HPLC同时测定天麻片中羌活醇和异欧前胡素的含量

杨跃龙

（怀化市食品药品检验所，湖南怀化 418000）

HPLC同时测定天麻片中羌活醇和异欧前胡素的含量

杨跃龙

（怀化市食品药品检验所，湖南怀化 418000）

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定天麻片中羌活醇和异欧前胡素的含量。方法：色谱柱：Shimadzu C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈-水（44∶56），流速为1.0 mL/min，柱温：30℃，检测波长：310 nm。结果：羌活醇和异欧前胡素进样浓度分别在2.4～120 μg/mL（r=0.999 9），1.21～60.5 μg/mL（r=0.999 9）范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为98.22%、97.82%（n=9）。结论：本法简便，准确，重现性好，能排除其他成分的干扰，提供了更好的控制该药质量的方法。

高效液相色谱法；天麻片；羌活醇；异欧前胡素

WORDSHPLC；Rhizoma Gastrodiae Tablets；Notopterol；Isoimperatorin

天麻片是由羌活、天麻、独活、杜仲等10味药材提取制成的中药制剂，具有祛风除湿、舒筋通络、活血止痛的功效，用于肢体拘挛、手足麻木、腰腿酸痛等症[1-2]。羌活与天麻同为方中主药，现行标准（部颁标准中药成方制剂第四册：WS3-B-0694-92）中已有关于天麻素含量测定的规定，但未规定对羌活的有效成分进行测定。为有效控制本品的质量，参照相关文献[3-12]对方中羌活中的羌活醇和异欧前胡素同时进行含量测定。

1 仪器与试药

日本岛津LC-20ATVP高效液相色谱仪（LC-20AT四元泵；SPD-M20A型二极管阵列检测器；SIL-20A自动进样器，LCsolution色谱工作站）；CBL9960A超声波清洗器（上海科导超声仪有限公司）；METTLER TOLEDO十万分之一电子分析天平（瑞士）。

羌活醇对照品（批号：110826-200818）、异欧前胡素对照品（批号：110827-200407），均购自中国食品药品检定研究院；天麻片（怀化正好制药有限公司，批号：140101，140102，140103；0.26 g/片）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Shimadzu C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（44∶56），流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：310 nm；进样量：20 μL。按羌活醇计算，理论板数均不低于5 000。

2.2 对照品溶液制备

精密称取羌活醇对照品12.00 mg，异欧前胡素6.05 mg置同一100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液。

2.3 供试品溶液制备

取本品20片，精密称定，研细，取2.6 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得。

2.4 线性关系考察

分别精密量取上述混合对照品储备液1，5，10，20 mL置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取上述4种稀释后的溶液及储备液各20 μL注入液相色谱仪测定，按2.1项下色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵座标，以进样量为横座标，绘制标准曲线。结果见表1。

表1 标准曲线

2.5 阴性对照试验

取缺羌活的阴性制剂适量（约相当于供试品的量），按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL，按2.1项下的色谱条件分别进样测定，记录色谱图。结果显示，阴性对照溶液对测定结果无干扰，见图1。

图1 天麻片HPLC图

2.6 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液20 μL，按2.1项下的色谱条件连续进样6次，结果羌活醇、异欧前胡素RSD分别为0.95%，0.86%，表明精密度良好。

2.7 稳定性试验

精密吸取供试品溶液20 μL，按2.1项下的色谱条件，于0，5，10，15，20，24 h进样，测定其峰面积积分值，羌活醇峰面积的RSD为0.71%；异欧前胡素峰面积的RSD为0.77%，结果表明供试品溶液在24 h内是稳定的。

2.8 重复性试验

取同一批样品（批号：140101），按2.3项下的供试品溶液制备方法，平行制备6份，依法测定，羌活醇和异欧前胡素的总量为0.22 mg/片，RSD为0.92%，结果表明该方法重复性好。

2.9 加标回收试验

精密称取本品1.3 g（批号：140101，含量：羌活醇0.15 mg/片；异欧前胡素0.07mg/片；平均片重：0.2610 g），共9份，置锥形瓶中，分别精密加入羌活醇与异欧前胡素混合对照品溶液（羌活醇0.15 mg/mL；异欧前胡素0.07mg/mL）4.0，4.0，4.0，5.0，5.0，5.0，6.0，6.0，6.0 mL，按供试品溶液制备方法制成加标回收溶液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液按2.1项下的色谱条件进行含量测定并计算回收率。结果见表2。

