急性有机磷农药中毒与CD8+CD28+T细胞、CD8+CD28-T细胞相关性及意义

彭广军，杨伟红，曹国辉，常海哲，贾雪梅

（河北大学附属医院急诊医学科，河北 保定 071000）

·临床研究·

急性有机磷农药中毒与CD8+CD28+T细胞、CD8+CD28-T细胞相关性及意义

彭广军，杨伟红，曹国辉，常海哲，贾雪梅

（河北大学附属医院急诊医学科，河北 保定 071000）

目的 探讨急性甲胺磷农药中毒早期血药浓度与T淋巴细胞亚群的关系。 方法 选择河北大学附属医院急诊医学科2007年1月至2013年6月收治的92例口服急性甲胺磷农药中毒患者，按中毒程度分为轻中度中毒组54例和重度中毒组38例，另选同期健康体检者92例为对照组，检测并分析中毒患者血药浓度与CD3+、CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-的关系。 结果 重度中毒组血药浓度水平较轻中度中毒组明显高 （P＜0.01），CD3+、CD8+、CD8+CD28+细胞数较轻中度中毒组明显低（P＜0.01），而CD8+CD28-细胞数较轻中度中毒组明显高（P＜0.01）。 结论 急性甲胺磷农药中毒早期血药浓度越高，中毒程度愈重，细胞免疫受损越严重。

甲胺磷；血药浓度；CD8+CD28+；CD8+CD28-

急性甲胺磷农药中毒可引起机体多脏器功能损害及多种生化指标的改变，同时还可伴有免疫功能减退。T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群，检测T淋巴细胞是观察机体免疫的重要方法之一。急性甲胺磷农药中毒患者外周血T淋巴细胞亚群的变化已有少量文献介绍[1]。为了探讨血药浓度与人体CD3+、CD8+、CD8+CD28-、CD8+CD28+的关系，对92例急性甲胺磷农药中毒患者血药浓度、CD3+、CD8+、CD8+CD28-、CD8+CD28+进行了检测，并分析其相关性及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2007年1月至2013年6月河北大学附属医院急诊医学科收治甲胺磷农药中毒（均为口服农药）患者共92例，按中毒程度分为轻中度中毒组54例和重度中毒组38例。男37例，女55例，年龄36～49岁，选择同期河北大学附属医院门诊健康体检者92名为对照组，各组均排除心、肺、肾脏疾病，自身免疫病，免疫缺陷病，超敏反应性疾病，且未使用过免疫抑制剂史，各组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 诊断标准

急性甲胺磷农药中毒的诊断符合以下标准[2]：（1）有暴露史；（2）相关中毒症状及体征，特别是呼出气大蒜味，瞳孔缩小，多汗。肺水肿、肌纤维颤动和昏迷的患者；（3）全血胆碱酯酶（CHE）活力有不同程度降低；（4）血、胃内容物检测出有机磷农药及代谢物。

1.3 中毒程度分级

临床中毒程度分级标准[2]：（1）轻度中毒为仅有毒蕈碱样症状，CHE活力70%～50%；（2）中度中毒为毒蕈碱样症状加重，出现烟碱样症状，CHE活力50%～30%；（3）重度中毒为具有毒蕈碱样症状和烟碱样症状，并伴有肺水肿、抽搐、昏迷、呼吸肌麻痹和脑水肿，CHE活力30%以下。

1.4 观察指标

在中毒后72 h检测各组CD3+、CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-水平，在中毒6 h检测轻中、重度中毒组患者的血药浓度。

