良性前列腺增生症患者外周血中CD8+CD28-T细胞的表达及意义

张立国 么安亮 高海洋 康绍叁 曹凤宏 高伟兴 刘 健 王 磊 李晓强

河北联合大学附属医院泌尿外科（唐山 063000）

良性前列腺增生症患者外周血中CD8+CD28-T细胞的表达及意义

张立国 么安亮 高海洋 康绍叁 曹凤宏 高伟兴 刘 健 王 磊 李晓强

河北联合大学附属医院泌尿外科（唐山 063000）

目的探索CD8+CD28-细胞群在前列腺增生症（BPH）患者外周血中的表达及意义。方法用流式细胞仪检测患者（51例）和正常男性（51例）外周血中CD8+CD28-细胞群的比例，然后进行统计分析。结果BPH患者外周血中CD8+CD28-细胞群的平均比例明显高于正常男性外周血中CD8+CD28-细胞群的平均比例（P＜0.01），BPH组CD8+CD28-细胞群在CD8+细胞群中所占平均比率也明显升高（P＜0.01）。结论 CD8+CD28-细胞群参与BPH的发生和发展，进而为其发病机制的研究奠定了基础。

前列腺增生; CD8+CD28-; T淋巴细胞,调节性

良性前列腺增生症（Benign Prostatic Hyperplasia, BPH）是老年男性常见病，发病率高，目前已确定其发病与高年龄和有功能的睾丸有密切联系。组织学上表现为间质和腺体的增生，外观上表现为前列腺体积的增大，临床上以下尿路症状为主，有尿频、尿急，夜尿增多、排尿等待、尿末滴沥等症状，严重影响患者的生活质量。至今有关BPH的发病机制尚未明确，有关其学说在不断增多，如激素内分泌学说，细胞因子学说，上皮间质相互作用学说，免疫调节紊乱学说等，随着对BPH的深入研究，许多研究都聚焦在免疫调节紊乱学说[1]。研究表明[2]，BPH组织中有大量T淋巴细胞的浸润，其中T淋巴细胞的平衡紊乱倍受关注，故本实验通过检测BPH患者外周血中CD8+CD28-细胞群表达的变化，明确其在BPH中的意义。

资料与方法

一、一般资料

从2013年2月到2013年10月在我院抽取51例临床确诊的BPH患者，平均年龄57岁；再抽取51例健康男性，平均年龄60岁。研究对象纳入标准：（1）BPH组，前列腺体积＞20cm3，经肛门用超声波测定前列腺三径的长度，运用前列腺体积计算公式进行计算：前列腺体积=0.52×前列腺前后径×前列腺左右径×前列腺上下径；最大尿流率＜15mL，排尿量150～200mL，国际前列腺症状评分（IPSS）＞7。（2）健康男性组，前列腺体积＜20cm3，方法同上；最大尿流率＞15mL，排尿量150～200mL，无下尿路症状。CD8-FITC及CD28-PE鼠抗人抗体（美国BD公司）；流式细胞仪（FACS1Calibur）；离心机（sigma3K30）。

二、检测指标及方法

对符合纳入标准的研究对象用EDTA采血管进行采血，均抽取2mL，低温储存并尽快用流式细胞仪检测实验指标。具体操作步骤：（1）在实验专用小试管内加入100μl抗凝血。（2）加入CD8+-FITC和CD28-PE双色荧光标记的抗体20μl，4℃避光孵育1h。（3）加入1mL红细胞裂解液。（4）待红细胞充分裂解后，上流式细胞仪进行检测。（5）采用Cell Quest软件进行检测分析，对淋巴细胞进行设门，检测门内淋巴细胞群中CD8+CD28-细胞群的比例。

三、统计学方法

结 果

BPH组CD8+CD28-T淋巴细胞群的平均比例（20.51±5.81）%与对照组该细胞群的平均比例（8.55±1.29）%相比较明显升高（P＜0.01）；BPH组CD8+CD28+T淋巴细胞群的平均比例（13.28±3.20）%与对照组该细胞群的平均比例（24.80±2.50）%相比较明显降低（P＜0.01）；BPH组CD8+CD28-T淋巴细胞群在CD8+T淋巴细胞群中所占的平均比值 （6.00±0.90）与对照组该细胞群在CD8+T淋巴细胞群中所占的平均比值（2.60±0.30）相比明显升高（P＜0.01）；BPH组CD8+CD28-T淋巴细胞群与CD8+CD28+T淋巴细胞群的比值的平均值（16.22±5.42）和对照组CD8+CD28-T淋巴细胞群与CD8+CD28+T淋巴细胞群的比值的平均值（3.48±0.62）相比明显升高（P＜0.01）；BPH组CD8+T淋巴细胞群的平均比例（33.80±6.65）%与对照组该细胞群的平均比例（33.35±2.84）%相比无变化（P＞0.05）。具体结果见表1，图1和图2。

图1 两组各项指标的比较

表1 两组患者外周血中CD8系列细胞群比例的比较

讨 论

BPH是一种老年男性疾病，也是一种常见病，严重影响患者的日常生活。而免疫系统的调节功能和生物学功能与BPH的发生和发展过程有着密切联系[3]。诸多研究表明[4,5]，绝大多数BPH组织中有炎细胞浸润，主要为淋巴细胞。研究发现，BPH患者外周血中T淋巴细胞发生明显改变，认为BPH与免疫炎症有关联[6]。而CD8+CD28-T细胞和CD8+CD28+T细胞均为T淋巴细胞亚群，CD8+CD28-细胞群是一种抑制性T细胞，CD8+CD28+细胞群是一种杀伤性T细胞，两者在免疫反应中起着相互对立的作用。

