补骨脂、肉豆蔻炮制前后在 “二神丸” 中对脾肾阳虚泄泻小鼠的止泻研究

潘 新， 胡昌江， 耿媛媛， 赵 玲， 吴珊珊

（成都中医药大学药学院，四川 成都 611137）

补骨脂、肉豆蔻炮制前后在 “二神丸” 中对脾肾阳虚泄泻小鼠的止泻研究

潘 新， 胡昌江*， 耿媛媛， 赵 玲， 吴珊珊

（成都中医药大学药学院，四川 成都 611137）

目的 探讨补骨脂、 肉豆蔻生品与炮制品分别配方组成的古方 “二神丸” 对 “脾肾阳虚泄泻” 小鼠止泻作用的差异， 以阐明炮制对方剂疗效影响。 方法 设立空白组、 阳性药物组、 “二神丸” Ⅰ （补骨脂生品 +肉豆蔻生品）、“二神丸” Ⅱ （补骨脂生品 +肉豆蔻煨制品）、 “二神丸” Ⅲ （补骨脂盐炙品 +肉豆蔻生品）、 “二神丸” Ⅳ （补骨脂盐炙品 +肉豆蔻煨制品） 共6组， 观察对番泻叶所致小鼠急性腹泻以及氢化可的松和大黄造成的 “脾肾阳虚泄泻”模型小鼠泄泻的影响。 结果 “二神丸” Ⅲ、 Ⅳ组的小肠推进率与空白组相比有显著性差异 （P＜0.05）； “二神丸”Ⅳ组的首次泄泻时间、 稀便率、 稀便级和腹泻指数与空白组比较， 均有极显著性差异 （P＜0.01）。 结论 “二神丸”Ⅳ组的止泻作用优于其他组合，即盐炙补骨脂和煨炙肉豆蔻组方的 “二神丸” 止泻作用增强。

“二神丸”； 脾肾阳虚泄泻； 炮制品； 止泻作用

辨证施治、复方入药、饮片炮制是中医用药的三大特色。本实验将补骨脂、肉豆蔻炮制前后分别组成的复方“二神丸” 进行研究， 充分体现复方入药、饮片炮制的中医用药特色，紧密结合中医临床用药的实际，突出其研究实用性。

“二神丸” 出自宋·许叔微的《普济本事方》， 以补骨脂和肉豆蔻组成，具有温肾暖脾，涩肠止泻之功效，是临床治疗五更泄泻的基础方，而脾肾阳虚是引起五更泄泻的主要病机［1］。 补骨脂具有温肾助阳、 固精缩尿、 温脾止泻的作用［2］， 在 “二神丸” 中补骨脂需盐炙， 以增强温肾暖脾止泻作用［3］（在前期研究中已证明这一点）； 肉豆蔻温中行气， 涩肠止泻之效［4］， 原方中肉豆蔻用生品， 但现代有研究表明单味生肉豆蔻有滑肠之弊，通过煨制后，可免于滑肠， 并增强固肠止泻作用［5-6］， 也有研究认为， 肉豆蔻生品即有显著的止泻作用而炮制不能增强肉豆蔻止泻作用，故不用炮制［7］。 《中囯药典》 2010 年版一部 “四神丸” 中肉豆蔻用煨制品 （ “四神丸” 是 “二神丸” 基础上加吴茱萸、 五味子而成， 主治范围十分接近）。 在古方应用上使用炮制品有所区别，复方 “二神丸” 中肉豆蔻是否需要煨制，亦缺乏炮制机理阐述。因此，通过本实验的研究，将解决补骨脂、 肉豆蔻在 “二神丸” 中炮制入药理由， 为指导临床合理用药，提高方剂疗效具有重要的实际意义。

1 实验材料

1.1 药物 补骨脂生品， 购于成都市药材市场， 经成都中医药大学药学院生药教研室卢先明教授鉴定，为豆科植物补骨脂 Psoralea coryli folia L.的干燥成熟果实。

补骨脂盐炙品：取补骨脂药材，加入药材量一半的2%食盐水， 室温闷润 24 h， 于 150 ℃炒制 10min 后置托盘中于30℃鼓风烘箱中烘干。

肉豆蔻生品：购于成都市药材市场，经成都中医药大学药学院生药教研室卢先明教授鉴定为肉豆蔻科植物肉豆蔻 Myristica fragrans Houtt.的干燥种仁。

肉豆蔻煨炙品： 取肉豆蔻生品与麦麸 （100 g∶40 g）同置锅内， 文火加热， 温度控制在 130 ～150 ℃， 翻炒20 min， 至麦麸呈焦黄色， 肉豆蔻呈棕褐色 （据文献报道，肉豆蔻麸炒止泻效果优于面裹煨、纸裹煨、滑石粉煨，故直接用麸煨制［5］）。

