头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的评价

黄秀荣

（广西河池市人民医院检验科，广西 河池 547000）

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的评价

黄秀荣

（广西河池市人民医院检验科，广西 河池 547000）

目的探讨研究头孢西丁（FOX K-B）法对耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测价值。方法选取132株葡萄球菌，分别通过苯唑西林（OXA）琼脂平板筛选试验法、FOX K-B法以及OXA K-B法对MRS加以检测，将OXA琼脂平板筛选法的检测结果作为标准，对比分析FOX与OXA K-B法的敏感性与特异性。结果本组132株葡萄球菌中，74株金黄色葡萄球菌通过OXA琼脂平板筛选检测确定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为30株；58株葡萄球菌属于凝固酶阴性，其中48株检测确定为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）。参考以上标准，FOX K-B法对MRSA检测的特异性、敏感性均达到100%，但OXA K-B法检测的特异性为90.91%（40/44），敏感性为93.33%（28/30）。FOX K-B法对MRCNS检测的特异性、敏感性均达到100%，但OXA K-B法检测的特异性为40.0%（4/10），敏感性为95.83%（46/48）。结论FOX K-B发检测MRS的敏感性与特异性极高，具有极高的应用价值。

FOX K-B法；检测；耐甲氧西林葡萄球菌；评价

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是全球范围内医院感染中的一种重要病原菌，并且已经扩散成社区性感染[1]。在部分慢性疾病患者、吸毒人群中尤其流行，其感染率逐年增长。其中，MRCNS感染的发生概率最高。以上两种葡萄球菌对临床抗菌药物的耐药性十分良好。所以，实验室研究务必要确定一种可靠方法，可以准确筛选及确认。现我院针对临床分离出来的132株葡萄球菌，分别应用FOX与OXA K-B法加以检测，并将结果同OXA琼脂平板筛选法予以对比分析，总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采集我院临床分离出来的132株葡萄球菌分别源于临床脓液/创面分泌物、前列腺液、尿液、血液以及痰液等各项送检标本。其中，74株为金黄色葡萄球菌，58株为凝固酶阴性葡萄球菌。

1.2 实验试剂

OXA纸片：每片1 μg；FOX纸片：每片30 μg；来自英国Oxoid公司。水解酪蛋白（即为M-H）琼脂选自杭州天和微生物试剂有限公司；OXA琼脂平板选自北京朋利驰科技有限公司。

1.3 方法

OXA琼脂平板筛选法、FOX K-B法以及OXA K-B法都参考NCCLS制定的标注实施操作。OXA琼脂平板筛选法检测结果评定标准[2]：如金黄色葡萄球菌，应置于35 ℃环境中孵育24 h，并可以透光观察，在平板上所有细菌的生长均可评判为MRSA。如凝固酶阴性葡萄球菌应该在孵育48 h以后对其透光观察，并且平板上所有细菌生长均可评判为MRCNS。

1.4 评判标准

FOX K-B法[3]：①对MRSA检测的评判标准。R≤19 mm，S≥20 mm。②对MRCNS检测的评判标准。R≤24 mm，S≥25 mm。OXA K-B法：①对MRSA检测的评判标准。R≤10 mm，S≥13 mm。在11～12 mm时，判断为中介。②对MRCNS检测的评判标准。R≤17 mm，S≥18 mm。质控菌株选为金黄色葡萄球菌（即为ATCC26112）。

2 结 果

2.1 对金黄色葡萄球菌的检测结果

本组132株菌中，74株属于金黄色葡萄球菌，通过OXA琼脂平板筛选法检测发现MRSA有30株，比率为40.54%（30/74）；MSSA有44株，比率为59.46%（44/74）。见表1。将OXA琼脂平板筛选法检测结果作为评定标准，可知FOX K-B法检测的特异性与敏感性均达100%。但OXA K-B法检测的特异性为90.91%（40/44），敏感性为93.33%（28/30）。

表1 苯唑西林与头孢西丁纸片扩散法对金黄色葡萄球菌检测结果分析表[n（%）]

2.2 3种方法对凝固酶阴性葡萄球检测结果

本组132株菌中，检测出58株菌凝固酶阴性葡萄球菌，通过OXA琼脂平板筛选法检测发现MRCNS有48株，比率为82.76%（48/58），MSCNS有10株，比率为17.24%（10/58）。见表2。将OXA琼脂平板筛选法检测结果作为评定标准，可知FOX K-B法检测的特异性与敏感性均达100%。但OXA K-B法检测的特异性为40.0%（4/10），敏感性为95.83%（46/48）。

