不同工艺制备替米考星固体分散体及溶出特性研究

吕彪 刘三侠 宋志元 储君 刘建 孙雪峰 张要齐

摘 要：不同工艺制备替米考星固体分散体并研究其溶出特性。通过单因素考察选择载体与药载比后，采用正交设计优选替米考星固体分散体制备工艺，以药物溶出率为考察指标，搅拌速度、搅拌时间、固化时间作为影响因素，每个因素取3个水平，并利用HPLC法测定替米考星含量。结果表明，采用熔融法，以Poloxamer l88为载体，药载比为1∶3，中速搅拌45 min，固化12 h，优化得到的工艺稳定可行，溶出效果较好。

关键词：替米考星；固体分散体；HPLC；溶出度

替米考星是一种由泰乐菌素半合成[1，2]的大环内酯类畜禽专用抗生素，口服给药是临床最常用的给药方式，但由于其水溶性差，难以被胃肠道吸收，导致口服生物利用度低。为解决其难溶问题，本研究以聚乙二醇4000 （PEG4000）、聚乙二醇6000 （PEG6000）、Poloxamer 188（Lutrol F68）、聚乙烯吡咯烷酮（PVPK30）等亲水性高分子化合物为载体，制备替米考星固体分散体，研究其溶解特性，并以药物在水中的溶出度为指标对处方进行筛选。

1 材料

1.1 试剂药品

替米考星，石家庄制药集团化盛制药有限公司；无水乙醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司；PEG 4000，化学纯，南京威尔化工有限公司；PEG 6000，化学纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；PVPK30，化学纯，博爱新开源制药有限公司；Poloxamer 188，化学纯，南京威尔化工有限公司；乙腈，色谱纯，天津市江天化工技术有限公司；磷酸、盐酸、四氢呋喃、二丁胺为分析纯。

1.2 主要仪器

CP214电子天平，奥豪斯仪器（上海）有限公司；XMTD-4000电热恒温水浴锅，北京市永光明医疗仪器有限公司；KQ5200DB数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；XK78-2磁力加热搅拌器，姜堰市新康医疗器械有限公司；UV-5300PC紫外可见光分光光度计，上海美谱达仪器有限公司；BCD-182ZM2冰箱，合肥美菱股份有限公司；智能溶出试验仪 *ZRS-8G 天津大学精密仪器厂；高效液相色谱仪 LC600 北京创新通恒科技有限公司；101-2电热鼓风干燥箱 北京中兴伟业仪器有限公司；SHA-C水浴恒温振荡器 金坛市科析仪器有限公司；pH计 pHs-3C 天津市赛得利斯实验分析仪器制造厂。

2 方法与结果

2.1 替米考星含量检测方法的验证

2.1.1色谱条件选择

色谱条件：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-四氢呋喃-二丁胺磷酸盐缓冲液-水，体积比为10∶5∶5∶80[3]，pH 2.50；检测波长：290 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL。

二丁胺磷酸缓冲液的配制：将10 mL磷酸（ 体积分数为85%） 缓慢地加到 50 mL 纯化水中，定容至100 mL，配制成10%磷酸溶液。将10%磷酸溶液70 mL 加到16.8 mL二丁胺中，边加边搅拌，待溶液冷却至室温，用85%磷酸调节pH至2.5，加超纯水定容至100 mL。

稀释液的配制：将5.7 mL磷酸（ 85%）加入1 000 mL超纯水中，用100 g/L NaOH溶液调节pH至2.5，密封保存。

替米考星待测液（ 0.5 mg/mL ）的配制：精确称取25 mg替米考星至50 mL 的容量瓶中，先加入10 mL乙腈溶解，然后用稀释液定容至50 mL，再以0.22 μm 有机滤膜过滤备用。

