中国汉族人群Ghrelin基因Leu72Met多态性与2型糖尿病相关性Meta分析

崔兆辉，宋瑞娟，胡长军，陆卫平

（南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科1、医保处2，江苏 淮安 223300）

·循证医学·

中国汉族人群Ghrelin基因Leu72Met多态性与2型糖尿病相关性Meta分析

崔兆辉1，宋瑞娟2，胡长军1，陆卫平1

（南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科1、医保处2，江苏 淮安 223300）

目的探讨ghrelin基因Leu72Met(C408A)位点多态性与中国汉族2型糖尿病（T2DM）人群发病的关系。方法检索中国生物医学文献数据库、万方医学网，检索时间范围包括2013年5月之前的所有文献，分别检索到研究ghrelin基因Leu72Met位点多态性与中国汉族T2DM相关文献15篇。按纳入、排除标准选取病例，采用RevMan4.2.10分析其相关性。结果纳入研究文献5篇（涉及l 132例2型糖尿病患者和961名对照组)。Meta分析结果表明，中国汉族人群2型糖尿病与Leu72Met位点多态性相关：AA基因型与CA基因型和CC基因型合并后比较，固定效应模型OR=2.55，95%CI：1.07～6.11，P=0.03；AA基因型与CC基因型比较，固定效应模型OR=2.63，95%CI：1.09～6.30，P=0.03；等位基因A与C比较，固定效应模型OR=1.30，95%CI：1.06～1.60，P=0.01。结论Ghrelin基因Leu72Met位点多态性与中国汉族人群2型糖尿病的发生发展可能有关。

2型糖尿病；Ghrelin基因；Leu72Met；基因多态性；Meta分析

Ghrelin是生长激素促分泌素受体的内源性配体，由日本学者Kojima在胃的内分泌细胞中发现，具有促进生长激素分泌、增加食欲、促进脂肪合成、调节能量代谢及糖代谢等作用[1-2]。Korbonits等[3]发现ghrelin基因存在10个多核苷酸多态性，其中Leu72Met较为常见，其多态性与2型糖尿病(Type 2 diabetes，T2DM)及脂代谢有一定关系，但研究结果在不同地域、不同种族之间有所差异。本研究就中国汉族2型糖尿患者群ghrelin基因Leu72Met多态性与对照组(Control)进行Meta分析，旨在为中国汉族人群T2DM与Leu72 Met基因多态性的关系提供循证依据。

1 资料与方法

1.1 资料来源以2型糖尿病、ghrelin、Leu72Met基因多态性为检索词，联合检索2013年5月以前的中国生物医学文献数据库和万方医学网并获得全文。

1.2 方法

1.2.1 文献纳入标准国内外公开发表的中国汉族人群ghrelin基因Leu72Met多型态相关性的研究文献；研究设计是病例对照研究，病例组为2型糖尿病，对照组为健康人群；可获得等位基因频率和(或)基因型频率。

1.2.2 文献排除标准对糖尿病合并其他疾病、原始文献中无对照组、重复报告文献、数据不完整及针对国内少数民族研究的文献进行剔除。

1.2.3 质量控制根据STREGA[4]原则对纳入的每个病例对照研究进行质量评价：(1)样本量是否充分；(2)诊断标准是否清楚；(3)分组匹配情况；(4)对照组基因型分布是否符合Hardy-Weinberg(H-W)遗传平衡定律；(5)基因检测方法是否合理；(6)数据是否充分。以上6项，每满足一项记为1分，总分≥3分者，表示质量可靠。由2名研究者分别独立完成数据的提取，不一致部分，讨论并征求第三方建议。每篇文献摘录的主要信息包括：(1)第一作者姓名；(2)地域；(3)发表年份；(4)病例组和对照组的病例数及基因型分布频率。

1.3 统计学分析(1)对所选择的研究基因型分布进行H-W遗传平衡检验，对照组不符合H-W遗传平衡定律的文献在敏感性分析中予以剔除后再进行分析；(2)用Meta分析软件Revman4.2.10进行统计学分析；(3)采用漏斗图分析纳入的文献是否存在偏倚；(4)计算各研究等位基因频率、OR值及其95%CI；(5)统计学异质性采用q检验，并给出I2值，若各研究间无显著异质性，则采用固定效应模型进行数据合并，若各研究间存在显著异质性，则采用随机效应模型法进行数据合并，并绘制森林图。

