戊二醛致畸试验

许崇辉 谢 力 潘 芳 温巧玲 刘慧智 李华燕 李妙珍

(广东出入境检验检疫局 广东广州 510623)

1 前言

戊二醛被誉为继甲醛和环氧乙烷消毒之后化学消毒灭菌剂发展史上的第三个里程碑，适用于医疗器械和耐湿忌热的精密仪器的消毒与灭菌，广泛用于医疗、制药等行业[1]。由于戊二醛是一种具有挥发性和刺激性的化学试剂，因此，职业接触戊二醛的生产工人和医务工作者的职业接触暴露具有途径多（可经皮肤/黏膜、经呼吸道和经口3个途径）、时间长（每个工作日数小时和数十年的职业工作）的特点，个别员工可能一辈子1/4时间接触到戊二醛，同时，有相当一部分职业接触者是女性工作者。

为了研究戊二醛长期、低浓度的接触对女性工作者等机体的影响，本研究在对某品牌25%戊二醛溶液进行了急性毒性实验、遗传毒性实验、局部接触毒性及90d喂养实验等毒理学第一、第二、第三阶段研究的基础上[2-5]，开展了戊二醛对大鼠致畸试验[6]，研究戊二醛对大鼠母体毒性、胚胎毒性和致畸作用，以了解接触戊二醛对怀孕妇女和胎儿有无潜在的特殊损害。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 受试物样本和受试物溶液

2.1.1.1 受试物样本

市售戊二醛溶液：分析纯，标称浓度为25%，广东科密欧戊二醛化学试剂产品，批号10160586，样本无色有刺激气味，易溶于水。

2.1.1.2 受试物溶液

试验时，根据实验设计用蒸馏水临时稀释成不同浓度试验用液。

2.1.2 实验动物和饲料

实验动物和饲料均由广东省医学实验动物中心（实验动物生产许可证编号：SCXK（粤）2008-0002）提供。实验动物采用SD大鼠，雌性大鼠80只，雄鼠40只。开始实验时体重192.8-202.7 g，合格证号：NO.4400436254。

2.1.3 实验环境、主要仪器和试剂

2.1.3.1 实验环境

SPF级动物房和普通级动物房（实验动物使用许可证编号：SYXK（粤）2008-0086）。实验期间，室温22℃±2℃，相对湿度58%-65%。

2.1.3.2 仪器设备

实验室常用设备、游标卡尺（百分尺），生物显微镜及体视显微镜：奥林巴斯。

2.1.3.3 试剂

甲醛、冰乙酸、2，4，6－三硝基酚、氢氧化钾、甘油、水合氯醛、茜素红：均为分析纯，购自广州市化学试剂公司。

2.2 方法[6]

2.2.1 实验动物分组、数量、体重和性别

实验动物采用SD大鼠，雌性80只，随机分为4组,分别为低剂量组、中剂量组、高剂量组和阴性（空白）对照组，每组20只；雄鼠雄性40只，同样分为4组，每组10只，在实验环境下适应性喂养1周。开始实验时体重192.8-202.7g，合格证号：NO.4400436254。根据以前戊二醛急性毒性试验和90d喂养实验的结果，设致畸试验的4组，即高剂量40mg/kg体重、中剂量10mg/kg体重、低剂量4mg/kg体重和空白对照组。

2.2.2 实验过程

2.2.2.1 实验动物交配和受孕

按雌雄比例2:1的比例合笼过夜，次日用阴道涂片方式检查有无受孕，发现涂片有精子的作为受孕成功的大鼠，定为妊娠第0天，按随机分组的方式分到各实验组，每组10只。在受孕的第7天-第16天，每天通过饮水方式按剂量给予受试物。在受孕的第0天、第7天、第12天、第16天和第20天分别称各孕鼠体重，并根据各组体重的变化调整饮水量。于妊娠第20天处死孕鼠。

2.2.2.2 检测指标

剖腹取出子宫称重、记录并检查胚胎、死胎及活胎数。逐一记录胎仔体重、体长、检查胎鼠外观有无异常；在体视显微镜下检查胎鼠骨标本，逐一检查骨骼；胎鼠内脏检查，检查各器官的大小、形状和相对位置。