2.10 样品的测定

取3批样品，按2.3项下的供试品溶液制备方法制备，精密吸取20 μL，注入液相色谱仪测定，以外标法计算样品中羌活醇、异欧前胡素的含量。测定结果见表3。

表2 回收试验结果（n＝9）

表3 样品含量测定结果表（n＝3）

3 讨论

3.1 指标性成分选择

中成药的化学成分极其复杂，而且在治疗疾病中是靠多个活性成分相互作用才能起效，一个成分很难代表一味药的效果。因此选择尽可能多的成分来评价药材质量。这两个成分是天麻片中羌活的主要有效成分[13]，测定其含量十分必要。

3.2 流动相及检测波长相选择

为尽可能在短时间内获得好的分离效果，使用了不同组成的流动相（甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.05%冰醋酸），通过以上三种流动相系统比较综合考虑，最终确定水-乙腈为流动相。经紫外-可见光分光光度计扫描，羌活醇与异欧前胡素在310 nm都有较大的吸收。采用HPLC时，310 nm作为其检测波长，羌活醇与异欧前胡素在图谱中能同时成为主要吸收峰，且其他物质对羌活醇与异欧前胡素的测定没有干扰。故选择310 nm作为检测波长。

3.3 提取方法选择

为能使被测化合物提取效果最佳，考察了提取溶剂（甲醇、乙醇、70%甲醇）、提取方法（超声、回流）等影响因素，最后选择甲醇超声30 min。

3.4 含量测定方法选择

考虑到羌活醇与异欧前胡素极性相差不大，可以采用恒定流动相同时对羌活醇与异欧前胡素进行分析。

[1]国家食品药品监督管理局.国家食品药品监督管理局标准（试行）YBZ10382006[S].2006-07-11.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：170.

[3]朱磊，赵瑞.高效液相色谱法测定羌活中羌活醇和异欧前胡素的含量[J].科技创新与应用，2012，24（3）：103.

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[5]张娜，李云霞，孟宪生，等.高效液相色谱法测定羌活药材中异欧胡前胡素含量[J].辽宁中医杂志，2006，7（33）：870-871.

[6]张芳，黎定标.HPLC测定羌活提取物中异欧胡前胡素的含量[J].南昌高专学报，2007，3（70）：107-108.

[7]赵湍凌，杨月妍，闻亮.HPLC法同时测定撤热柴胡饮中连翘苷和黄芩苷的含量[J].中药新药与临床药理，2011，22（1）：111-113.

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[9]李智勇，张兴水，王军练，等.羌活的研究进展[J].陕西中医学院学报，2003，6（26）：57-60.

[10]赵渤年，刘青，寇桂风，等.HPLC法测定九味羌活颗粒中欧前胡素、异欧前胡素的含量[C].济南：山东省药学会第一届学术年会论文集（下），2005：233-241.

[11]陈燕，易进海，刘云华，等.中药羌活质量标准研究[J].药物分析杂志，2010，5（30）：945-949.

[12]马永贵，王婷，贺玉姣，等.HPLC测定青海不同海拔野生与栽培羌活中异欧前胡素的含量[J].青海师范大学学报，2012，1（24）：21-23.

[13]古力娜·沙尔比，郭洪祝，郭慧，等.HPLC测定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯、和异欧前胡素[J].中草药，2006，6（37）：937-938.

Simultaneous Determination of Contents of Notopterol and Isoimperatorin in Rhizoma Gastrodiae Tablets by HPLC

Yang Yuelong（Institute for Food and Drug Control of Huaihua City,Hunan Huaihua 418000，China）

Objective：To establish a HPLC method for the content determination of notopterol and isoimperatorin in rhizoma gastrodiae tablets.Methods：The column of Shimadzu C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used with acetonitrile-water（44∶56）as mobile phase,the flow rate was 1.0 mL/min,the column temperature was at 30℃and the detection wavelength was at 310 nm.Results：The calibration curves were linear within the range of 2.4～120 μg/mL（r=0.999 9）for notopterol and 1.21～60.5 μg/mL（r=0.999 9）for isoimperatorin.The average recovery was 98.22%and 97.82%（n=9）for notopterol and isoimperatorin respectively.Conclusion：The method is specific,accurate and reproducible,and can exclude the interference of other components.It can be used for the quality control of the product.

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.07.006

2014-05-05）

杨跃龙，男，主管药师。研究方向：药品检验及药品质量标准。E-mail：307623361@qq.com