猪肉中地西泮残留的高效液相色谱法测定

柳春晖　宋德华

摘要：本文采用高效液相色谱法（HPLC-DAD）对猪肉中痕量地西泮残留进行测定，方法检出限为0.01 mg/kg，平均回收率为89.1%-92.3%。该方法灵敏度高，选择性和特异性好，能够对低浓度的样品进行很好的确认，适合在具有一般检测条件的实验室进行推广。

关键词：地西泮 液相色谱 猪肉

中图分类号：S816 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）06-0041-02

地西泮又名安定，是一种具有镇静、抗惊厥作用的药物，常用于治疗成人焦虑、失眠等症状。但据了解，目前有些养猪场在育肥阶段，在饲料中添加地西泮，以达到减少动物运动，促进睡眠，提高长成效率的目的。由于地西泮具有成瘾性，如长期摄入可致耐受与依赖性，且对新生儿、哺乳期妇女、孕妇影响显著，农业部公告235号规定，地西泮只能用作动物疾病治疗应用，不得用作饲料添加剂，在动物性产品中不得检出地西泮药物残留。

2014年1月1日实施的GB 29697-2013标准中，规定了动物性食品中地西泮的国标测定方法为气相色谱-质谱法，该方法对实验室仪器条件要求较高，本文探索一种使用液相色谱对猪肉中地西泮残留检测的方法，该方法适合在具有一般检测条件的实验室进行推广。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与装置

Agilent1100高效液相色谱仪；Grace Smart RP18 （250×4.6mm，5μm）色谱住；分析天平；冷冻离心机；高速匀浆机；旋转蒸发仪；氮气吹干仪；固相萃取装置。

1.2 主要材料与试剂

乙腈、甲醇：色谱纯；无水硫酸钠、乙酸铵、异丙醇、冰醋酸、高氯酸、三乙胺：分析纯；地西泮：标准品；1%高氯酸溶液；C18固相萃取小柱（500mg，3ml），含碳量为17%；微孔针筒式滤膜：0.2μm。

标准溶液的制备：称取50.0mg地西泮，用乙腈溶解并于50ml容量瓶定容，取此标准贮备液，用1%高氯酸水溶液稀释成浓度为0.05，0.10，0.20，0.50和1.00μg/ml的标准工作液，进样测定。

1.3 试验条件

色谱柱：Grace Smart RPC18 （250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.02M乙酸铵水溶液（60：40，v/v）；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；进样量：50μl。

1.4 样品的提取与净化

称取5g（准确至0.01g）匀浆试样，加无水硫酸钠5g，用20ml乙腈提取，经超声、离心后，取上清液，重复一次，收集两次提取液于鸡心瓶中，加5-10ml异丙醇，旋蒸至近干，用5ml甲醇-水（2：8，v/v）溶解。C18固相萃取柱平衡后，将上述复溶液上样；再用5ml甲醇-水-三乙胺（35：65：0.1，v/v）洗滌小柱；最后用5ml甲醇-乙酸（95：5，v/v）洗脱样品残留，收集洗脱液。洗脱液经氮气吹干，用1%高氯酸水溶液1ml，正己烷2ml复溶，取下层水相过0.2μm滤膜，供HPLC分析。

2 结果与讨论

2.1 方法的线性

本方法采用浓度为0.05，0.10，0.25，0.5，1.0ug/ml的标准样品，作标准曲线，地西泮的线性相关系数分别为0.9997，标准曲线见图1。

2.2 方法最低检出限的确定

检出限由添加的最低浓度得出，按照3倍信噪比设定地西泮检出限，本方法的最低检测限为0.01mg/kg。

2.3 准确度与精密度实验

以空白猪肌肉样品做3个浓度的加标回收实验，每个浓度做6个平行样，具体实验结果如下：

（A）空白猪肉样品（B）添加浓度为0.01mg/kg猪肉（C）0.05ug/ml标准溶液。

经测定，猪肉的平均回收率分别为89.1-92.3%，本方法的精密度好，准确度高，操作简便，适合推广应用。

3 结语

本研究提供了一种液相色谱法检测猪肉中地西泮含量的方法，是对气质联用的国标测定方法的有效补充，本方法回收率、精密度均理想，采用实验室常规的仪器设备和试剂，适合在具有一般检测条件的实验室进行推广。

参考文献

[1]中国农业部公告235号 （2003）.

[2]中华人民共和国药典，国家药典委员会编.化学工业出版社，2005年版，二部.

[3]M.L. Olmos-Carmona， M. Hernandez-Carrasquilla， J. Chromatogr. B. 734 （1999） 113.

[4]T. Edeki， D.W. Robin， C. Prakash， I.A. Blair， A.J.J. Wood， J. Chromatogr. 577 （1992） 190.