2.2.3 数据处理

各组数据分别录入SPSS数据库，计算均数和标准差；各剂量组与对照组比较，用t检验方法进行统计学分析。计量资料数据以“均值±标准差（±SD）”的形式表示。

3 结果

3.1 实验动物一般观察和孕鼠体重增长

在整个实验期间，各组实验动物未见外观体征、行为活动和饮食方面异常，孕鼠在受孕的第7天-第16天，各组动物一般情况也大致正常，未见明显中毒表现；在受孕的第0天、第7天、第12天、第16天和第20天，阴性对照组与各剂量给药组体重相比，差异无统计学意义(P>0.05)，但在第20天，高剂量组体重增长有小于阴性对照组和低、中剂量组体重趋势，存在剂量-效应关系，见表1。

表1 各组孕鼠平均体重增长趋势表（n=10）

3.2 对孕鼠胚胎发育的影响

与阴性对照组比较，高剂量组的子宫重、黄体数、着床数活胎和胎仔总数均见显著性减少(P<0.05)，在低、中、高三个剂量组中也存在剂量-效应关系。其余各剂量组指标与阴性对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 各组别孕鼠检查情况表（n=10）

（续表）

3.3 对胎仔生长发育的影响

与阴性对照组比较，各剂量组胎仔体重和身长的差别无显著性 (P>0.05)，结见表3。各组胎仔外观形态、胎仔内脏和胎仔骨骼检查未见畸形。

4 讨论

4.1 对孕鼠一般情况和体重增加的影响

从实验结果看，在第7天-第16天给予受试物期间及其后，各剂量组和阴性对照组实验动物一般情况基本相同，未观察到有中毒现象，各组体重无显著性差别。表明在该实验剂量下，戊二醛对大鼠未发现一般毒性（或母体毒性）。值得注意的是，在第20天，高、中剂量组体重与空白对照组、低剂量组相差虽无统计学的显著意义(P>0.05)，但在高、中、低3组之间存在剂量-效应关系，见表1。这一看似矛盾的结果，其实与各组大鼠内胚胎发育情况相关。

4.2 对孕鼠胚胎的影响

在本实验中，与空白对照组比较，高剂量组的子宫重、黄体数、着床数活胎和胎仔总数均见显著性减少(P<0.05)，中剂量组也有这趋势。整个实验结果存在空白对照组和低、中、高剂量组的剂量-效应关系，见表2。这结果与表1中孕鼠第20天的体重有很好的符合性。根据组织胚胎学，胚胎的发育过程，是前期对母体的体重增加影响小；后期由于组织器官快速成长，对母体体重的增加影响大。这是表1中各组孕鼠体重在前期没有差别，但第20天又有剂量-效应关系差别的原因。

黄体数、着床数、胎仔总数和子宫重是生理性有相互关联的指标，均是雌性大鼠卵细胞在子宫着床发育的过程[7]。从表2可见，各组孕鼠卵巢重无差别(P>0.05)；而高剂量组黄体数、着床数、胎仔总数、活胎数和子宫重明显低于对照组(P<0.05)，中剂量组虽未在低明显低于对照组(P>0.05)，但低、中、高三个剂量组中也存在剂量-效应关系。这说明高剂量组水平（40mg/kg体重）的戊二醛可明显影响大鼠受孕过程，即可能有胚胎毒性。

4.3 对胎儿生长发育的影响

与空白对照组比较，各剂量组胎仔体重和身长的差别无显著性 (P>0.05)，见表3。各组胎仔外观形态、胎仔内脏和胎仔骨骼检查未见畸形。这些结果说明，在实验剂量下，戊二醛对已发育成形的胎儿没有影响，戊二醛没有致畸作用。

表3 各组别胎鼠平均体重与平均体长（n=10）

5 结论

在本实验条件下，高剂量组水平（40mg/kg体重）的戊二醛可明显影响大鼠受孕过程，可能有胚胎毒性。在各实验剂量下，未发现戊二醛对孕鼠母体和胎儿生长发育有明显的毒性，未发现戊二醛有致畸作用。

［1］薛广波，李云先，顾春英，等.现代消毒学[M].北京：人民军医出版社，2002：311-325.

［2］许崇辉，刘慧智，温巧玲，等.戊二醛急性毒性研究[J].检验检疫学刊，2012，22（4）：22-24.

［3］许崇辉，潘芳，温巧玲，等.戊二醛遗传毒性研究[J].检验检疫学刊，2013，23（1）：7-10.

［4］许崇辉，温巧玲，刘慧智，等.戊二醛局部接触毒性研究[J].检验检疫学刊，2013，23（5）：21-23.

［5］许崇辉，潘芳，刘慧智，等.戊二醛90天喂养实验研究[J].检验检疫学刊，2014，24（1）：1-4.

［6］GB15193.14-2003 致畸试验[S].

［7］周宗灿.毒理学教程[M].北京：北京大学医学出版社，2006：238-258