薰衣草提取物对小鼠H22移植瘤的抑制作用

宋晓琳，彭瀛，沈明花

（延边大学医学院，吉林延吉133000）

薰衣草（Lavender angustifolia）为唇形花科薰衣草属多年生常绿亚灌木，因气味芳香，常用作芳香剂、驱虫剂及配制香精的原料。研究表明它具有抗氧化[1]、抗真菌[2]、抗炎止痛[3]、保肝[4]、抗焦虑[5]等功效，并有镇静作用，对老年性痴呆有治疗效果[6]。但是，对肿瘤方面的研究很少。我们曾研究薰衣草的体外抗肿瘤作用，发现薰衣草提取物对A549、SMMC7721细胞体外抗增殖作用[7]。在此基础上本文进一步研究薰衣草对移植性实体瘤H22的抑制作用，并初步探讨其抗肿瘤机制。

1 材料与试剂

1.1 样品的制备

熏衣草购置韩国相洙香草企业。称取100 g粉碎后的熏衣草中加入80%乙醇溶液500 ml，浸泡72 h后将上清液过滤，残渣重复以上操作一次。合并两次所得萃取，旋转蒸发除去乙醇，将浓缩液冷冻干燥制得熏衣草乙醇提取物样品。

1.2 实验动物

昆明种雄性小鼠，体重为18 g～22 g。

1.3 试剂

蛋白质测定试剂盒购于南京建成科技有限公司，TNF－α、IL－6和VEGF试剂盒购于北京博雅祥达科贸有限责任公司。

1.4 瘤株

小鼠肝癌H22瘤株，由本校预防医学教研室提供。

2 方法

2.1 实验分组及模型制备

将60只小鼠按体重随机分为六组，设正常组、模型组、环磷酰胺组、薰衣草低、中、高剂量组（50、100、200 mg/kg）。无菌条件下抽取传代7 d的H22荷瘤小鼠腹水，台酚蓝染色后光镜下观察活瘤细胞数，选取活细胞数大于95%的进行动物实验。腹水用生理盐水稀释，调整细胞浓度为5×105个/mL。常规皮肤消毒后，除正常组外，每只小鼠的右前肢腋部皮下接种0.2 mL瘤液。接种次日起，用药组每日灌胃1次，连续10 d，给药剂量分别为50、100、200 mg/kg体质量；阳性对照组以20 mg/kg体质量隔日腹腔注射环磷酰胺；正常组和模型组每日灌胃等容积0.9%氯化钠溶液。

2.2 抑瘤实验

末次给药后次日称取小鼠体重，摘眼球取血，脱椎处死小鼠。剥离肿瘤组织，精密称定重量。按下列公式计算抑瘤率。抑瘤率（%）=（模型组平均瘤重－用药组平均瘤重）/模型组平均瘤重×100%。

2.3 脏器指数分析

处死动物，剖取胸腺和脾脏，按下式计算脏器指数：脏器指数（mg/g）=脏器重量/体重

2.4 白细胞数的测定

每只小鼠取血20 μL，加入180 μL的白细胞计数液，混匀，计白细胞数。

2.5 血清白蛋白、TNF－α、IL－6和VEGF的测定

眼球取血后以2 500 r/min，离心15 min，分离出血清。按试剂盒说明书进行操作。

2.6 统计学处理

用SPSS统计软件处理，数据以均数±标准差（x，s）表示，组间均数比较行单因素方差分析。

3 结果

3.1 薰衣草对荷瘤小鼠的抑瘤作用

如表1所示，环磷酰胺和薰衣草中剂量组明显抑制肿瘤的生长；各剂量用药组与环磷酰胺组相比，体重明显增加。阳性对照组虽然肿瘤的抑制作用显著，但同时伴有动物体重的下降。

表1 薰衣草对体重及瘤重的影响Table 1 Effect of Lavender angustifolia on the body weight and tomor weight

3.2 薰衣草对白细胞数及免疫器官的影响

如表2所示，环磷酰胺组胸腺指数和白细胞数显著降低（P＜0.01），而薰衣草用药组明显提高胸腺指数和白细胞数。

表2 薰衣草对H22荷瘤小鼠免疫器官及白细胞的影响Table 2 Effect of Lavender angustifolia on the WBC，thymus and spleen indexes

