RP-H PLC测定盐酸二甲双胍肠溶片的含量

周平 童卉琦 白金 赵明明 金向群

（吉林大学药学院，吉林 长春 130012）

RP-H PLC测定盐酸二甲双胍肠溶片的含量

周平 童卉琦 白金 赵明明 金向群

（吉林大学药学院，吉林 长春 130012）

目的：依《中国药典》所述盐酸二甲双胍肠溶胶囊含量测定的方法，对盐酸二甲双胍肠溶片含量测定方法进行研究。方法：采用 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相为0.05%庚烷磺酸钠溶液（用10%的磷酸溶液调节pH值至4.0）-乙腈（84∶16），柱温：30℃，检测波长232 nm。结果：盐酸二甲双胍在2.335～37.36 μg/mL范围内线性关系良好，r=0.999 9，平均回收率为100.34%（n=9）。结论：药典所述肠溶胶囊的含量测定方法简便准确，灵敏度高，专属性好，不仅能够用于肠溶胶囊的测定，同时也能够用于盐酸二甲双胍肠溶片的质量控制。

盐酸二甲双胍；反向高效液相色谱法；含量测定

双胍类降糖药物被广泛用于治疗2型糖尿病患者，其疗效确切，为 2型糖尿病患者的首选药物，盐酸二甲双胍肠溶片为双胍类肠溶制剂，不但有降血糖的作用，还有减轻体质量和高胰岛素血症的效果。《中国药典》（2010年版）中虽未收载盐酸二甲双胍肠溶片及其含量的测定方法[1]，但已收载盐酸二甲双胍肠溶胶囊的测定方法，本文拟依据《中国药典》（2010年版）对盐酸二甲双胍肠溶胶囊的含量测定方法，对肠溶片剂进行测定，以确定其适应性。

1 仪器与试药

岛津LC-10AT型高效液相色谱仪，SPD-10A型紫外检测器，AT-330柱温控制仪，浙江大学2010色谱工作站，JA1003型电子天平；所用甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯；盐酸二甲双胍标准品（批号：100664-200602，原中国药品生物制品检定所提供）；盐酸二甲双胍肠溶片（批号：20130121，20120205，20130612，实验室自制）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.05%庚烷磺酸钠溶液（用10%的磷酸溶液调节pH值至4.0）-乙腈（84∶16）；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱温：30℃；检测波长：233 nm。

2.2 系统适应性试验

精密称取盐酸二甲双胍对照品适量，用流动相稀释成每1 mL约含20 μg的溶液作为对照品溶液。进样测定，盐酸二甲双胍峰的保留时间约为6.2 min，理论板数为2 000以上。称取处方比例混合辅料约25 mg，置于100 mL容量瓶中，加流动相适量，溶解后定容，依法测定，结果表明，空白辅料色谱图无明显杂质峰，辅料和外加试剂不干扰盐酸二甲双胍的测定。色谱图见图1～ 3。

2.3 溶液的制备

图1 空白辅料RP-HPLC图

图2 盐酸二甲双胍对照品RP-HPLC图

图3 盐酸二甲双胍肠溶片RP-HPLC图

2.3.1 对照品溶液的配置精密称取盐酸二甲双胍对照品，加流动相溶解并定量稀释制成每1 mL约含40 μg的溶液，作为对照品储备液；精密量取上述储备液适量，加流动相制成每 1 mL含盐酸二甲双胍20 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的配置精密称取供试品适量（约相当于盐酸二甲双胍50 mg），置于200 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密取续滤液8 mL，置于100 mL的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

分别精密量取对照品储备液用流动相稀释制成不同浓度的系列溶液。分别精密吸取上述溶液20 μL，注入高效液相色谱仪，照含量测定方法测定。记录峰面积，以峰面积对浓度回归得标准曲线，盐酸二甲双胍的回归方程为：

