H PLC同时测定复方鸡骨草胶囊中绿原酸、芍药苷和栀子苷的含量

罗国琼

（广西金嗓子有限责任公司，广西柳州 545001）

H PLC同时测定复方鸡骨草胶囊中绿原酸、芍药苷和栀子苷的含量

罗国琼

（广西金嗓子有限责任公司，广西柳州 545001）

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定复方鸡骨草胶囊中绿原酸、芍药苷、栀子苷的含量。方法：采用Agilent TC-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱；检测波长为0～21 min：327 nm，21～27 min：238 nm，27～40 min：230 nm。结果：绿原酸线性范围为0.036 1～0.902 5 μg，平均加样回收率为97.74%，RSD为1.40%（n=6），栀子苷线性范围为0.148 2～5.929 6 μg，平均加样回收率为97.68%，RSD为1.14%（n=6），芍药苷线性范围为0.098 9～3.954 8 μg，平均加样回收率为97.70%，RSD为0.99%（n=6）。结论：该方法简便可行，结果可靠，可有效控制复方鸡骨草胶囊的质量。

复方鸡骨草胶囊；绿原酸；芍药苷；栀子苷；HPLC

WORDSCompound Jigucao Capsule；Chlorogenic Acid；Paeoniflorin；Geniposide；HPLC

复方鸡骨草胶囊由茵陈、栀子、白芍、毛鸡骨草、人工牛黄、珍珠层粉等中药制成，具有清利肝胆湿热的功效。临床主要用于肝胆湿热所致的胁肋不舒，脘腹胀满，疲倦乏力，口苦尿黄等症。为提高其质量可控性，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定了制剂中君臣药茵陈、栀子及白芍的有效成分绿原酸、芍药苷、栀子苷的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200系列液相色谱仪，Waters e2695型液相色谱仪，Shimadzu UV-2405紫外-可见分光光度计，必能信BUG-40超声仪，AND GR-202电子分析天平。

1.2 试药

复方鸡骨草胶囊及分别不含茵陈、栀子、白芍的阴性样品由广西玉林制药集团有限责任公司提供；对照品绿原酸（110753-200413）、芍药苷（110736-201136）、栀子苷（110749-200714）购自中国药品生物制品检定研究院；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

Agilent TC-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈A-0.1%磷酸溶液B按表1梯度洗脱；柱温：35℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：0～21 min：327 nm，21～27 min：238 nm，27～40 min：230 nm；进样量10 μL。色谱图见图1。

表1 流动相变化梯度

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备分别精密称取绿原酸、栀子苷、芍药苷对照品适量，加70%甲醇制成浓度分别为18.05，148.24，98.87 μg/mL的混合溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液制备取复方鸡骨草胶囊内容物1.0 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，称定重量，超声处理（250 W，50 kHz）30 min，取出放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液同供试品溶液方法制备。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察取绿原酸对照品，用70%甲醇制成浓度分别为3.61，7.22，18.05，36.1，72.2，90.25 μg/mL的系列溶液，分别进样10 μL，在拟定的色谱条件下测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程

表明绿原酸进样量在0.036 1～0.902 5 μg范围内呈良好的线性关系。

另取栀子苷对照品系列溶液（浓度为14.824，29.648，59.296，148.24，296.48，592.96 μg/mL），芍药苷对照品系列溶液（浓度为9.887，19.774，39.548，98.87，197.74，395.48 μg/mL），同绿原酸法绘制标准曲线，分别得回归方程

图1 复方鸡骨草胶囊HPLC图

表明栀子苷进样量在0.148 2～5.929 6 μg范围内、芍药苷进样量在0.098 9～3.954 8 μg范围内均有较好的线性关系。

2.3.2 精密度试验精密吸取混合对照品溶液（绿原酸：18.05 μg/mL、栀子苷：148.24 μg/mL、芍药苷：98.87 μg/mL）10 μL，分别连续进样6次，测定峰面积，结果绿原酸峰面积的平均值为252.8，RSD为0.51%，栀子苷峰面积平均值为1 444.1，RSD为0.38%，峰面积平均值为560.4，RSD为0.62%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验取同一批号（批号：360041）的供试品溶液，分别在0，2，4，8，10，16，24 h进样1次，测定峰面积。结果绿原酸峰面积平均值为256.1，RSD＝1.37%（n=7）；栀子苷峰面积的平均值为1666.5，RSD＝0.86%（n=7）；芍药苷峰面积的平均值为527.8，RSD＝1.31%（n=7）。表明供试品溶液在24 h内相对稳定。