1.5 检测及治疗方法

CD3+、CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-检测：每例抽取肘静脉血2 mL，采用EDTA-Na2抗凝后，取100 μL抗凝全血，分别加入抗CD3+、CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-荧光抗体各20 μL（法国Immunotech公司生产），对淋巴细胞作标记并且混匀、避光、在室温下放置15 min，再分别加入0.12%甲酸及1%多聚甲醛进行固定，完成溶解红细胞及固定15 min（美国Coulter公司，CoaHem型Q-PREP机），稳定20 min后每100 μL血样采用流式细胞仪（BECKMAN公司，型号为ESPIL-XL）检测1×104个淋巴细胞，对被荧光单抗标记的抗原阳性的细胞计数，以百分率表示。

血药浓度检测：每例取肘静脉血清0.5 mL置于10 mL具塞比色管中，然后加入丙酮2.0 mL，混匀2.0 min在混匀器上，置于离心机上3 000 r/min离心10 min，取其上清液，合并萃取液，用丙酮定容至4.0 mL并摇匀，遂用气相色谱仪分析（美国安捷伦公司，型号Agilent 7890A）。经过丙酮萃取以后，采用火焰光度气相色谱法测定甲胺磷农药含量。

中毒患者入院后立即给予常规洗胃，常规氯磷定、阿托品等治疗。

1.6 统计学方法

采用SPSS10.1统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，2组间比较采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组患者血药浓度比较

重度中毒组血药浓度明显高于轻中度中毒组，2组比较差异有高度统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 各组血药浓度比较（x±s）

2.2 3组T淋巴细胞亚群水平比较

单因素方差分析结果显示，3组CD8+CD28+、CD8+CD28-水平比较差异均有统计学意义（P＜0.01），其中CD8+CD28-于3组间重度中毒组＞轻中度中毒组＞对照组；3组CD3+、CD8+水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），且重度中毒＜轻中度中毒＜对照组。见表2。

SNK-q检验分析结果显示，重度中毒组CD3+、CD8+、CD8+CD28+明显低于轻中度中毒组（q=6.75、6.58、6.48，均P＜0.01）；重度中毒组CD8+CD28-明显高于轻中度中毒组（q=6.54，P＜0.01）。见表2。

表2 3组T淋巴细胞亚群水平比较（x±s）

3 讨论

急性甲胺磷农药中毒是一种以有机磷毒物与机体内胆碱酯酶结合，继而引起全身病理生理变化的疾病。部分资料显示[4]，有机磷农药中毒最初可导致各个实质脏器的病理生理变化，继而会导致T淋巴细胞免疫系统功能的减退。了解血药浓度与生化及免疫学指标的相关性，对急性甲胺磷农药中毒的病情判断、合理指导综合治疗至关重要。

T淋巴细胞使机体的免疫功能得以正常维持。当各T淋巴细胞亚群在数量上发生变化，功能上也发生异常时，机体免疫功能发生紊乱，继而出现一系列病理生理变化。

本次试验通过对重度中毒组、轻中度中毒组、正常组的血药浓度比较，发现重度中毒组明显高于轻中度中毒组，能一定程度反映中毒程度。CD3+是成熟总T细胞的标志之一，本研究还发现急性甲胺磷中毒患者CD3+的水平重度中毒＜轻中度中毒＜对照组。CD3+与TCR组成T细胞膜受体复合物[5]。CD3+下降表明成熟T细胞总数减少，原因可能是急性甲胺磷农药中毒患者T细胞凋亡增加，是T细胞与疾病作斗争的结果，使机体避免遭受过强的免疫反应，使其免于继发性损伤。

CD8+T细胞的细胞增生和细胞转换可以维持机体免疫内稳状态[6]。急性甲胺磷农药中毒后患者CD8+T细胞及其亚群的明显消亡使得CD8+T细胞免疫储备量迅速减少，不能充分接触抗原发生免疫应答[7]。急性甲胺磷中毒患者CD8+CD28-较正常人高，重度中毒组＞轻度中毒组，且血药浓度越高，CD8+CD28-越高；而CD8+CD28+随着血药浓度越高，降低愈显著。根据CD28的表达与否CD8+T细胞分为CD8+CD28-及CD8+CD28+；CD8+CD28+即杀伤效应细胞，可以溶解靶细胞还可诱导细胞的凋亡，发挥杀伤作用；而CD8+CD28-T细胞是记忆性CD8+T细胞的标志，其中一部分为调节性T细胞（Treg），主要起下调作用（即抑制作用），该群细胞比例往往随年龄增加而增多，在自身免疫病中细胞数下降，即该细胞的增多或功能增强意味着免疫功能下降；CD8+CD28-T细胞的增加和CD8+CD28+T细胞的缺失是T细胞功能下降的主要标志[8]。