替米考星高效液相色谱图见图1。在此色谱条件下替米考星顺式结构与反式结构分离度较好，峰形较佳，而且保留时间适中，各项参数达到最优状态。

2.1.2线性关系考察

精密称取替米考星对照品50 mg，置50 mL的容量瓶中，加入乙腈5 mL溶解，再加流动相至刻度，摇匀，得浓度为1 000 μg/mL的对照品贮备液。分别精密量取对照品贮备液1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、10.0 mL至25 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作对照品溶液。将上述各浓度的对照品溶液，分别进样20 μL，记录峰面积。浓度对峰面积作线性回归，标准曲线见图2。替米考星在40～400 μg/mL范围内，浓度与峰面线性关系良好。

2.1.3精密度试验

精密吸取120 μg/mL 对照品溶液20 μL，重复进样6 次，测量峰面积，峰面积 RSD：0.62%（n=6），精密度良好。

2.1.4稳定性试验

分别精密吸取120 μg/mL 对照品溶液20 μL于0 h、2 h、4 h、8 h、10 h、12 h、24 h进样，测量峰面积，求得峰面积的RSD：0.57%（n=7），稳定性良好。

2.1.5回收率试验

取替米考星对照品约 0.005 g，0.010 g，0.015 g，精密称定，分别置 50 mL 的容量瓶中，加乙腈 5 mL 溶解，然后加入已知含量的样品溶液（300 μg/mL） 5 mL，加流动相至刻度，摇匀，进样，测定替米考星的含量，除去样品本底，计算回收率及 RSD，结果平均回收率：100.08%，RSD：1.77%（n=3）。

2.2 替米考星固体分散体的制备

2.2.1熔融法制备替米考星-PEG和替米考星-Poloxamer l88固体分散体

取 3 g PEG 或 Poloxamer l88 置于烧杯中，63℃左右水浴加热使其熔融，加入1 g 替米考星，边加边搅拌，使替米考星完全融于介质中，继续搅拌60 min。然后从水浴中取出烧杯，迅速倒入预冷的金属托盘中，然后转移至-20℃的冰箱固化24 h，取出置37℃鼓风干燥箱干燥24 h，从托盘中取出，研碎，过80目筛，置干燥器避光保存。

2.2.2溶剂法制备替米考星-PVP K30固体分散体

称取替米考星1 g和PVP K30 3 g于烧杯中，加入50 mL无水乙醇溶解，搅拌，直至替米考星和PVPK30均溶解于乙醇而形成澄明溶液，继续搅拌60 min后，减压蒸发乙醇至黏稠状时，迅速倒入预冷的金属托盘中，然后转移至-20℃的冰箱固化24 h，取出，粉碎成20目的小粒，在50℃鼓风干燥箱中烘24 h以彻底除去溶剂，研细，过80目筛，置干燥器避光保存。

2.3 替米考星固体分散体制备工艺及处方筛选

2.3.1 筛选方法

主要通过考察各工艺及处方下制备替米考星的溶出特性进行筛选。溶出度的测定方法照中国药典2010年版附录ⅩC第三法[4]操作。取供试样品，照溶出度测定三法（小杯法），以200 mL蒸馏水为溶出介质，转速为35 r/min，温度为37℃，依法操作，于2 min、5 min、10 min、15 min、25 min、35 min和60 min取样5 mL，经0.22 μm微孔滤膜滤过，备用，并及时在操作容器中补充相同释放介质5 mL。高效液相色谱法分别测定峰面积，计算出不同时间样品液的浓度，求算药物的累积溶出百分率计算累积溶出度，绘制溶出曲线。

2.3.2 初步筛选

2.3.2.1载体筛选 分别取替米考星与 PEG、Poloxamer l88、PVP K30 按上述方法形成固体分散体，药物与载体的比例为1∶3，测定样品溶出度，绘制溶出曲线，见图3，由图可知，替米考星-Poloxamer l88固体分散体累积溶出量最大，替米考星原料累积溶出量最小。

2.3.2.2药-载比筛选 分别取替米考星与Poloxamer l88按“2.2.1”方法制备固体分散体，药物与载体的比例为1∶1、1∶3、1∶5、1∶7、1∶9，测定样品溶出度，溶出曲线见图4，由图可知，药载比1∶3时溶出效果最好，1∶1时溶出效果最差。