r=0.999 9。结果表明盐酸二甲双胍2.335～37.36 μg/mL浓度范围内，浓度与峰面积线性关系良好。

2.5 检测限

配制不同浓度的盐酸二甲双胍对照品溶液照含量测定项下的色谱条件测定，以信噪比大于3为判断标准，根据试验结果，确定盐酸二甲双胍的检测限约为50 ng/mL。

2.6 定量限

配制不同浓度的盐酸二甲双胍对照品溶液，照含量测定项下的色谱条件测定，以信噪比大于10为判断标准，根据试验结果，确定盐酸二甲双胍的定量限约为0.5 μg/mL。

2.7 重复性试验

取“2.3.1”项下对照品溶液，精密吸取20 μL，进样，连续测定6次，记录色谱图，计算得峰面积的RSD值为0.76%，表明该方法重复性较好。

2.8 重现性试验

照含量测定方法，配制含量测定样品溶液（批号：20130322），共6份，依次测定，记录峰面积，结果盐酸二甲双胍含量的RSD值为0.61%，表明该方法重现性较好。

2.9 稳定性试验

取“2.3.2”项下供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8小时精密吸取 20 μL，进样，记录峰面积，并经计算得RSD值为0.42%。结果表明，样品溶液在8小时内稳定。

2.10 回收率试验

精密称定约40，50，60 mg的盐酸二甲双胍原料药各3份，分别加入相应量的空白辅料，照含量测定项下方法制备供试品溶液并测定。由测得量和加入量计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸二甲双胍回收率试验结果

表1结果表明该方法高、中、低三个浓度的回收率均合格。平均回收率为100.34%，总RSD为0.68%。

2.11 含量测定

取实验室自制盐酸二甲双胍肠溶片共 3批，按拟定的方法和条件制备对照品溶液与供试品溶处液，取上述两种溶液各20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，结果3个批号20130129，20130322，20140425的盐酸二甲双胍含量分别为99.8%，99.4%和98.9%，RSD分别为0.23%，0.23%和0.24%。

3 讨论

3.1检测波长的确定：用配置好的供试品溶液和空白辅料溶液在200～ 800 nm范围内扫描，供试品溶液在233 nm处有最大吸收，而辅料和溶剂无干扰，故将检测波长定在233 nm。

3.2流动相的选择：盐酸二甲双胍在水和甲醇溶液中保留时间较短，容易与溶剂峰混淆，通过对多重试剂的比较和选择，最终确定用 0.05%庚烷磺酸钠溶液（用10%的磷酸溶液调节pH值至4.0）-乙腈（84∶16）作为本研究的流动相[2-3]。

3.3本实验依《中国药典》所述盐酸二甲双胍肠溶胶囊的方法对盐酸二甲双胍肠溶片剂进行了含量测定，并对该测定法进行了方法学考察，考察结果表明该方法准确灵敏，重复性好，不仅能够用于肠溶胶囊的测定，同时也能够用于盐酸二甲双胍肠溶片的质量控制。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2010：625-626.

[2] 杨青.高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片的含量[J].中国药业，2008，17（19）：35.

[3] 戚燕，尤聪超，吴松.离子对-HPLC法测定盐酸二甲双胍含量及有关物质[J].药物分析杂志，2002，22（4）：285-287.

Determination of Metformin Hydrochloride Enteric-coated Tablets by RP-HPLC

Zhou Ping，Tong Huiqi，Bai Jin，Zhao Mingming，Jin Xiangqun（School of Pharmaceutical Sciences of Jilin University，Jilin Changchun 130012，China）

Objective：To study the method of determinating the content of metformin hydrochloride enteric-coated tablets by RP-HPLC according to the method set forth in the Chinese Pharmacopoeia for metformin hydrochloride enteric-coated capsules.Methods：Chromatographic column of Hypersil ODS C18（4.6 mm× 250 mm,5 μm）was used with the mobile phase of 0.05%heptane solution of sodium （10%phosphoric acid solution adjusted to pH 4.0）-acetonitrile （84∶16）.The detection wavelength was at 232 nm and the column temperature was at 30℃.Results：There was a good linear relationship when the sample size was within the range of 2.335～37.36 μg/mL（r=0.999 9）. The average recovery was 100.34% （n=9）.Conclusion：The content determination method for the capsules is convenient,fast and reproducible,it can also be used for the content determination of metformin hydrochloride enteric-coated tablets.

Metformin Hydrochloride；RP-HPLC；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.12.008

2014-09-08）

周平，女，硕士。研究方向：药物新剂型及新型药物。E-mail：june0z@163.com

金向群，男，博士生导师。研究方向：药物新剂型及新型药物。通讯作者E-mail：jinxq@jlu.edu.cn