Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表达及临床意义

沈湘萍陈 艳

（1．东阳市红十字会医院，浙江东阳 322100；2．东阳市人民医院，浙江东阳 322100）

Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表达及临床意义

沈湘萍1陈 艳2

（1．东阳市红十字会医院，浙江东阳 322100；2．东阳市人民医院，浙江东阳 322100）

目的探讨Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表达及其与胃癌临床生物学行为的关系。方法采用EnVision二步法检测Cadm1、Syndecan－1在60例癌旁胃黏膜组织（距肿块＞5cm），60例胃癌组织中的表达。结果Cadm1、Syndecan－1在癌旁胃黏膜组织中的表达阳性率显著高于胃癌组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。在60例胃癌组织中，Cadm1、Syndecan－1的表达与淋巴结转移、临床分期、浸润深度有关，与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、组织类型无关，差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表达下调。Cadm1、Syndecan－1的低表达或不表达与胃癌的淋巴结转移、临床分期、浸润深度有关。Cadm1、Syndecan－1的联合检测可以成为临床判断胃癌生物学行为的重要参考指标。

胃癌；免疫组化；Cadm1；Syndecan－1

Cadm1（cell adhesion molecule 1）是位于人类染色体11q23.2处的一个新的抑癌基因，参与细胞骨架构建和维持细胞的粘附功能的稳定，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，因此当其表达下调时就会引起肿瘤的发生和转移、侵袭。Syndecan－1是新近发现的一个分子量约为85～92KD的蛋白多糖，属于整合素粘附分子跨膜硫酸蛋白多聚糖家庭成员，参与了组织器官分化发育、血管形成、组织再生等一系列生理过程的调节，目前研究发现Syndecan－1的表达在控制恶性肿瘤细胞生长和转移等过程中起重要的作用，因此当其表达下调时会引发肿瘤的发生和转移。本文采用免疫组化方法检测Cadm1和Syndecan－1在胃癌和癌旁胃黏膜组织中的表达，分析Cadm1和Syndecan－1的表达水平与临床病理参数的关系，探讨两者与胃癌生物学的行为关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择在东阳市人民医院（45例）和东阳市红十字会医院（15例）行手术切除的胃癌标本。按诊断分为：（1）癌旁组60例，其中男25例，女35例，年龄32～73岁，平均（41.5± 8.5）岁，癌旁胃黏膜组织距肿块＞5cm；（2）胃癌组60例，其中男32例，女28例，年龄34～71岁，平均（45.7±7.3）岁，其中年龄＜60岁21例，≥60岁39例。肿瘤长径：＜5cm 47例，≥5cm 13例，胃癌患者术前均未行放化疗。

1.2 方法

1.2.1 实验试剂 Cadm1鼠抗人单克隆抗体、Syndecan－1鼠抗人单克隆抗体均购于美国Santa Cruz公司，DAB显色剂及即用型试剂盒均购置于上海基因科技有限公司。

1.2.2 免疫组化检测 免疫组化采用EnVision二步法检测Cadm1和Syndecan－1，标本全部经4%甲醛固定，固定时间大于6小时，石蜡包埋组织以厚4μm连续切片，常规脱蜡至水，切片浸于3% H2O2溶液中3分钟，高压抗原修复10分钟，冷却至室温，充分水洗，磷酸盐缓冲液（PBS）浸洗，3分钟×3次；甩去多余液体，加入Cadm1单抗或Syndecan－1单抗4℃过夜，PBS浸洗，3分钟×3次；甩去多余液体，滴加通用型二抗－HRP聚合物，37℃，30分钟；二氨基联苯胺（DAB）显色2分钟，在显微镜下观察显色情况，苏木素复染，0.1%盐酸酒精分化，PBS冲洗返蓝，乙醇脱水、透明、中性树胶封固。以正常小鼠血清代替一抗作替代对照，以PBS作为空白对照。

1.3 结果评定 根据染色程度和染色细胞百分率进行评定和分析。综合考虑阳性细胞数和染色强度来判定结果：计算阳性细胞百分数并赋予分值，≤5%为0分，＞5%～25%为1分，＞25%～50%为2分，＞50%～75%为3分，＞75%为4分；观察着色强度并赋予对应分值，无着色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分，两者相乘，0分为（－），1～4分为（＋），5～8分为（＋＋），9～12分为（＋＋＋）。将其中（－）～（＋）归为阴性表达，（＋＋）～（＋＋＋）归为阳性表达。