2 结果

2.1 入选文献基本情况通过数据库检索共获取文献共15篇，其中针对少数民族人群研究文献2篇[5-6]，未确切标注为针对汉族人群研究文献1篇[7]，根据纳入及排除标准，将上述文献予以剔除，最终纳入5篇(图1)，包含公开发表论文4篇[8-12]，经遗传平衡检验有1篇文献[8]研究对照组不符合H-W分布。研究对象均为汉族人群，纳入研究中累积2型糖尿病病例1 132例，对照组961例，见表1。

图1 文献筛选流程

2.2 Meta分析结果

2.2.1 野生型纯合子CC为参照的结果变异型纯合子AA基因型与2型糖尿病易感性的关系。经过一致性检验(χ2=2.00，P=0.74)，结果显示各文献间同质，故采用固定效应模型进行统计分析，合并分析结果提示变异纯合子基因型AA与2型糖尿病的易感性有关(OR=2.63，95%CI：1.09～6.30，P=0.03)，见表2。

2.2.2 隐性模型下结果假设突变基因为隐性基因，采用隐性模式来评估变异型纯合子(AA)与2型糖尿病易感性之间的关系。经过一致性检验(χ2= 2.03，P=0.73)，结果显示各文献间同质，故采用固定效应模型。分析结果提示，在隐性模式下，变异基因型(AA)与2型糖尿病的易感性有关(OR=2.55，95%CI：1.07～6.11，P=0.03)，见表2。

表1 纳入的Ghrelin基因Leu72Met多态性与2型糖尿病关联研究的基本情况(例)

表2 Ghrelin基因Leu72Met等位基因及基因型的Meta分析结果

2.2.3 显性模式结果假设突变基因为显性基因，采用显性模式来评估变异纯合子(AA)和变异杂合子(CA)与2型糖尿病易感性之间的关系。经过一致性检验(χ2=0.34，P=0.99)，结果显示各文献间同质，采用固定效应模型进行分析。分析结果提示，在显性模式下，变异基因型(AA+CA)与2型糖尿病的易感性无关(OR=1.25，95%CI：0.99～1.57，P=0.06)，见图2。

2.3 A等位基因与2型糖尿病的关系异质性检验结果提示各研究结果间无统计学异质性(χ2= 0.48，P=0.97)，故采用固定效应模型进行Meta分析。结果显示，具有A等位基因与2型糖尿病的易感性有关(OR=1.30，95%CI：1.06～1.60，P=0.01)，见图3。

2.4 发表偏倚及敏感性分析用Revman4.2.10统计软件绘制漏斗图(图4)，图中各研究围绕中心线对称排列，表示不存在发表性偏倚，将对照组不符合H-W遗传平衡定律的文献[8]剔除再进行Meta分析，结果与剔除前基本一致(表2)，说明本次Meta分析结果稳定性较好，较可靠。

图2 显性模式下Ghrelin基因Leu72Met多型态与2型糖尿病关系的森林图（CA+AA vs.CC）

图3 Ghrelin基因Leu72Met多型态等位基因与2型糖尿病关系的森林图（A vs.C）

图4 评估发布偏倚的漏斗图

3 讨论

Ghrelin是1999年发现胃肠道分泌的28个氨基酸多肽，其作用除促进生长激素(GH)分泌外，还与调节能量代谢及糖代谢的作用等密切相关[1]。ghrelin与其受体结合后可产生增强食欲、刺激摄食、维持能量平衡等作用，故认为是调节能量代谢紊乱的生物学靶点之一[13]。人ghrelin基因位于染色体3p26～p25，含4个外显子[14]。Leu72Met位于第2个外显子中，72位亮氨酸由甲硫氨酸替代。此突变改变了ghrelin原mRNA的结构，可能通过影响蛋白质加工修饰来改变ghrelin的分泌和活性[15]。