图2 流式结果图

本实验结果显示，首先BPH组CD8+CD28-调节性T淋巴细胞群的平均比例较对照组该细胞群的平均比例明显升高（P＜0.01），表明CD8+CD28-调节性T淋巴细胞群在BPH患者中反应性升高，即新激活的CD8+CD28-调节性T淋巴细胞群扩增，从免疫学角度可以解释为一种自身免疫保护状态。同时也表明BPH伴随有免疫炎症反应，这一观点与前人所得结论一致。其次结果还表明，BPH组CD8+CD28+效应性T淋巴细胞群的平均比例与对照组该细胞群的平均比例相比较相对降低（P＜0.01），CD8+CD28+效应性T淋巴细胞群的功能就是破坏正常细胞同时释放大量炎症介质，它的减少可以理解为被反应性升高的CD8+CD28-调节性T淋巴细胞群所抑制，这一观点也证明BPH的发生伴随免疫炎症反应，与前人观点一致。此外，BPH组CD8+CD28-T淋巴细胞群在CD8+T淋巴细胞群中所占的平均比值与对照组该细胞群在CD8+T淋巴细胞群中所占的平均比相比明显升高（P＜0.01），BPH组CD8+T淋巴细胞群的平均比例较对照组该细胞群的平均比例无变化（P＞0.05），两者再一次证明CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞群在BPH的发生中比例升高。研究结果同时显示，BPH组CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞群与CD8+CD28+效应性T淋巴细胞群的比值的平均值与对照组该比值的平均值相比较升高（P＜0.01），一方面表明反应性升高的抑制性CD8+CD28-T淋巴细胞群对效应性CD8+CD28+T淋巴细胞群起到抑制的作用，还有前列腺炎症的出现，表明CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞群在BPH中的抑制功能较正常男性减弱；另一方面，两者的平衡性遭到破坏，说明BPH的发生和发展中伴随有免疫炎症反应[2]，这一观点免疫稳态遭到破坏导致炎症反应的机制，也符合前人所得结论。

总之，本实验结果提示CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞群和CD8+CD28+效应性T淋巴细胞群参与BPH的发生和发展，一方面说明BPH的发生和发展伴随炎症反应，另一方面提示CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞群和CD8+CD28+效应性T淋巴细胞群在BPH的发病机制中发挥了一定的影响作用，这些结果为BPH发病机制的进一步研究奠定了基础，也为该病的诊断和治疗提供了新依据。

1 Gero Kramer, Dieter Mitteregger, MarbergerM. Is Benign Prostatic Hyperplasia (BPH) an Immune Inf ammatory Disease?Eur Urol2007; 5l(5): 1202-1216

2 Oliveim JB, Bidere N, Niemela JE,et a1. NRAS mutation causes a human autoimmune lympho-proliferative syndrome.Proe Natl Acad Sci USA2007; 104(21): 8953-8958

3 Steiner GE, Ojavail B, Ramer QK,et a1. The picture of the prostatic lymphokine network is becoming increasingly complex.Rev Urol2002; 4(2): 171-177

4 Blumenfeld W, Tucci S, Narayan P. Incidental Lymphocytic Prostatitis: Selective Involvement with Nonmalignant Glands.T Am J Surg Pathol1992; 16(4): 975-979

5 Gerstenbluth RE, Sefiela D, Maclennan GT,et a1. Distribution of chronic prostatitis in radical prostatectomy specimens with up-regulation of bel-2 in areas of inf ammmion.J Urol2002; 67(1): 2267-2270

6 张旭, 王少刚, 周四维, 等. 前列腺增生症的淋巴细胞表型分析. 中华实验外科 1998; 15(2): 136-137

（2013-12-08收稿）

Number of CD8+CD28-T lymphocytes in peripheral blood of patients with benign prostatic hyperplasia and its clinical signif cance

Zhang Liguo, Me Anliang, Gao Haiyang, Kang Shaosan, Cao Fenghong, Gao Weixing, Liu Jian, Wang Lei, Li Xiaoqiang
Urinary Surgery of Aff liated Hospital of Hebei Union University, Tangshan 063000, China

ObjectiveTo investigate the number of CD8+CD28-T cells in peripheral blood of patients with benign prostatic hyperplasia and its clinical signif cance.MethodsPercentages of CD8+CD28-T cells in the peripheral blood of patients with benign prostatic hyperplasia(51 cases) and normal men(51 cases) were determined by f ow cytometry, which were analyzed with statistical means.ResultsAverage percentage of CD8+CD28-T cells in the peripheral blood of patients with benign prostatic hyperplasia was obviously higher than that in the peripheral blood of the control group(P<0.01). Mean ratio of CD8+CD28-T cells and CD8+T cells of patients with benign prostatic hyperplasia also increased significantly, compared with that of the control group(P<0.01).ConclusionCD8+CD28-T cells involved in the occurrence and development of benign prostatic hyperplasia, which layed a foundation for the research of pathogenesis of benign prostatic hyperplasia.

prostatic hyperplasia; CD8+CD28-; T lymphocytes, regulatory

10.3969/j.issn.1008-0848.2014.04.003

R 697.32