“二神丸” Ⅰ： 补骨脂生品 +肉豆蔻生品 （20 g∶10 g）。

“二神丸” Ⅱ： 补骨脂盐炙品 +肉豆蔻生品 （20 g∶10 g）。

“二神丸” Ⅲ： 补骨脂生品 +肉豆蔻煨炙品 （20 g∶10 g）。

“二神丸” Ⅳ： 补骨脂盐炙品+肉豆蔻煨炙品 （20 g∶10 g）。

将四种组合的 “二神丸” 先用 75%乙醇回流提取， 药渣再加水煎煮， 合并药液， 浓缩， 配制成 0.5 g/mL药液备用。

易蒙停药液 （西安杨森制药有限公司，产品批号110901627）： 从胶囊中取出一定量药粉， 加蒸馏水配制成0.04mg/mL的药液。

参苓白术丸 （山东方健制药有限公司，产品批号20120515） 混悬液： 取一定量药丸， 加蒸馏水均匀混合配制成 0.5 g/mL的混悬液。

番泻叶水煎液 （药材购于成都市药材市场）： 加水煮沸约 10 min 后用二层纱布过滤， 滤液减压浓缩成 0.3 g/mL的药液。

大黄混悬液 （药材购于成都市药材市场）： 取一定量细粉制成 0.25 g/mL混悬药液。

氢化可的松注射液 （天津药业集团新郑股份有限公司， 产品批号 1103052）， NaCl注射液 （四川科伦药业股份有限公司， 产品批号 M12011117）。

1.2 仪器 小鼠灌胃器、 1 mL一次性无菌注射器、 自制小鼠代谢笼 （实用新型专利， 专利号： CN201146735）、 滤纸、 计时手表， 电子天平 （ 德国 Sartorius公司） 。

1.3 动物 昆明种健康小鼠 （普通级）， 体质量 18 ～22 g，雄性， 成都达硕生物科技有限公司提供， 合格证号 SCXK（川） 2013-24。

1.4 试验场所 成都中医药大学中药炮制实验室 （国家中医药管理局三级实验室）； 成都中医药大学药学院中药药理实验动物观察室， 许可证号： 川实动管使第15号。

2 方法

2.1 造模及给药 在中医药现代研究中， 建立合适的动物模型非常重要，经过多年的研究探索，已经出现了较多的脾阳虚和肾阳虚的造模方法，但是对脾阳虚与肾阳虚同时发病，即脾肾阳虚证的造模方法报道较少。本实验在课题组前期对肾阳虚和脾阳 虚小鼠 模型研究基 础 上［8-10］， 并参照 《医药实验动物模型——制作与应用》、 《中药药理研究方法学 （ 第二版） 》 等 药理学研究 工具书［11-13］， 确定了造模方法，即氢化可的松及大黄复合造模致小鼠 “脾肾阳虚泄泻”模型。

取健康雄性小鼠20只， 随机分为2组， 空白组与模型组， 每组各10只。 适应性饲养3 d后， 均无异常表现即纳入实验，用苦味酸标记，称定质量。空白组每天注射等体积的 NaCl注射液， 模型组动物每天按 0.1 m L/10 g体质量臀部皮下注射氢化可的松注射液， 连续7 d， 从第 8天开始， 模型组停止注射氢化可的松， 用大黄灌胃至第 14天。记录动物从第1天至第15天的体质量、 饮食饮水量， 外观和行为状况。

2.1.1 一般外观行为状况 造模组动物出现活动减少、 反应迟钝、弓背蜷缩、 体毛枯疏等情况，在造模2～3天后相继出现软稀便， 第4～6天出现溏泄， 且部分小白鼠有不同程度的脱肛、腹部肿胀的情况。空白组动物则无异常表现。

2.1.2 体质量及饮食饮水变化状况 观察第 1 ～15 天空白组与模型组小鼠的平均体质量变化与平均每只小鼠每日的摄食及摄水的情况， 结果见表1 ～2。

由表1 ～2 可观察到在第1 ～15 天， 空白组小鼠的体质量每日都有所增长且增长幅度较大，而模型组小鼠在第1～7天时有略微增重，从第8天开始体质量急剧下降；空白组小鼠的饮食量也是每日有所增加，模型组在造模的1～6 d 饮食量基本保持在平稳状态， 7 ～10 d饮食量有所减少，第10天后基本保持稳定； 空白组和模型组的饮水量变化趋势基本相同，但模型组的饮水量始终低于空白组。

表1 氢化可的松及大黄致 “脾肾阳虚泄泻” 小鼠体质量变化情况

表2 氢化可的松及大黄致 “脾肾阳虚泄泻” 小鼠饮食饮水量变化情况

2.1.3 小结 本实验中， 模型组小鼠通过注射氢化可的松和大黄灌胃后相继出现的溏泄脱肛，腹部肿胀，体质量减轻等症状与中医理论中的 “ 脾肾阳虚泄泻” 相符［14-15］， 因此认为此种方法得到的 “脾肾阳虚泄泻” 模型造模成功。