研究发现ghrelin基因多态性与糖尿病[16]、肥胖[17]、高血压[18]等疾病有一定联系，其Leu72Met(C408A)是常见的ghrelin基因单核苷酸多态SNP位点，这种突变位于成熟的ghrelin编码区域以外，导致前ghrelin分子末端的1个氨基酸发生改变[3]，其基因型分布在不同的地区和种族之间有差异。白人、黄种人和黑人之间差异较大[17，19-20]。就Leu72Met基因型来说，黑人野生型发生的频率最高，白人次之。国外有报道，Leu72Met(A)携带者与2型糖尿病的风险相关[16]。同样，国内文献报道2型糖尿病AA基因型高于对照组,提示A等位基因可能与2型糖尿病有联系[9]，另有文献报道，Leu72Met多态性与2型糖尿病无关，则与血肌酐[19]、Lp(a)[21]、LDL-C[8]有关。

本研究ghrelin基因Leu72Met多态性Meta分析(A/C)结果显示，人ghrelin基因第2个外显子中408位有C>A突变的糖尿病发病的危险性是其无突变的1.3倍，考虑408位点的A等位基因可能与糖尿病易感性有一定的联系。本文结果也发现，AA与CC、CA+CC基因型进行比较二者之间存在相关性，在森林图中其95%CI横线并不与无效竖线相交，且该横线落在无效线之右侧，故认为病例组的发病率大于对照组的发病率。糖尿病的发生与发展是一种多基因、多环境、多因素和多系统等相互协同、复杂的过程，有文献报道，ghrelin基因多态性可能与LDL-C[8]、肥胖[17]、高血压[18]、Lp(a)[21]等危险因素有关。因此，我们认为Leu72Met基因多态性可能参与了糖尿病的发病机制。

我们对纳入文献进行了H-W遗传平衡检验，除其中1篇文献[8]外，其余研究均符合H-W遗传平衡定律，而剔除该研究文献后，本文Meta分析结果并无明显的改变。我们采用了漏斗图来评估发表偏倚，提示本文并无显著的发表偏倚，说明本文Meta分析结果较可靠。

由于Meta分析是在总结既往已发表文献的基础上进行的统计分析，因此无法获取如性别、年龄、生活方式、遗传因素、相关生化指标等更加详尽的资料，因而上述潜在混杂因素的存在可能对本次分析的OR值产生一定程度的影响，由于本研究中的AA基因型频率较低，纳入的研究人数有限，使计算得到的合并OR值和95%CI较宽。

综上所述，本研究对中国汉族人群ghrelin基因Leu72Met多态性与糖尿病相关研究进行Meta分析。鉴于本研究的不足，本文结论尚需进行多中心、大样本病例对照试验的验证，我们将继续关注相关研究的进展，以期进一步明确Leu72Met基因多态性与糖尿病发病之间的相关性。

[1]Kojima M,Hosoda H,Date Y,et al.Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptidefrom stomach[J].Nature,1999,402 (6762):656-660.

[2]崔兆辉,时立新,田嘉嘉.初诊Graves病治疗前后空腹血清Ghrelin水平与胰岛素抵抗的关系[J].中华内科杂志,2009,48(7):580-581.

[3]Korbonits M,Gueorguiev M,O'Grady E,et a1.Avariation in the Ghrelin gene increases weight and decreases insulin secretion in tall, obese chi1dren[J].J Clin Endocrinol Metab,2002,87:4005-4008.

[4]Little J,Higgins IP,loannidis IP,et a1.Strengthening the reporting of genetic association studies(STREGA):an extension of the STROBE statement[J].Eur J Epidemiol,2009,24(1):37-55.

[5]刘静,刘佳,马小琴,等.我国东乡族Ghrelin基因Leu72Met多态性与2型糖尿病的关系[J].中国糖尿病杂志,2010,18(3):179-181.

[6]张淑兰,刘静,郭茜,等.Ghrelin基因Ar951Gln、Leu72Met多态性与甘肃回族2型糖尿病及血脂的关系[J].兰州大学学报(医学版),2011,37(1):21-24.

[7]Liu J,Liu J,Tian LM,et a1.Association of ghrelin Leu72Met polymorphism with type 2 diabetes mellitus in Chinese population[J]. Gene,504(2012):309-312.

[8]项莹,谭宁,张众,等,Ghrelin基因Leu72Met多态性与2型糖尿病的相关性[J].中国糖尿病杂志,2011,19(10):729-731.

[9]崔炳权,何震宇,林元藻.Preproghrelin基因Leu72Met多态性与广州地区汉族人群2型糖尿病的相关性研究[J].重庆医科大学学报,2010,35(7):1067-1070.

