赤霉酸A4，A7原药高效液相色谱分析方法的研究

（江西新瑞丰生化有限公司,江西 新干 331307）

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采用高效液相色谱分析法对赤霉酸A4,A7原药中的A4,A7进行分离与测定，将甲醇与水作为流动相，调整甲醇与水的体积比，在210nm波长下，使用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的不锈钢柱和可调波长紫外检测器，对试样中的赤霉酸A4,A7进行高效液相色谱分离和测定。结果表明，此方法属于准确、可靠、快速、简单的分析方法。

赤霉酸A4,A7原药；高效液相色谱；甲醇；分析方法

1 前言

赤霉酸GA4+7属植物生长调节剂，是GA4和GA7的混合物，在国外得到广泛应用。它不仅能改善果蔬的品质，还能改变果形和大小，提高单果重量，从而达到显著增产的目的。赤霉酸A4，A7原药的ISO通用名：GibberellinA4，A7，原药为白色结晶粉末，熔点：GA4：222ºC；GA7：202ºC。本文采用高效液相色谱法对赤霉酸A4，A7原药中A4，A7进行分离和测定。

2 实验部分

（1）实验试剂和溶液。二次蒸馏水、甲醇（色谱纯）、甲酸（分析纯）、赤霉酸GA4，GA7标准品：已知质量分数≥95.0％.（GA4质量分数：63.5％；GA7质量分数：31.5％）。

（2）实验仪器。高效液相色谱仪；可调波长紫外检测；数据处理站；C18柱；微量进样器：50μL；过滤器，滤膜孔直径为0.45μm。

（3）高效液相色谱操作条件。流动相：甲醇+水+甲酸=67+33+0.05（V/V）；流速：0.7mL/min，柱温：30ºC；检测波长：210nm，进样体积：20μL左右，而赤霉酸GA4保留时间约9.4min，GA7保留时间约11.0min。

图1 试样中赤霉酸A4，A7高效液相色谱图

（4）制备标样溶液。称取赤霉酸A4，A7标准品25 mg（精确到0.0002g）于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度。

（5）制备试样溶液。称取试样25 mg（精确到0.0002g），于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度。

（6）实验测定。在上述高效液相色谱操作条件下，等仪器基线稳定之后，连续注入数针标样溶液，待相邻两针的相对响应值变化均小于1.5％时，按标样溶液、试样溶液、试样溶液，标样溶液的顺序进行测定。

（7）结果计算。将测得的两针试样溶液以及试样溶液前后两针标样溶液中GA4与GA7峰面积之和分别进行平均。，按照下列公式计算试样中赤霉酸

上述计算公式中，A1—标样溶液中GA4、GA7的峰值面积之和平均值；A2—试样溶液中GA4、GA7的峰值面积之和平均值；m1—标样质量（g），m2—试样质量（g），P—标样溶液GA4、GA7的质量分数（％）。

3 结果分析

（1）液相色谱条件。参照赤霉酸原药的国家标准检测方法[1]，通过调整甲醇与水的体积比，当甲醇与水的体积比为67比33时 ，基线平稳，GA4，GA7的峰型好，避免了峰拖尾的现象，分离效果较好。

（2）标准曲线的线性分析。不同浓度梯度的GA4+7的HPLC的吸收值（见表1），以赤霉酸浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标绘图，能够得到赤霉酸线性方程y=43131x-285.74（图2），相关系数是0.9997。

表1

图2 赤霉酸线性图

（3）测定方法的精密度。在上述色谱操作条件对同一样品平行测定5次，赤霉酸 （GA4+GA7）的标准偏差是，0.38，RSD为0.4％

（4）测定方法的准确度。通过在已知含量的样品中添加不同质量的标样，在上述色谱操作条件下进行测定，经过计算，赤霉酸的回收率的平均值为99.45％，分析方法准确度实验结果（见表3）。

表2

表3 分析方法精度实验结果

4 结论

在本文的高效液相色谱的检测条件下对赤霉酸GA4+ GA7可以准确检测出来，分离效果好，GA4和GA7的峰型良好，保留时间稳定，操作快速、方便，而且精密度、准确度较高，和定量分析的要求一致，属于准确、快速、简单实用的分析方法。

[1]中国石油和化学工业协会.GB 15955-2011,赤霉酸原药[S].北京：中国标准出版社,2011.

[2]雷琪，于福利，王玉萍.3.6％苄氨·赤霉酸可溶液剂高效液相色谱分析方法研究[J].现代农药,2012,11（06）：20-21.

[3]戴冬艳,朱静毅,闻琍毓.液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的应用[J].天津药学,2012,7（13）：99-100.

[4]王伟丽.高效液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的应用[J].中国药业,2009,18（14）：83-84.

赤霉酸A4，A7原药高效液相色谱分析方法的研究

王红亚,张 丽