口炎清胶囊的质量控制和稳定性试验

江 涛，雷 健，邢 茂，杨秋凤，葛 勤

（中国人民解放军第三军医大学新桥医院药剂科，重庆 400037）

扁平苔藓是发生于口腔黏膜的一种非感染慢性炎症，病损难愈，给患者造成严重的心理压力［1－2］。我院研制的由赤芍、黄连、麦冬等药材制成的中药汤剂，具有解毒消肿、滋阴清热等作用，临床用于扁平苔藓等口腔炎症，疗效较好；但汤剂口感不好，患者服药依从性差，且水溶液久贮易酸败，不易携带，应用受到一定限制。为解决上述问题，笔者将中药汤剂制成胶囊。胶囊剂为固体制剂，有效期相对较长，易携带，患者依从性较好。为保证制剂质量，本试验中对口炎清胶囊的制备工艺、质量控制和稳定性进行了研究。

1 仪器与试药

1200型高效液相色谱仪仪系统（美国Agilent公司）；HWS24型电热恒温水浴锅（上海科技一恒有限公司）；KQ5200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热鼓风干燥箱（重庆市永生实验仪器厂）；电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；SHH－SDT型综合药品稳定性试验箱（重庆市永生实验仪器厂）。盐酸小檗碱（批号为110713－200911）、黄芩苷（批号为110715－201117）、芍药苷（批号为 110736－201136）对照品，均购自中国食品药品检定研究院；黄连、黄芩、麦冬、赤芍等中药材均购自重庆桐君阁中药批发有限公司，经重庆医科大学药学院刘新教授鉴定为真品；淀粉（曲阜市药用辅料有限公司，批号为20100201）；硬脂酸镁（安徽山河药用辅料有限公司，批号为110916）；口炎清胶囊（自制，批号为 20120109，20120116，20120120）；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 制备

取处方中全部中药材，80%乙醇提取3次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，70℃烤成干浸膏。干浸膏粉碎，过80目筛，细粉加入20%淀粉，混匀，90%乙醇制成软材，制粒，湿颗粒于60℃干燥3 h，20目筛整粒，得干颗粒。干颗粒加1%硬脂酸镁，混合，0号胶囊填充，即得口炎清胶囊。

2.2 一般质量控制项目

性状：本品为胶囊剂，内容物为棕红色至棕色颗粒，气香，味微苦。

水分测定：照 2010 年版《中国药典（一部）》附录ⅨH［3］中第一法（烘干法）测定。结果3批口炎清胶囊（批号分别为20120109，20120116，20120120）的含量水分别为 4.7% ，4.2% ，5.1% ，均小于9.0%，符合药典规定。

装量差异差异测定：照 2010 年版《中国药典（一部）》附录ⅠL［3］10中胶囊剂装量差异项下方法测定。结果3批口炎清胶囊（批号分别为20120109，20120116，20120120）的装量差异分别为±6.3%，±5.5%，±5.3%，均小于10%，符合药典规定。

崩解时限测定：照 2010 年版《中国药典（一部）》附录Ⅻ A［3］71中崩解时限检查法胶囊剂项下方法测定。结果3批口炎清胶囊（批号分别为 20120109，20120116，20120120）的崩解时限分别为 20，23，21 min，均在 30 min内，符合药典规定。

2.3 薄层色谱法定性鉴别

黄连：取口炎清胶囊内容物2g，加甲醇25mL，加热回流15min，滤过，滤液补加甲醇至25mL，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.25 g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例，取缺黄连的其他各味药材，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法［3］34试验，吸取上述4种溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯－异丙醇－甲醇－水－三乙胺（3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液、对照品溶液色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，见图1 A。

麦冬：取口炎清内容物1 g，加盐酸0.5mL、水10mL，加热煮沸5min，放冷，三氯甲烷提取3次，每次7mL，分取三氯甲烷液，浓缩至1mL，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。取缺麦冬的其他各味药材，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－丙酮（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至墨绿色斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰，见图1 B。

黄芩：取本品3 g，加水40mL，超声30min，加乙醚振摇提取2次，每次50mL，弃乙醚液，剩余溶液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺黄芩的其他各味药材，按制备工艺加工制成阴性样品溶液，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯 －丙酮 －醋酸 －水（10∶4∶5∶3）为展开剂，预平衡30min，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰，见图1 C。

图1 薄层色谱图

2.4 芍药苷含量测定［4－6］

2.4.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：HypersilODS柱（150mm×4.6mm，10μm）；流动相：乙腈 －0.1%磷酸溶液（13∶87）；检测波长：229 nm；流速：1mL ／min；柱温：室温；进样量：20μL。理论板数按芍药苷峰计算应大于3000。

2.4.2 溶液制备

精密称取芍药苷对照品12.5mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取口炎清浸膏粉2 g，精密称定，置50mL容量瓶中，加40mL甲醇超声处理30min，冷却至室温，加甲醇至刻度，振摇，过滤，即得供试品溶液。取缺赤芍的其他各味药材，80%乙醇提取3次，每次2 h，合并提取液，浓缩，70℃烤成干浸膏，粉碎，按供试品溶液制备方法制备缺赤芍的阴性对照品溶液。

