曼氏迭宫绦虫裂头蚴体外培养系统的建立和实验观察

黄金妹，钟赛凤，吕刚，芦亚君

（海南医学院热带医学与检验医学院，海南海口 571199）

·论著·

曼氏迭宫绦虫裂头蚴体外培养系统的建立和实验观察

黄金妹，钟赛凤，吕刚，芦亚君

（海南医学院热带医学与检验医学院，海南海口 571199）

目的探讨曼氏迭宫绦虫裂头蚴稳定的体外培养介质。方法从野生黑斑蛙体内获取裂头蚴虫体，置于生理盐水、牛肉汤培养液及PRMI 1640培养并观察虫体存活情况。结果在三种不同的培养液中，裂头蚴在生理盐水中存活时间最短，在PRMI 1640中存活时间最长，且虫体活动力也显著高于生理盐水和牛肉汤培养液(P＜0.05)。结论PRMI 1640是曼氏迭宫绦虫裂头蚴在这三种不同培养液中最稳定的体外培养介质。

曼氏迭宫绦虫；裂头蚴；体外培养

曼氏迭宫裂头蚴是曼氏迭宫绦虫(Sparganum mansoni)的中绦期幼虫，在人体内寄生引起裂头蚴病[1]。裂头蚴可侵袭人多种组织和器官，如眼、皮下组织、腹壁、脑、脊髓、肺、乳腺等[2-3]。人感染裂头蚴主要通过三种方式：用蛙肉、蛇肉敷贴伤口或局部红肿患处，裂头蚴从伤口、皮肤和黏膜侵入人体，这是主要感染方式；生食或半生食蛙肉、蛇肉和猪肉等，裂头蚴可穿过肠壁，移行至人体其他器官组织中；饮用生水或游泳时误食剑水蚤，剑水蚤进入人体后，原尾蚴从剑水蚤体内逸出，穿过肠壁进入腹腔、内脏组织或迁移至肌肉皮下组织，发育为裂头蚴。裂头蚴能破坏组织和导致失明或瘫痪，甚至死亡[4-5]。

裂头蚴病是一种严重威胁人类健康的疾病[6-7]，呈世界性分布，流行于全球48个国家。文献报道多数病例出现在中国、韩国、日本等地区[8-9]，其中中国有1 000多例裂头蚴病分布在27个省、市和自治区[10-11]。

目前，裂头蚴病的治疗方案主要以手术方式摘除虫体，保守治疗裂头蚴病尚无有效方案。因此，本文拟探讨曼氏迭宫绦虫裂头蚴稳定的体外培养介质，旨在进一步了解裂头蚴的生理特点，为保守治疗裂头蚴病提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 曼氏迭宫绦虫裂头蚴2013年4月于海口市秀英区郊区采集野生青蛙，处死、剥皮、解剖，仔细观察蛙肉，肉内见白色点状物疑为虫体一端，用镊子轻拉，勿断，显微镜观察鉴定虫种。选取虫体完整、体长4～13 cm、伸缩活动剧烈的裂头蚴作为实验对象。

1.2 培养液配制

1.2.1 牛肉汤培养液50%牛肉汤，0.5%血清、0.5%葡萄糖和适当的林格氏液混于双蒸水中，4℃保存备用，使用前加入1 000 U/ml青霉素。

1.2.2 PRMI 1640培养液PRMI 1640粉剂溶于双蒸水中，4℃保存备用，使用前加入100 U/ml青霉素和链霉素[12]。

1.3 体外培养将检获的裂头蚴置于生理盐水、牛肉汤和PRMI 1640培养液中，于37℃的温箱中培养，每12 h换液。

1.4 观察镜下观察虫体数目、头节及活动情况。判断虫体活动情况标准：Ⅰ级(每秒都有伸缩运动）；Ⅱ级(每5 s一次伸缩运动)；Ⅲ级(每10 s一次伸缩运动)；Ⅳ级(10 s以上进行一次伸缩运动)。

1.5 统计学方法应用SPSS19.0统计学软件对数据进行描述性分析和方差分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 裂头蚴存活时间裂头蚴在生理盐水中存活时间最短，为46 h，在牛肉汤培养液中存活63 h，在PRMI 1640培养液中存活时间最长，为493 h。PRMI 1640培养液中培养的裂头蚴存活时间明显长于其他两种培养液(F=13.836，P＜0.05)。

2.2 裂头蚴虫数在生理盐水和牛肉汤培养液中裂头蚴的数量逐渐减少，在PRMI 1640培养液中的裂头蚴先增加后减少(图1)。

图1 裂头蚴在不同培养液中的虫体数量

2.3 裂头蚴活动力裂头蚴虫体活动力在三种不同培养液中减弱时间不同，在生理盐水、牛肉汤培养液、PRMI 1640培养液中虫体活动力开始减弱时间分别是40 h、16 h及16 h(图2)。

图2 裂头蚴在不同培养液中的活动力

2.4 生长特性观察裂头蚴在生理盐水和牛肉汤培养液中的生长情况，虫体有断裂现象。而在PRMI 1640中，裂头蚴既有断裂也有增殖的现象。

3 讨论

体外培养系统是观察生物现象和生长转归的基本模式[13]，能够用于探索裂头蚴的生长特性及其与宿主之间的关系[14]。体外培养时需定期更换新鲜培养液以便满足虫体生长所需的营养要素及排除代谢产物。

曼氏迭宫绦虫裂头蚴呈长带状，乳白色，大小为30～360 mm×0.7 mm，体表有横纹，不分节。本文主要探讨裂头蚴稳定的体外培养介质，了解裂头蚴在体外培养中的生长特性。研究显示，裂头蚴在生理盐水和牛肉汤培养液存活时间较短，且虫体易断裂，活动力逐渐减弱直至死亡。牛肉汤培养液制备复杂，生理盐水简单易取，所以生理盐水可以作为短期保存裂头蚴的介质。三种培养介质比较，裂头蚴在PRMI 1640培养液中存活时间最长，故PRMI 1640是裂头蚴最稳定的体外培养介质，可用来作为基本实验模型，如抗裂头蚴的药物筛选、可溶性蛋白提取等。

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Reconstruction of cultivation system of Sparganum mansoni in vitro.

HUANG Jin-mei,ZHONG Sai-feng,LV Gang, LU Ya-jun.
Department of Pathogen Biology,Hainan Medical College,Haikou 571199,Hainan,CHINA

>ObjectiveTo build the system of Sparganum mansoni in vitro in order to provide experimental basis for research on Sparganum mansoni.MethodsThe Sparganum mansoni which was obtained from wild frogs was cultured in physiological saline,beef soup culture and PRMI 1640 medium.Activity and numbers of the parasite were observed by anatomical lens.ResultsFrom the survival situation of Sparganum mansoni in three different kinds of culture medium,the survival time in physiological saline was shortest,and the time in PRMI 1640 medium was longest(P＜0.05).The activity and survival time was obviously higher than physiological saline and beef soup culture(P＜0.05).The living worm was found propagation and fracture in PRMI 1640 medium.ConclusionPRMI 1640 medium is most suitable to build the system of Sparganum mansoni in vitro,with the relatively stable culture system.

Sparganum mansoni;Plerocercoid;Culture;In vitro

R383.3+5

A

1003—6350（2014）12—1723—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.12.0671

2013-12-27)

国家级创新创业训练计划项目（编号：201211810057）

芦亚君。E-mail：luyajuncc@163.com