不同外植体及冷藏处理对华中枸骨组织培养的影响

范淑芳

摘要[目的]研究不同外植体及冷藏处理对华中枸骨组织培养的影响。[方法]以华中枸骨带芽新梢茎段为外植体，考察外植体的取材时间、部位以及4 ℃冷藏处理对其初代培养的影响。[结果]华中枸骨以带芽的新梢茎段作为外植体进行组织培养时，以春季采取植株中上部枝条为宜，其中春季萌条的芽增殖倍数可达到4，中上部萌条的芽萌动率可达到45%。适当的冷藏处理对外植体的消毒以及芽的萌动有利，4 ℃冷藏处理14 h后的消毒成功率最高，可达到92%；冷藏处理22 h的芽萌动率最高，可达到18%。[结论]华中枸骨组织培养中外植体最好于春季选取植株中上部萌发的新梢顶芽；华中枸骨芽的萌动率随冷藏时间的增加呈线性增长，可能与低温打破休眠有关。

关键词华中枸骨（Ilex centrochinensis）；组织培养；外植体；冷藏处理

中图分类号S188文献标识码A文章编号0517-6611（2014）07-02000-02

（Ilex）植物，又称针齿冬青、小果冬青，因其形态特征及其功用又被形象地称为苦荆茶[1]。该植物枝叶繁茂，碧绿常青，黄花红果，是一种优良的园林绿化植物；同时，该植物富含多种营养元素，可以药茶两用，具有较高的保健功能。该植物资源稀少，种子繁殖困难，扦插繁殖也难生根，关于其组培快繁的研究鲜有报道。笔者主要针对带芽新梢茎段的取材季节、部位以及外植体冷藏处理展开系统地试验，以期找到最佳的取材方法和处理技术，提高初代培养的成功率，为其组培快繁服务。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1 研究对象。华中枸骨，经鉴定为为冬青科（Aquifoliaceae）冬青属（Ilex）植物华中枸骨（Ilex centrochinensis）。

1.1.2 主要试剂。所用试剂均为国产分析纯，市售。

1.2方法

1.2.1 不同时间外植体的采集[2]。华中枸骨每年春季和秋季均会萌发新梢，分别于4月初和9月末采取植株中上部长约5～10 cm、未木质化的新梢作为外植体，采取相同的消毒方法和培养方法，在继代培养中分春季萌条和秋季萌条进行后期生长对比，每处理10瓶，每瓶3芽，重复3次。

1.2.2 不同部位外植体的采集[2]。于4月初采取外植体时分别从植株基部和中上部获得，进行相同的处理后接种培养。基部茎段每处理约20瓶，每瓶1芽，重复3次。中上部茎段每处理约30瓶，每瓶1芽，重复3次。

1.2.3 外植体的冷藏[3-4]。于4月初采取外植体时，将所采取的新梢培养于蒸馏水中，置于4 ℃冰箱中冷藏处理，根据试验进程分别冷藏处理0、5、7、14、20、22和25 h，每处理约接种30瓶，每瓶1芽，重复3次。

2结果与分析

2.1采集时间对外植体后期生长的影响 春季萌条与秋季萌条分别继代培养若干代后对其进行培养对比，周期为30 d。由表1可知，在春季萌条的继代培养过程中，芽高、直径、叶数以及芽的增殖倍数均较秋季萌条高。图1表明，同样的处理在初培中春季萌条较秋季萌条芽的诱导较为容易，生长也较好，且春季萌条诱导的芽、叶多呈红色，生长幼嫩；在继代中较多的春季萌条与秋季萌条芽的生长差异较显著（P<0.05），多数老化被淘汰。综合考虑其生长状况，确定春季为华中枸骨较好的外植体取材时间。