1.4 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件进行χ2检验和Pearson线性相关分析。

2 结 果

2.1 Cadm1和Syndecan－1在胃癌组织及癌旁胃黏膜组织中的表达 Cadm1在60例胃癌组织中表达率为26.7%，在癌旁胃黏膜组织中的表达率为83.3%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；Syndecan－1在胃癌组织中的表达率为23.3%，在癌旁胃黏膜组织中的表达率为88.3%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表1。

表1 Cadm1、Syndecan－1在胃癌及癌旁组织中的表达（%）

2.2 Cadm1在胃癌中的表达与临床各因素的关系

Cadm1在男性和女性胃癌患者中的表达率分别为28.1%，25.0%；Cadm1在年龄＜60岁和≥60岁胃癌患者中的表达率分别为28.6%和25.6%；Cadm1在肿块长径＜5cm和≥5cm胃癌患者中的表达率分别为29.8%和15.4%；Cadm1在组织学分级为高中分化胃癌组和低分化胃癌组中的表达率分别为26.1%，27.8%，以上两两间差异无统计学意义（P＞0.05）。Cadm1在TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期胃癌组和Ⅲ～Ⅳ期胃癌组中的表达率分别为52.2%和10.8%；Cadm1在胃癌浸润至黏膜层及黏膜下层组、胃癌浸润至肌层组和胃癌浸润至浆膜层组中的表达率分别为70%、32%和4%；Cadm1在胃癌无淋巴结转移组和胃癌有淋巴结转移组中的表达率分别为40.6%和10.7%。以上两者差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结果表明Cadm1与胃癌的浸润深度、临床分期和有无淋巴结转移有关。详见表2。

2.3 Syndecan－1在胃癌中的表达与临床各因素的关系 Syndecan－1在男性和女性胃癌患者中的表达率分别为21.9%和25.0%；Syndecan－1在年龄＜60岁和≥60岁胃癌患者中的表达率分别为23.8%和23.1%；Syndecan－1在肿块长径＜5cm和≥5cm胃癌患者中的表达率分别为21.3%和30.8%；Syndecan－1在组织学分级为高中分化胃癌组和低分化胃癌组中的表达率分别为26.2%和16.7%。以上两两间差异均无统计学意义（均P＞0.05）。Syndecan－1在TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期胃癌组和Ⅲ～Ⅳ期胃癌组中的表达率分别为37.5%和5.4%；Syndecan－1在胃癌浸润至黏膜层及黏膜下层组、胃癌浸润至肌层组和胃癌浸润至浆膜层组中的表达率分别为50%、28%和8%；Syndecan－1在胃癌无淋巴结转移组和胃癌有淋巴结转移组中的表达率分别为34.3%、10.7%，以上两者差异有统计学意义（P＜0.05）。结果表明Syndecan－1与胃癌的浸润深度、临床分期和有无淋巴结转移有关。详见表2。

表2 Cadm1、Syndecan－1在胃癌临床病理因素中的表达（%）

2.4 胃癌组织中Cadm1和Syndecan－1的表达关系 60例的胃癌组织中，Cadm1和Syndecan－1同时表达阳性5例，同时表达阴性35例，两者表达呈正相关（r＝0.795，P＜0.05），提示两种蛋白表达调控方向一致。详见表3。

表3 Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表达相关性

3 讨 论

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，目前，全球每年新发胃癌93.4万例，其中有近40万例在中国大陆，因此，对于胃癌的防治十分重要。胃癌的浸润转移是一个多步骤、连续的过程，主要分为以下几个步骤：（1）癌细胞间粘附能力下降，从原发瘤脱落；（2）脱落的癌细胞与细胞外基质通过特异受体识别结合并相互粘附；（3）癌细胞粘附后释放多种水解酶，使肿瘤细胞粘附的细胞外基质降解；（4）癌细胞以主动方式侵入循环管道形成栓子；（5）在特定器官的毛细血管滞留并附着，再次穿过血管壁并定居增殖，形成转移灶［1］。

