鄂西北地区不同采收期竹叶柴胡中柴胡多糖含量变化*

叶方,杨光义,杜士明,王刚,杜婷,孙荣进

(1.湖北医药学院附属太和医院药学部,十堰 442000；2.湖北医药学院药学院,十堰 442000)

鄂西北地区不同采收期竹叶柴胡中柴胡多糖含量变化*

叶方1,杨光义1,杜士明1,王刚1,杜婷1,孙荣进2

(1.湖北医药学院附属太和医院药学部,十堰 442000；2.湖北医药学院药学院,十堰 442000)

目的 以鄂西北地区竹叶柴胡为样本,研究柴胡多糖的动态变化规律,探讨该地区竹叶柴胡最佳采收期。方法采用蒽酮-硫酸比色法,检测波长620 nm,分别测定柴胡中可溶性多糖和粗多糖,计算总多糖含量。结果不同采收期竹叶柴胡中柴胡多糖含量为9.642%～15.479%,具有明显差异,总多糖含量在11月底种子成熟时最高。结论鄂西北地区竹叶柴胡的最适采收期为每年11月底。

竹叶柴胡,鄂西北;多糖;采收期

柴胡是传统大宗药材,《中华人民共和国药典》只收载了伞形科植物北柴胡(BupLeurum chineseDC.)或狭叶柴胡(BupLeurum scorzonerifo Liumwilld.)的干燥根,但竹叶柴胡(BupLeurum marginatumWall.ex DC.)也作为柴胡市场上第三大药材来源广泛应用[1-2]。鄂西北地区所产竹叶柴胡因质量较优而畅销国内外[3],说明鄂西北地区的气候条件适合该植物生长,有利于在本地区发展符合《中药材生产质量管理规范》(Good Agricultural Practices,GAP)的种植。而确定最佳采收期是GAP种植的关键技术,笔者以柴胡多糖为指标考察其在不同生长周期累积情况,为建立柴胡GAP种植的关键技术提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 TU-1901型双光束紫外-可见光分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；FA2004型电子天平(上海精科公司)；CQX25-06型超声波震荡器(上海必能信超声有限公司)。

1.2 试药 柴胡样品经湖北中医药大学中药资源和中药复方教育部重点实验室陈科力教授鉴定为竹叶柴胡(BupLeurum marginatumWall.ex DC.)。样品在阳光下晒干后打粉,过孔径0.25 mm(四号)筛备用。无水葡萄糖(天津市科密欧化学试剂开发中心,批号: 20020128,含量99.2%)；蒽酮、浓硫酸、盐酸等试剂均为分析纯,水为自制纯化水。

2 方法与结果

2.1 样品溶液的制备

2.1.1 可溶性多糖的提取 精密称取60℃干燥至恒质量的竹叶柴胡粉末1 g,置具塞三角烧瓶中,加入82%乙醇溶液45 mL浸泡30 min后超声提取30 min两次,过滤,合并两次滤液于100 mL量瓶中,加82%乙醇溶液定容,备用[4]。保留滤渣备用。

2.1.2 粗多糖的提取 将“2.1.1”项中的滤渣60℃烘干,加入2%盐酸溶液45 mL,100℃水浴提取两次,每次1 h,冷却后过滤。合并两次滤液至100 mL量瓶中,以2%盐酸溶液定容,备用。

2.2 对照品溶液的制备 取无水葡萄糖于60℃烘1 h,再逐渐升温至105℃干燥至恒质量。精密称取干燥恒质量的无水葡萄糖10.3 mg置100 mL量瓶中,用纯化水溶解并定容至刻度,作为对照品溶液贮备液。

2.3 显色剂的制备 称取蒽酮0.2 g,置100 mL量瓶中,逐渐加入浓硫酸至刻度,边加边搅拌使蒽酮充分溶解,作为显色剂备用(需用前现配)。

2.4 线性关系考察 分别精密量取“2.2”项中的对照品贮备液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL置于具塞试管中,以纯化水补足1.0 mL后每支试管中加入蒽酮-硫酸5.0 mL,迅速摇匀,暗处放置30 min待溶液完全冷确后于620 nm处测定吸光度,记录数据,以无水葡萄糖的质量X(mg)为横坐标,以吸光度(A)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:A=5.887 5X-0.022 2,r=0.995 7,说明无水葡萄糖在0.021～0.103 mg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验 取含量测定项下同一供试品溶液,连续测定6次,记录吸光度,得RSD为1.59%,表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性实验 取含量测定项下同一供试品溶液,分别于0,15,30,60,120,180 min测定吸光度,结果RSD为1.82%,表明供试品溶液在3 h内稳定。

2.7 重复性实验 精密称取9月采集的竹叶柴胡粉末6份,每份1.0 g,按“2.1”项样品提取方法处理,提取可溶性多糖和粗多糖,测定吸光度,结果可溶性多糖和粗多糖的RSD分别为1.73%,1.96%,表明方法重复性较好。

2.8 加样回收率实验

2.8.1 可溶性多糖加样回收率实验 精密称取已知可溶性多糖含量的9月采集的竹叶柴胡粉末6份,每份1.0 g,置具塞锥形瓶按“2.1.1”项方法处理,样品提取后于滤液中分别精密加入6.03 mg·mL-1葡萄糖对照品溶液4 mL,以82%乙醇定容后,按“2.4”项操作,计算可溶性多糖含量和回收率,结果平均回收率为97.65%,RSD=2.13%,见表1。

