HPLC法同时测定五加芪菊颗粒中刺五加、菊花含量

敖立实

（吉林省白城市食品药品检验所，吉林 白城 137000）

HPLC法同时测定五加芪菊颗粒中刺五加、菊花含量

敖立实

（吉林省白城市食品药品检验所，吉林 白城 137000）

目的 建立高效液相色谱法同时测定五加芪菊颗粒中刺五加（以紫丁香苷计）和菊花（以3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸计）含量的方法，为相关研究提供方法学参考。方法 采用DiamonsilC18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm），流动相：甲醇为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱。检测波长为348 nm。结果 紫丁香苷和3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸的线性范围分别为0.10～40.0 μg/mL（r=0.9984）、0.05～10.0 μg/mL（r=0.9991），方法回收率分别为98.76%（n=6）、94.26%（n=6）。结论 所建立的方法准确、灵敏度高、重现性好，在同一试验过程中，同时测定五加芪菊颗粒中刺五加、菊花含量。

五加芪菊颗粒；高效液相色谱法；刺五加；菊花；紫丁香苷；3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸

五加芪菊颗粒具有益气健脾，消食导滞的功效，用于脾虚食滞所致的高血脂症的治疗[1]。以黄芪、刺五加、菊花、山楂、麦芽五味药材制成，质量标准收载于《国家中成药标准汇编 中成药地方标准上升国家标准部分 内科 气血津液分册》[2]，标准中对黄芪质量进行了控制，但对刺五加和菊花未进行质量控制。本方法采用同一实验方法，同时测定刺五加和菊花的含量，填补了标准的空白，更好的控制了五加芪菊颗粒质量。

1 材料与方法

1.1 仪器

美国安捷伦液相色谱仪1260；BS-223电子天平；ZBS水浴锅。

1.2 试药试剂和对照品

图1 对照（A：紫丁香苷；B：3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸）

图2 紫丁香苷阴性对照

图3 3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸阴性对照

表2 紫丁香苷回收率试验结果

表3 3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸回收率试验结果

紫丁香苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110279-201214；3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100094-201139）；甲醇为色谱纯；水为纯化水。

1.3 色谱条件

色谱柱：DiamonsilC18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 µm)，流动相：甲醇为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长：348 nm；进样量：20 μL；柱温：35 ℃。色谱柱的理论塔板数按紫丁香苷峰计算＞3000。见表1。

表1 色谱条件

1.4 对照品溶液的制备

取紫丁香苷对照品，精密称定10.13 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得；取3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品，精密称定10.05 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，精密量取2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。

1.5 供试品溶液的制备

取本品，研细，取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，置圆底烧瓶中，置水浴上蒸去甲醇，加2.5 mol/L硫酸溶液20 mL，超声处理10 min使溶解，置水浴上加热1 h，取出，放冷，用乙醚提取4次，每次25 mL，合并乙醚液，用水洗涤，低温回收至干，残渣加甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2 方法学考察

2.1 专属性实验

在上述色谱条件下测得的色谱图，分别为混合对照、样品阴性对照，紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸分离良好，其他成分不干扰紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸的测定。见图1～3。

2.2 线性范围

分别精密量取紫丁香苷对照品溶液加甲醇制成0.10、0.20、1.0、5.0、20.0、40.0 μg/mL，3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品溶液0.05、 0.1、0.5、2.0、5.0、10.0 μg/mL注入安捷伦1260高效液相色谱仪，以紫丁香苷对照品峰和3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品峰面积积分值为纵坐标，其进样量为横坐标进行线性回归，分别得回归方程为y=0.0085+0.0578x，r＝0.9984（n=6），y=1.2021+4.8955x，r=0.9991（n=6）说明紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸在0.10～40.0 μg/mL和0.05～10.0 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.3 精密度试验

取紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品溶液，注入安捷伦1260液相色谱系统，进样量为20 μL，重复进样6次，峰面积的平均值分别为7502356、5036511，其RSD为0.37%（n=6）。表明精密度良好。

2.4 稳定性试验

取紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品溶液，注入安捷伦1260液相色谱系统，进样量为20 μL，在2、4、6、10、12、24、48 h分别测定。结果峰面积平均值分别为7482365、5012398，其RSD为0.56%（n=6）。表明溶液在48 h内稳定性良好。

2.5 回收率试验

分别精密称取紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品20.24 mg、5.08 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

另精密称取5批已知含量的五加芪菊颗粒内容物适量，置100 mL量瓶中，加甲醇约50 mL，溶解，精密加上述对照品溶液10 mL，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得，分别精密吸取20 μL，注入高效液相色谱仪，按1.3项下色谱条件测定，以外标法计算，结果见表2、3。

3 小 结

本实验对五加芪菊颗粒中刺五加、菊花中的有效成分紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸进行分析，探索用一种实验方法对2种成分的同时测定，填补了标准的空白，有效的控制了五加芪菊颗粒的质量。

[1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].2010版.北京:中国医药科技出版社,2010.

[2] 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编[M].北京:人民卫生出版社,2002.

Simultaneous Determination the Content of Acanthopanax, Chrysanthemum in Wujia Qiju Granule by HPLC

AO Li-shi
(Baicheng Institute for Food and Drug Control, Baicheng 137000, China)

Objective To establish a method for simultaneously determining the content of acanthopanax (as measured by syringin), Chrysanthemum(as measure by (-)-3,5-Dicaffeoyl quinic acid) in Wujia Qiju granule. Methods Simultaneously determined by HPLC on DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm,5 µm) by mobile phase of methanol (A) and 0.1% phosphonic acid solution (B) with gradient elution. Detection wavelength is 348 nm. Results The linear concentration ranges of the calibration curves for syringin and (-)-3,5-dicaffeoyl quinic acid were 0.10～40.0 μg/mL(r=0.9984),0.05～10.0 μg/mL(r=0.9991), respectively. The average recoveries for syringin and (-)-3,5-dicaffeoyl quinic acid were 95.42% (n=6),91.73%(n=6), respectively. Conclusion The method is accurate, highly sensitive and reproducible for simultaneously determination of content for acanthopanax and chrysanthemum in a single run by HPLC.

Wujia Qiju granule; HPLC; Acanthopanax; Chrysanthemum; Syringin; (-)-3,5-dicaffeoyl quinic acid

R914.1

B

1671-8194（2014）20-0035-02