肖培根.桔梗现代研究进展[J].基层中药杂志，1996，10（2）：48-50.

[2] 吴京姬，吴基日，严一字，等.培养基组成对桔梗组织培养的影响[J].延边大学农学学报，2006，28（1）：18-23.

[3] 舒娈，高山林.桔梗的组织培养[J].植物资源与环境学报，2001，10（3）：63-64.

[4] 张美萍.桔梗（Platycodon grandiflornm A.DC）胚胎学研究[J].吉林农业大学学报，1992，14（2）：25-30.

[5] 武冲，唐树梅，张勇，等.植物花粉培养研究进展[J].农业基础科学，2008，24（11）：146-149.

[6] 王桂梅，贺美忠，杨富.桔梗组织培养技术的研究[J].安徽农学通报，2012，18（7）：70-71.