2.3.4 重现性试验取同一批样品内容物（批号为360041），平行制备6份供试品溶液，按拟定色谱条件在Waters e2695型液相色谱仪上测定其含量。结果绿原酸含量平均值为0.235 5 mg/粒，RSD为1.19%；栀子苷含量平均值为2.132 0 mg/粒，RSD为0.88%；芍药苷含量平均值为1.132 3 mg/粒，RSD为0.96%，由此可见本法重现性较好。

2.3.5 加样回收率试验取已知含量的本品内容物1.0 g（批号：360041），精密称定，共18份，每6份分别精密加入绿原酸、栀子苷、芍药苷对照品适量，按供试品溶液制备方法制成供试液，依照所拟色谱条件测定。结果见表2，3，4。

2.3.6 专属性实验分别取缺茵陈、栀子、白芍的阴样对照溶液，照2.1项下色谱条件进样测定，结果分别在绿原酸、栀子苷、芍药苷峰的相应位置上未检出相应的色谱峰，表明本法专属性较好。见图1。

表2 绿原酸加样回收率测定结果

表3 栀子苷加样回收率测定结果

表4 芍药苷加样回收率测定结果

2.4 样品含量测定

取复方鸡骨草胶囊内容物1.0 g，精密称定，照2.2项下制备方法制成供试液，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算含量，结果批号为360041，360044，360045，360047，360049的样品中绿原酸的含量分别为0.235 5，0.240 8，0.246 7，0.227 0，0.231 7 mg/粒；栀子苷的含量分别为2.1320，2.113 6，2.146 0，2.526 8，2.430 9 mg/粒；芍药苷的含量分别为1.132 3，1.216 6，1.210 7，1.156 4，1.035 5 mg/粒。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

根据绿原酸、栀子苷、芍药苷的各自紫外扫描图谱，同时参照相关文献[1-5]所用波长，分别选用其最大吸收波长327，238，230 nm作为其检测波长，在各自的洗脱时间内利用可变紫外检测器自由变换成各自的最大吸收波长，从而得到最理想的色谱峰。

3.2 流动相的选择

采用HPLC分别测定绿原酸、栀子苷、芍药苷含量的流动相很多，有甲醇-水，甲醇-磷酸溶液，乙腈-水，乙腈-磷酸溶液等[1-15]。经过实验考察比较，要使三种成分在复方制剂中同时分离，需采用梯度洗脱才能取得较满意的结果，本法最终选定的流动相系统可使绿原酸、栀子苷、芍药苷均能达到基线分离，与其他峰分离度大于1.5，理论板数均大于6 000。

3.3 供试品溶液的制备方法考察

参考相关文献[7-15]，采用了甲醇、乙醇、70%甲醇、70%乙醇、50%甲醇、50%乙醇等不同的溶剂提取，同时比较了加热回流、浸泡与超声处理等不同的提取方法，结果表明选用70%甲醇与50%甲醇回流与超声提取均可以使3种有效成分完全提取出，但50%甲醇溶液过滤较为困难，文中所用方法最为方便、快捷，因此选用。

本研究采用HPLC同时测定复方鸡骨草胶囊中绿原酸、栀子苷和芍药苷的含量，结果表明该方法重现性、稳定性好，专属性强，精密度、回收率均较好，可作为该制剂的质量控制方法。

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Simultaneous Determination of Contents of Chlorogenic Acid,Paeoniflorin and Geniposidein Compound Jigucao Capsules by HPLC

Luo Guoqiong（Guangxi Golden Throat Co.LTD.，Guangxi Liuzhou 545001，China）

Objective:To establish a method for the content determination of chlorogenic acid，paeoniflorin and geniposide in compound jigucao capsules.Methods:Agilent TC-C18column（4.6mm×150mm，5 μm）was adopted with acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution as mobile phase，gradient elution，a detection wavelength of 0～21 min at 327nm，21～27 min at 238 nm，27～40 min at 230 nm.Results:There was a good linear relationship within the range of 0.036 1～0.902 5 μg for chlorogenic acid，0.148 2～5.929 6 μg for geniposide，and 0.098 9～3.954 8 μg for paeoniflorin.The average recoveries were 97.74%with RSD of 1.40%（n=6），97.68%with RSD of 1.14%（n=6）and 97.70%with RSD of 0.99%（n=6）for chlorogenic acid，geniposide and paeoniflorin respectively.Conclusion: The method was simple and reliable，it can be applied to the quality control of compound jigucao capsules.

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.07.007

2014-04-17）

罗国琼，女，助理工程师。研究方向：中药质量标准分析与研究。E-mail：ler630@126.com