2.8.2 粗多糖加样回收率实验 取“2.1.1”项滤渣按“2.1.2”项方法处理,样品提取后于滤液中分别精确加入19.02 mg·mL-1葡萄糖对照品溶液5 mL,以2%盐酸定容至100 mL,混匀,从中精密量取2 mL稀释至50 mL,测定吸光度,计算粗多糖加样回收率,结果粗多糖平均回收率为98.04%,RSD=1.29%。见表2。

表1 可溶性多糖的加样回收实验Tab.1 Recovery test of the soluble polysaccharide

表2 粗多糖的加样回收实验Tab.2 Recovery test of the crude polysaccharide

2.9 含量测定

2.9.1 可溶性多糖的含量测定 精密量取“2.1.1”项可溶性多糖提取液5.0 mL加82%乙醇稀释至25 mL量瓶中,混匀后,从中精密量取1.0 mL加入具塞试管中,再加入显色剂蒽酮-浓硫酸试剂5.0 mL,迅速混匀,避光放置30 min,冷却至室温,以82%乙醇为空白,在波长620 nm处测定吸光度,计算可溶性多糖含量。

2.9.2 粗多糖的含量测定 取“2.1.2”项粗多糖提取液2.5 mL置25 mL量瓶中,加2%盐酸定容至刻度,混匀后,精密移取1.0 mL至具塞试管中,再加入蒽酮-浓硫酸试剂5.0 mL,迅速混匀,避光放置30 min,冷却至室温,以2%盐酸溶液为空白,于波长620 nm处测定吸光度,记录数据,结果见表3。

可见,柴胡中可溶性多糖、粗多糖的动态变化规律基本一致,从春末到秋季,柴胡多糖含量呈上升趋势[5],到种子成熟、地上部分枯萎,根部开始发出越冬芽时多糖含量又开始下降。

3 讨论

对鄂西北地区竹叶柴胡不同采收期多糖含量动态积累规律分析表明,水溶性多糖含量呈持续上升趋势；粗多糖在7月底含量反而下降,随后又明显上升,直到11月种子完全成熟,地上部分开始枯萎,至12月从根部发出越冬芽,多糖含量又开始缓慢下降,但仍然高于春末夏初柴胡中多糖含量,说明从柴胡多糖的角度,种植基地竹叶柴胡最佳采收期是在种子成熟以后。

表3 不同采收期柴胡中柴胡多糖含量测定结果Tab.3 Content determination of polysaccharides from Bupleurum at various collecting %

对柴胡生长的物候学观察发现:同一地域,不同产区种植的柴胡生长周期也有明显差别,十堰城区湖北医药学院百草园种植的竹叶柴胡生长周期比房县柴胡种植示范基地中种植的柴胡提前1个月。种植时间不同、每年气候差异也会影响其生长周期,所以应根据时间结合生命周期确定柴胡最佳采收期。

前期实验表明,按照《中华人民共和国药典》控制柴胡质量方法测定不同采收期柴胡皂苷a、d含量,结果在7月柴胡皂苷a、d含量达最高值,随后呈下降趋势[5],与本实验中测量柴胡多糖走势相反,说明柴胡在生长过程中,不同成分动态累积过程并不一致,可能会发生相互转化,也说明采收药材的最佳时期还应结合用药目的确定。

[1] 中药辞海编委会.中药辞海[M].北京:中国医药科技出版社,1996:2035.

[2] 肖培根.新编中药志(第一卷)[M].北京:化学工业出版社,2002:784.

[3] 杜士明,叶方,杨光义,等.鄂西北地区柴胡资源调查研究[J].中药材,2012,35(6):866-869.

[4] 叶方,杨光义,杜士明,等.鄂西北地区不同生长条件和品种柴胡中多糖含量比较研究[J].医药导报,2012,31 (10):1268-1270.

[5] 蔡华,杜士明,叶方,等.鄂西北地区竹叶柴胡不同采收期柴胡皂苷a、d含量动态积累研究[J].现代中药研究与实践,2014,28(1):17-19.

DOI 10.3870/yydb.2014.09.030

Content Variation of Bupleurum Polysaccharides from Bupleurum marginatum at Different Collecting Periods in Northwest of Hubei Province

YE Fang1,YANG Guang-yi1,DU Shi-ming1,WANG Gang1,DU Ting1,SUN Rong-jin2
(1.Department of Pharmacy,Taihe Hospital Affiliated with Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China;2.School of Pharmacy,Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China)

Objective To study the dynamic change of polysaccharides fromBupleurum marginatumin Northwest ofHubeiprovince,and to explore the optimal harvest period forBupleurum marginatum.MethodsThe contents of soluble and crudeBupleurumpolysaccharides were determined by anthrone-sulphuric acid colorimetric method and detected at 620 nm,and total polysaccharide content was calculated.ResultsThe content of polysaccharides at various collecting periods was very different from 9.642%to 15.479%,and reached the highest level in November when the seed comes to mature. ConclusionThe optimal harvest period forBupleurum marginatumin Northwest ofHubeiis at the end of November.

Bupleurum marginatumWall.ex DC.;Northwest ofHubeiprovince;Polysaccharides;Collecting periods

R282.71；R927.2

B

1004-0781(2014)09-1219-03

2013-09-20

2014-03-30

*科技部2010年度科技型中小企业技术创新基金资助项目(10C26214204534)；湖北省2011年计划项目(2011JA-2013CXTT09)

叶方(1971-),男,湖北十堰人,副主任药师,副教授,学士,从事医院药学工作。电话:0719-8801393,E-mail:yxwen8801129@sina.com。

杨光义(1975-),男,湖北十堰人,副教授,副主任药师,博士,主要研究方向:中药资源开发和新药研究。电话:0719-8801393,E-mail:ygy996@163.com。