综上所述，本研究提示，急性甲胺磷农药中毒患者中毒后CD8+CD28+、CD8+CD28-及血药浓度与中毒程度密切相关，血药浓度越高，中毒程度越重，CD3+、CD8+下降愈明显，CD8+CD28-T细胞的增加和CD8+CD28+T细胞的缺失预示着细胞免疫功能低下或失衡，免疫失衡加速病情的进展，感染发生的概率增加，甚至发生多脏器功能衰竭，无疑增加了治疗难度。因此，临床上急性甲胺磷农药中毒患者细胞免疫功能低下与中毒剂量、病情严重程度有关，治疗上除了胆碱酯酶复能剂与阿托品外，早期应注意毒物的清除，减少毒物吸收，也应注意免疫功能的调节与改善，以便提高患者的治愈率。

[1] 陆再英, 钟南山. 内科学[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2001: 1139-1143.

[2] 叶任高. 内科学[M]. 5 版. 北京: 人民卫生出版社, 2002: 956-957.

[3] 彭树楠. 有机磷中毒抢救治疗与管理[M]. 北京: 群众出版社, 1990: 64-65.

[4] 刘林修, 刘思管, 程文伟, 等. 血清单核细胞趋化蛋白-1 在急性有机磷农药中毒中的表达及临床意义[J]. 中国急救医学, 2011, 31(1): 69-70.

[5] GANSE W G, EKKENS M, NGUYEN D, et al. The development of CD4+T effector cells during the type 2 immune[J]. Immunol Res, 1999, 20(1): 55-65.

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（责任编辑：高艳华）

Correlation and significance of acute organophosphorus pesticide poisoning with CD8+CD28+T cells, CD8+CD28-T cells

PENG Guangjun, YANG Weihong, CAO Guohui, CHANG Haizhe, JIA Xuemei
(Department of Emergency Medicine, Affiliated Hospital of Hebei University, Baoding 071000, China)

Objective To investigate the early blood drug concentration correlations of acute methamidophos poisoning with T lymphocyte subsets. Methods 92 patients with acute methamidophos pesticide taken orally admitted into Affiliated Hospital of Hebei University between January, 2007 to June, 2013 were selected. According to the degree of poisoning, they were divided into mild, moderate poisoning group (54 cases) and severe poisoning group (38 cases), another 92 healthy people who taken physical check-up as control group. Detection and analysis of the relationship between serum drug concentration and toxic CD3+, CD8+, CD8+CD28+, CD8+CD28-were conducted. Results The concentration of blood drug level of severe poisoning group was significantly higher than that of mild and moderate poisoning group (P＜0.01). CD3+, CD8+, CD8+CD28+cell number were decreased significantly than that of mild and moderate poisoning group (P＜0.01). but the number of CD8+CD28-cells were significantly increased than that of mild and moderate poisoning group (P＜0.01). Conclusion The higher the early blood drug concentration of acute methamidophos poisoning, the degree of poisoning is severer, the more seriously impaired the immune cells are.

Methamidophos; blood drug concentration; CD8+CD28+; CD8+CD28-

R595

A

1674-490X(2014)04-0008-04

2014-06-05

保定市科学技术研究与发展计划项目（12ZF080）

彭广军（1965—），男，河北枣强人，主任医师，硕士，主要从事急诊医学研究。E-mail: pgj650625@sina.com