3.3 薰衣草对细胞因子的影响

模型组和环磷酰胺组白蛋白水平下降明显，薰衣草高剂量组可提高白蛋白水平。中、低剂量用药组上调TNF-α和IL-6水平，而对白蛋白含量的影响不明显。高、中剂量用药组显著下调VEGF水平。在所用实验浓度范围内环磷酰胺对3种细胞因子的作用不明显，结果见表3。

表3 薰衣草对荷瘤小鼠血清白蛋白和细胞因子的影响Table 3 Effect of Lavender angustifolia on serum albumin and cytokines in mice

4 讨论

实验结果显示环磷酰胺和薰衣草不同程度地抑制实体瘤的生长。本实验所设的剂量范围内薰衣草的最大抑瘤率为42.6%，不如环磷酰胺的抑瘤率高（85.7%），但无环磷酰胺组小鼠的体重减轻、白细胞数和胸腺指数下降等明显的副反应。模型组小鼠白蛋白水平明显下降，而薰衣草高剂量组白蛋白水平升高，与模型组相比有显著性差异。这些结果可以说明，在本实验条件下薰衣草无明显副作用。

免疫功能的衰退或失调与肿瘤的发生、发展密切相关。大量研究表明，多种细胞因子影响免疫功能。本实验中我们观察了用药后血清TNF-α和IL-6水平的变化。实验结果表明，薰衣草中、低剂量组提高血清TNF-α、IL-6水平。中草药的抗肿瘤作用机理除了直接杀伤肿瘤细胞的细胞毒性作用以外，还通过促进宿主的免疫反应而间接发挥作用。有些中药成分的抗肿瘤作用与它的免疫调节功能有关。如，克癌新能升高细胞因子IL-2、IL-6 IL-12和TNF-α水平，抑制肿瘤细胞的增殖[8]。也有研究报道，IL-6抑制人乳腺癌细胞（MCF-7）的增生，并具有诱导细胞凋亡的作用[9]。由此可推断，薰衣草通过诱生TNF-α、IL-6等细胞因子，诱导肿瘤细胞的坏死或凋亡而达到抗肿瘤效果。

血管生成是肿瘤生长和转移的必要条件之一。因此，抑制肿瘤区血管的生成能显著地抑制肿瘤的生长。VEGF是促进内皮细激活、增殖，促进血管形成的最主要的调控因子。大量研究表明，VEGF在肿瘤组织中大量表达，而正常组织极少表达。本实验中我们观察了血清VEGF水平。结果显示，薰衣草高、中剂量组小鼠血清VEGF水平显著低于模型组，这就提示薰衣草通过抑制或减少肿瘤组织新生血管的生成而起到抗肿瘤作用。

在本实验中环磷酰胺对上述3种细胞因子的影响不明显，这可能与我们所用的环磷酰胺的剂量、用药次数（本实验中隔日注射）以及实验周期有关。另外，本实验中没有观察到薰衣草的量效关系，产生这一现象的原因有待进一步研究。

综上所述，薰衣草对移植瘤有较好的抑制作用，其作用机制可能是调节机体的免疫功能或下调血管内皮细胞生长因子水平有关。

[1] 沈玉秀,伍婷,沈明花.薰衣草提取物抗氧化作用[J].食品科技,2009,34(4):207-209

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[3] Hajhashemi V,Ghannadi A,Sharif B.Anti-inflammatory and analgesic properties of the leaf extracts and essential oil of Lavandula angustifolia Mill[J].Journal of ethnopharmacology,2003,89(1):67-71

[4]沈明花,沈玉秀.薰衣草提取物对小鼠化学性肝损伤的保护作用[J].食品科技,2010,35(7):235-236

[5]Bradley B F,Starkey N J,Brown S L,et al.Anxiolytic effects of Lavandula angustifolia odour on the Mongolian gerbil elevated plus maze[J].Journal of ethnopharmacolog,2007,111(3):517-525

[6]Lin P W,Chan W C,Ng B F,et al.Efficacy of aromatherapy(Lavandula angustifolia）as an intervention for agitated behaviours in Chinese older persons with dementia：a cross-over randomized trial[J].International journal of geriatric psychiatry,2007,22(5):405-410

[7] 沈寿东,崔长旭,沈明花.薰衣草提取物抗肿瘤作用的研究[J].食品科技,2009,34(2):213-215

[8] 肖顺汉,刘明华,钟琳,等.克癌新对荷瘤小鼠 IL-2、IL-6、IL-12和TNF-α水平的影响[J].中药药理与临床,2008,24(2):82-84

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