2.4.3 方法学考察

专属性试验：取2.4.2项下3种溶液，分别进样20μL，按拟订色谱条件依法进样测定，记录色谱图。结果阴性对照品溶液对芍药苷的测定无干扰，见图2。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取0.5 g／L芍药苷对照品溶液0.1，0.5，1.5，2.5，4.5mL，置 5mL 容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为 0.05，0.15，0.25，0.35，0.45 g／L 的溶液。分别吸取20μL，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。以质量浓度为横坐标（X）、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y＝13997X－52.45（r＝0.9999）。结果表明，芍药苷质量浓度在0.05～0.45 g／L范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：精密吸取芍药苷对照品溶液20μL，按拟订色谱条件重复进样6次，测定，结果芍药苷峰面积的RSD为0.75%（n＝6）；连续测定4 d，结果芍药苷峰面积的RSD为0.68%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取口炎清浸膏粉5份，依法制备供试品溶液，精密吸取20μL，按拟订色谱条件测定，记录峰面积。结果芍药苷峰面积的RSD为1.15%（n＝5），表明方法重复性良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液20μL，按拟订色谱条件，于 0，2，4，8，24 h 时进样，依法测定并记录峰面积。结果芍药苷峰面积的RSD为0.88%（n＝5），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：取已知芍药苷含量的口炎清浸膏粉0.1 g共9份，分别置10mL容量瓶中，分别加入0.5 g／L的对照品溶液1.0，1.2，1.5mL，制成低、中、高 3 种质量浓度，分别精密吸取 20μL，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。2.4.4 含量测定

表1 芍药苷加样回收试验结果（n＝9）

分别取3批口炎清胶囊，依法制备样品溶液，按拟订色谱条件，精密吸取样品溶液20μL，进样测定芍药苷含量。结果见表2。

2.5 稳定性考察［7］

2.5.1 影响因素试验

高温试验：取口炎清胶囊（批号为20120109），置平皿中，60℃恒温箱中放置10 d时，于第5，10天时取样，测定水分、崩解时限、芍药苷含量。高湿度试验：取口炎清胶囊（批号为20120109），置平皿中，在25℃ 、相对湿度（75±5）%的恒湿密闭容器中放置10 d，于第5，10天时取样，测定水分、崩解时限、芍药苷含量。强光照射试验：取口炎清胶囊（批号为20120109），置平皿中，放在装有日光灯的光照箱内，于照度（4500±500）lx条件下放置10 d，于第5，10天时取样，观察性状，测定水分、崩解时限、芍药苷含量。结果在上述试验条件下口炎清胶囊内容物为棕红色至棕色颗粒，气香，味微苦，其他检查项目均符合要求，见表3。2.5.2 加速试验

表2 口炎清胶囊中芍药苷含量测定结果（n＝3）

表3 口炎清胶囊的影响因素试验结果

取 3批口炎清胶囊（批号分别为 20120109，20120116，20120120），模拟临床用药包装（口服药用高密度聚乙烯瓶，铝箔封口，瓶内放干燥剂），在温度（40±2）℃ 和相对湿度（75±5）%条件下放置6个月，在试验第0，1，2，3，6个月末分别取样，测定水分、崩解时限、芍药苷含量。结果口炎清胶囊内容物为棕红色至棕色颗粒，气香，味微苦，其他检查项目均符合要求，见表4。

表4 口炎清胶囊的加速试验和长期试验结果

2.5.3 长期试验

取 3批口炎清胶囊（批号分别为 20120109，20120116，20120120），模拟临床用药包装（口服药用高密度聚乙烯瓶，铝箔封口，瓶内放干燥剂），在温度（25 ±2）℃，相对湿度（60 ±10）%条件下放置 12 个月，分别于 0，3，6，9，12 个月时取样，测定水分、崩解时限、芍药苷含量。结果口炎清胶囊内容物为棕红色至棕色颗粒，气香，味微苦，其他检查项目均符合要求，见表4。

3 讨论

药材产地影响药材的品质，药材品质直接影响制剂的质量，产地不同的药材有效成分含量均有差异［8－9］。同一产地的药材，也会因采收时间、贮藏、运输等不同，质量差异很大［9－10］。因此，在制订制剂质量标准时，首先需对药材质量进行严格控制，保证药材符合2010年版《中国药典》的有关规定，这是保证制剂质量的先决条件。

黄芩的鉴别首先参考2010年版《中国药典（一部）》黄芩项下的薄层色谱鉴别方法，但由于本方为复方制剂，成分复杂，样品点样困难，色谱斑点分离不好，背景干扰较大。因此，通过多次试验，不断摸索提取方法，调节展开条件及显色方法，结果所用方法分离良好，斑点清晰，简便易行，重复性好，可作为该制剂的定性质量控制方法。

本试验比较了多种流动相，如乙腈－0.02moL／L磷酸二氢钠、乙腈－0.1%磷酸、乙腈－水、甲醇－水、乙腈－0.5%三乙胺水、甲醇－0.4%磷酸、甲醇－0.05moL／L磷酸二氢钾的分离效果。结果，乙腈－0.1%磷酸的分离效果最为理想，芍药苷色谱峰的保留时间适当，分离度高，重现性好。

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