[10]姜家梅,孙永宁,刘丽梅,等,Preproghrelin基因Leu72Met多态性与T2DM和DN的关系[J].上海交通大学学报(医学版),2008,28 (7):863-866.

[11]刘静,刘佳,张淑兰,等.甘肃东乡族、回族、汉族ghrelin基因多态性与2型糖尿病及脂代谢的相关性[J].中华糖尿病杂志, 2012,4(5):290-295.

[12]许岭翎,向红丁.Ghrelin基因多态性与2型糖尿病的相关性[J].基础医学与临床,2008,28(1):44-47.

[13]Nakazato M,Murakami N,Date Y,et a1.A role for ghrelin in the central regulation of feeding[J].Nature,200l,409(6817):194-198.

[14]Wajnrajch MP,Ten IS,Gertner JM,et a1.Genomic organization of the human ghrelin gene[J].J Endocr Genet,2000,(1):23l-233.

[15]Vivenza D,Rapa A,CastellinoN,et a1.Ghrelin gene polyorphisms and ghrelin,insulin,IGF-I,leptin and anthropoetric data in children and adolescent[J].Eur J Endocrinol,2004,151(1):127-133.

[16]Berthold HK,Giannakidou E,Krone W,et a1.The leu72met polymorphism of the ghrelin gene is associated with a decreased risk for type 2 diabetes[J].Clin ChimicaActa,2009,399(1-2):112-116.

[17]Ukkola0,RavussinE,JacobsonP,et a1.Role of ghrelin polymorphisms in obesity based on three different studies[J].Obes Res, 2002,10(8):782-791.

[18]许岭翎,向红丁.Ghrelin基因Leu72 Met多态性与胰岛素分泌、胰岛素抵抗和糖调节受损的相关性[J].中华糖尿病杂志,2009,17 (1):22-25

[19]Kim SY,Jo DS,Hwang PH,et a1.Preproghrelin Leu72Met polymorphism is not associated with type 2 diabetes mellitus[J].Metabolism,2006,55(3):366-370.

[20]Bing C,Ambye L,Fenger M,et a1.large-scale studies of the Leu 72Met polymorphism of the ghrelin gene in relation to the metabolic syndrome and associated quantitative traits[J].Diabet Med, 2005,22(9):1157-1160.

[21]Ukkola O,Kesaniemi YA.Preproghrelin leu72met polymorphism in patients with type 2 diabetes mellitus[J].J Intern Med,2003,254 (4):391-394.

Relationship between ghrelin Leu72Met polymorphism and type 2 diabetes mellitus among the Chinese Han population:a meta-analysis.

CUI Zhao-hui1,SONG Rui-juan2,HU Chang-jun1,LU Wei-ping1.Department of Endocrinology1,Health Insurance Office2,Huai'an First People's Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Huai'an 223300,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo evaluate the relationship between ghrelin Leu72Met polymorphism and type 2 diabetes mellitus(T2DM)among the Chinese Han population.MethodsWe conducted a computer retrieval of SINOMED,Wanfang databases prior to May 2013.Articles investigating the relationship of T2DM and ghrelin Leu72Met polymorphism of Han group were found through literature.According to the including and excluding criteria,a meta-anatysis was performed in T2DM and ghrelin Leu72Met polymorphism,including 15 articles on Leu72Met polymorphism and T2DM.The association was examined by RevMan4.2.10 software.ResultsFive articles on Leu72Met polymorphism were include(involving l 132 cases of T2DM and 961 controls).Meta-analysis showed that there was a significant association between Leu72Met polymorphism and T2DM:AA/(CA+CC)(fixed-effect model, OR=2.55,95%CI:1.07～6.11,P=0.03).AA/CC(fixed-effect model,OR=2.63,95%CI:1.09～6.30,P=0.03).A/C allele comparison(fixed-effect model,OR=1.30,95%CI:1.06～1.60,P=0.01).ConclusionGhrelin Leu72Met polymorphism may be related with development of type 2 diabetes mellitus in the Chinese Han population.

Type 2 diabetes mellitus(T2DM);Ghrelin genotype;Leu72Met;Gene polymorphism;Meta-analysis

R587.1

A

1003—6350（2014）07—1053—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.07.0410

2013-10-14)

南京医科大学科技发展基金(编号：2012NJMU146)

。崔兆辉。E-mail：cuizhaohui7626@163.com