2.2 “二神丸” 对脾肾阳虚泄泻小鼠肠推进率的影响取小鼠 60 只， 按体质量随机分为 6 组， 每组 10 只。 除正常组外， 其他各组按 “2.1” 项下方法造模， 造模 14 d 后，按以下方式给药： 阳性组按 0.2 mL/10 g体质量灌以参苓白术丸混悬液， 给药组分别按 0.2mL/10 g体质量灌以 4 种组合的 “二神丸” 药液，空白组灌以同等体积的水， 连续6 d， 第 6 天给药后禁食不禁水 12 h， 第 7 天以一定量活性炭混匀于药物中给各组小鼠灌胃， 20 min 后断颈处死， 剖腹取出从幽门回部至回盲部的全部小肠，剪去肠系膜，将小肠轻轻拉直，平铺于白纸上，测量并记录墨汁推进长度，计算墨汁推进百分率。结果见表3。

表3 四种组合 “二神丸” 对 “脾肾阳虚” 模型小鼠小肠推进影响

由表3可见， “二神丸” Ⅲ、 Ⅳ组以及阳性组的小肠推进率与空白组相比有显著性差异 （P＜0.05）， 说明 “二神丸” Ⅲ、 Ⅳ组对 “脾肾阳虚泄泻” 小鼠的腹泻有明显的改善作用。

2.3 “二神丸” 对番泻叶所致小鼠急性腹泻的止泻作用

取小鼠 60 只， 按体质量随机分为 6 组， 每组 10 只， 实验前禁食不禁水 12 h。 空白组灌蒸馏水； 阳性组按 0.2 mL/10 g体质量灌易蒙停药液； 给药组分别按 0.2 mL/10 g体质量灌以四种组合的 “二神丸” 药液； 灌胃后 30 min 各组均灌番泻叶 0.2 m L/10 g， 随后将小鼠置垫滤纸的自制小鼠代谢笼中， 观察小鼠稀便点数， 连续观察5 h， 各组数据采用 t检验进行统计分析。 结果见表 4。

表4 四种组合 “二神丸” 对番泻叶所致小鼠腹泻的影响

观察指标［16］： ①稀便率： 每只动物所排稀便数与总便数之比。②稀便级：表示稀便的程度。以稀便污染滤纸形成污迹面积的大小定级。 分为四级， 标准： 级数 （污染直径 cm）： 1 （ ＜1）； 2 （1 ～1.9）； 3 （2 ～3）； 4 （ ＞3）。 统计时先逐个统计每一堆稀便的级数，然后将该鼠所有稀便级数相加除以稀便次数得稀便的平均级数。③腹泻指数：稀便率与稀便级的乘积。

2.4 结果 由表 4 可见， “二神丸” Ⅳ组的首次泄泻时间、稀便率、稀便级和腹泻指数与空白组比较，均有极显著性差异 （P＜0.01）， 说明 “二神丸” Ⅳ组可明显延长番泻叶所致急性腹泻小鼠的首次泄泻时间，降低稀便率、稀便级和腹泻指数。

3 讨论

“二神丸” 乃治疗脾肾虚寒， 五更泄泻的传统古方， 文献资料多为对该方组成药物补骨脂、肉豆蔻的单味药物研究，鲜见复方的研究，且少数对复方的研究忽略了其组方中药物炮制品的临床药效，因此本实验将补骨脂生品、补骨脂盐炙品、肉豆蔻生品、肉豆蔻煨炙品两两组合配方，得到四种组合的 “二神丸”， 以 “脾肾阳虚泄泻” 和急性腹泻的动物模型为研究对象，考察小鼠小肠推进率、首次泄泻时间、稀便级、稀便率以及腹泻指数为指标，确定止泻效果最佳的一种 “二神丸” 组合。

通过实验得到的结果显示， “二神丸” Ⅲ、 Ⅳ组对“脾肾阳虚泄泻” 小鼠有明显的止泻作用， 且 “二神丸”Ⅳ组可明显延长番泻叶所致急性腹泻小鼠的首次泄泻时间，降低稀便率、稀便级和腹泻指数。 综合考虑，确定了 “二神丸”Ⅳ组的止泻作用优于其他组合，提示了 “二神丸”中药物补骨脂和肉豆蔻分别经过盐炙和煨炙后止泻作用有所增强，关于该复方中药物炮制增效的机理还有待下一步研究。

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R285.5

： B

： 1001-1528（2014）05-1059-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.040

2013-04-15

国家自然科学基金面上项目 （81274085）

潘 新 （1988—） ， 女， 博士生， 主要从事中药学研究。 Tel： 18607196428， E-mail： px520520@126.com

*通信作者： 胡昌江 （1952—） ， 男， 教授， 博士 生导 师， 主要 从事 中药炮 制学 的教学 和科 研。 Tel： 13980980796 ， E-mail： hhccjj@ hotmail.com