2.3.3 正交筛选

2.3.3.1正交试验设计 通过单因素试验，对替米考星固体分散体的载体及药-载比进行了研究，结果表明替米考星：Poloxamer l88以1∶3为最佳。在此基础上采用正交试验以累积溶出率为指标进一步筛选，以搅拌速度、搅拌时间和固化时间三个因素按正交设计L9（34）作三因素三水平的试验筛选。L9（34）正交实验设计因素水平见表1，对各因素分配正交表，得出9个实验处方，具体处方安排见表2：

2.3.3.2正交试验结果分析 正交试验分析结果如表2所示，可知：IIA>IIIA>IA，IB>IIIB>IIB，IC>IIC>IIIC，因此各因素最优水平组合为A2B1C1，即搅拌转速为中速，搅拌时间为 45 min，固化时间为12 h。方差分析结果见表3和表4，由表可知搅拌时间对指标累积溶出率的影响显著（P<0.01），而搅拌速度和固化时间对指标累积溶出率具有一定影响（0.01

综合正交试验筛选，得到替米考星固体分散体的优化处方和工艺。

处方：替米考星 1 g，Poloxamer l88 3 g。

工艺：取3 g Poloxamer l88置于烧杯中，60℃左右水浴加热使其熔融，加入1 g 替米考星，边加边搅拌，使替米考星完全融于介质中，保持中速继续搅拌45 min。然后从水浴中取出烧杯，迅速倒入预冷的金属托盘中，转移至-20℃的冰箱，固化12 h，取出置37℃鼓风干燥箱干燥24 h，从托盘中取出，研碎，过80目筛，置干燥器避光保存。

3 分析与讨论

固体分散体常用制备方法有熔融法、溶剂法、溶剂-熔融法等。其它有利用共熔原理，用研磨法形成低共熔混合物，以及药物溶于有机溶剂并分散吸附于惰性材料形成粉状溶液等。在固体分散体中，药物溶出速率很大程度上取决于载体的性质与制备工艺。对载体的要求是生理惰性、无毒；不与主药发生化学反应，不影响主药的化学稳定性，不影响药物的药效与含量测定；能使药物呈最佳分散状态；来源容易、成本低廉。目前，固体分散体常用的载体主要分为水溶性、难溶性、肠溶性载体。其中水溶性的载体有：高分子类如PEG4000、PEG6000、PVP K30；表面活性剂类如Poloxamer188等；非表面活性剂类如尿素、枸橼酸、琥珀酸、半乳糖、蔗糖和右旋糖酐等。对于难溶性药物而言，利用水溶性载体制备的固体分散体，对提高药物溶解度，加快药物溶出速率，提高药物的生物利用度方面具有重要的意义。

泊洛沙姆（Poloxamer）为聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，此类聚合物随着聚合度的增大，形态从液体、半固体至蜡状固体，性质从难溶于水的液体到易溶于水的固体。Poloxamer188是一种优良的水溶性非离子型表面活性剂。以Poloxamer188为载体，用熔融法或溶剂法制备固体分散体，载药量大，能抑制产品结晶，可大大提高药物的溶出速率和生物利用度[5]。泊洛沙姆性能优良、毒性小、对黏膜几乎无刺激性、过敏性，可用于静脉注射，增加药物溶出的效果明显优于PEG载体，是一种较理想的速效固体分散体载体。■（编辑：狄慧）

参考文献：

[1] 张宏哲，吴春丽，彭宗强，等.替米考星的合成[J].河南化工，2005（22）：21-22.

[2] 刘晓萍，赵恒寿.替米考星的研究新进展及其应用[J].四川畜牧兽医，2008，（4）：33-37.

[3] 刘德金，刘爱玲，刘桂兰，等.检测替米考星含量的高效液相色谱法改良[J].南京农业大学学报，2011，34（3）：135-139.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]. 2010年版（二部）.北京：中国医药科技出版社，2010： 1031-1032.

[5] 郑俊民.药用高分子材料学[M].北京：中国医药科技出版社，2004，166-169.