Cadm1属于细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员，是一种在非小细胞肺癌被发现的肿瘤抑制基因，可以通过抗增殖及促凋亡活性抑制肿瘤的生长，当其功能丧失能导致癌细胞浸润及转移。已证明Cadml胞浆侧的FERM结合区和PDZ相互作用巩固亚基是体内抑制肿瘤活性的重要区域。Sakurai等［2］运用RNA干扰技术抑制正常上皮细胞Cadml表达，能导致上皮细胞形态改变，并使粘附能力下降，因此，Cadml与维持正常上皮细胞结构的粘附能力有关。以往采用免疫组化方法研究Cadm1表达下调在胃癌［3］、非小细胞肺癌、原发性肝癌、乳腺癌、宫颈癌、胆囊癌、食管鳞状细胞癌、大肠癌［4］等中被发现，且其表达与肿瘤分期、淋巴结转移、脉管浸润呈负相关。在本组研究中癌旁胃粘膜组织中的Cadm1的阳性表达率为83.3%，但在胃癌组织中的阳性表达率为26.7%，两者之间表达的差异有统计学意义（P＜0.05），提示Cadm1表达下调与胃癌的发生有密切关系，同以往的文献报道相一致。Cadm1在胃癌组织与其浸润深度粘膜层及粘膜下层组（阳性表达率70%）、肌层组（阳性表达率32%）、浆膜层组（阳性表达率4%），临床分期Ⅰ～Ⅱ期（阳性表达率52.2%）、Ⅲ～Ⅳ期（阳性表达率10.8%）及淋巴结有转移（阳性表达率40.6%）、淋巴结无转移（阳性表达率10.7%），两两之间表达差异均具有统计学意义（均P＜0.05），提示Cadm1与胃癌的侵袭、转移及预后有密切关系。

Syndecan－1分子属于I型跨膜蛋白，含有N末端信号肽。人定位在第2号染色体（2p23），基因全长含有5个外显子，分别编码分子量为3.5kD单链结构的核心蛋白。它属于粘附分子整合素跨膜粘结蛋白聚糖家族成员，通过其分子表面的硫酸肝素测链可结合一系列配基如细胞粘附分子、基质成分、生长因子、酶和酶抑制物等，以共受体方式调节细胞与微环境之间的相互作用，参与组织器官分化发育、血管形成、组织再生等一系列生理过程的调节。其可溶性Syndecan－1分子在组织损伤修复中可作为bFGF的拮抗剂或激动剂，参与损伤修复过程，同时也具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。随着研究的深入，发现Syndecan－1分子的表达在控制恶性肿瘤细胞生长和转移等过程中具有重要作用，而且可作为判断肿瘤预后的指标，以往研究Syndecan－1表达下调在贲门癌［5］、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌［6］、皮肤癌、前列腺癌、大肠癌、子宫内膜癌［7］等中被发现，且其表达与肿瘤分期、淋巴结转移、脉管浸润呈负相关。在本组研究中癌旁胃黏膜组织中的Syndecan－1的阳性表达率为88.3%，但在胃癌组织中的阳性表达率为23.3%，两者之间表达的差异有统计学意义（P＜0.05），提示Syndecan－1表达下调与胃癌的发生有密切关系，同以往的文献报道相一致。Syndecan－1在胃癌组织与其浸润深度黏膜层及黏膜下层（阳性表达率50%）、肌层（阳性表达率28%）、浆膜层（阳性表达率8%），临床分期Ⅰ～Ⅱ期（阳性表达率37.5%）、Ⅲ～Ⅳ期（阳性表达率5.4%）及淋巴结有转移（阳性表达率34.3%）、淋巴结无转移（阳性表达率10.7%），两两之间表达差异均具有统计学意义（均P＜0.05），提示Syndecan－1与胃癌的侵袭、转移及预后有密切关系。

综上所述，胃癌中Cadm1和Syndecan－1表达均下调，并且两者之间的表达有相关性，两者在肿瘤的发生、发展中具有重要作用，联合检测Cadm1和Syndecan－1的表达对判断胃癌的预后有重要价值，两者表达下调可以作为胃癌预后不良的有效指标。

［1］ 王肖泽，王继见．胃癌转移机制研究新进展．重庆医学，2010，39（4）：479

［2］ Sakurai Yageta M，Masuda MTsuboi．Tumor suppressor CADM1 is involved in epithelial cell structure．Biochemical and Biophysical Research Communications，2009，390（3）：977

［3］ 章辉，陶芳芳，曹学全，等．CADM1、E－cad在胃癌中的表达及意义．浙江医学，2013，35（17）：1568

［4］ 熊枝繁，丁巍．CADM1在大肠癌组织中的表达及临床意义．中国肿瘤临床，2011，38（7）：394

［5］ 呼秀峰，姚俊，如乙，等．贲门癌组织中Syndecan－1表达及临床意义．中华实用诊断与治疗杂志，2013，27（12）：1199

［6］ 刘晓飞，李宜雄．胰腺癌组织Syndecan－1和E－cadherin表达临床意义的研究．中华肿瘤防治杂志，2009，16（9）：680

［7］ 何中慧，徐红，梁秀就，等．Syndecan－1和E－cadherin在子宫内膜癌组织中的表达及其意义．广西医科大学学报，2009，26（1）：86