3 讨 论

苯唑西林琼脂平板法指通过耐甲氧西林葡萄球菌均能够在高渗平板上继续生长的特性对其加以筛选及鉴定，可作为NCCLS推荐的检测MRS标准筛选方法。据以往资料表明将PCR检测meca基因作为金标准，OXA琼脂平板法检测特异性、灵敏性均是100%。所以，本次实验把OXA琼脂平板法设定为参考标准方法。OXA K-B是检测MRS的一种传统方法，但是对于高产β-内酰胺酶菌株能够减缓OXA发生水解，从而产生耐假药[4-5]。但是如果mecA基因表达水平很低时，可能出现假敏感。OXA属于第二代头酶烯类的一种抗生素，对β-内酰胺酶具有高度的稳定性[6]。同时对葡萄球菌PBP4具有很高的亲和性，并且FOX存在时，将促进mecA基因表达合成PBP2a，将mecA基因中的低表达菌株能够被检测出来，但是OXA不具备该特点。以往NCCLS添加了应用FOX K-B法对MRS进行检测。本次研究对132株葡萄球菌予以MRS检测，将OXA琼脂平板法检测结果作为金标准，用来评价FOX K-B法与传统OXA K-B法检测的效率。实验结果表明FOX K-B法和OXA琼脂平板法检测结果相互一致，但其敏感性、特异性都是100%。而OXA K-B法对MRSA检测的效率和FOX琼脂平板法比较相近，其检测的特异性90.91%（40/44），敏感性为93.33%（28/30）。对于MRSN检测来说，OXA K-B法的敏感性为95.83%（46/48），同OXA琼脂平板法相近似，但是其特异性仅为40.0%（4/10）。显著性小于OXA琼脂平板法。由此说明对MRSCN的检测，OXA K-B法所检测出来的假耐药较高。在本组132株葡萄球菌中，OXA K-B法检测出10株假耐药、4株假敏感。在对其进一步采取头孢硝噻酚实验时显示10株假耐药均属于高产β-内酰胺酶菌株，也许与FOX对其稳定性不够，容易导致其假耐药，或是中介有相关性。因为FOX对β-内酰胺酶具有高度的稳定性，因此随其造成的影响甚微，其结果比较明确，容易判断。此外4株假敏感是否属于mecA低表达还需要进一步证实。实验期间可见，在盐平板上24 h以后，对金黄色葡萄球菌没有菌落产生的部分菌株，在放置48 h以后又出现菌落生长。但是对凝固酶阴性葡萄球菌，在24、48、72 h以后发现均存在部分差异，因此应用盐平板法对MRS进行筛选时，应该严格根据规定孵育时间进行判读结果。FOX K-B法容易保存，对MRS检测的效率远远高于OXA K-B法，且可作为MRS检测时更适合的介质。但是在实际报告时，应报告OXA耐药，而不是FOX耐药。总之，FOX K-B法检测MRS的敏感性与特异性极高，具有极高的应用价值。

表2 苯唑西林与头孢西丁纸片扩散法对凝固酶阴性葡萄球菌检测结果表[n（%）]

[1] 喻华,刘小琦,刘华,等.头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的临床应用评价[J].国际检验医学杂志,2006,27(12): 1085-1087.

[2] 胡付品,吴湜,叶信予,等,.头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌[J].中国感染与化疗杂志,2005,5(2):86-88.

[3] 任福荣,程永娥,孙浩仙,等.头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的评价[J].工企医刊,2006,19(3):46.

[4] 宋焰桃,徐元宏.头孢西丁纸片评价耐甲氧西林葡萄球菌的探讨[J].临床输血与检验,2008,10(2):103-106.

[5] 何云燕,夏云,庞丽.应用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌[J].重庆医学,2007(1):55-56+59.

[6] 王大方,倪语星.头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌[J].检验医学,2004,19(6):487-489.

Evaluation of Cefoxitin Disk Diffusion Method to Detect Methicillin-Resistant Staphylococcus

HUANG Xiu-rong
(Department of Laboratory, Hechi People's Hospital, Hechi 547000, China)

ObjectiveTo explore the cefoxitin disc diffusion method for methicillin-resistant staphylococcus(MRS)test value.MethodChoose 132 strains of staphylococcus, respectively by benzene azole Westwood AGAR plate screening test method, cefoxitin disc diffusion method and benzene azole Westwood detection of MRS disc diffusion method, the benzene azole Westwood method of AGAR plate screening test results as the standard, analysis of cefoxitin and benzene azole Westwood disc diffusion method, sensitivity and specificity.Results132 strains of staphylococcus aureus, 74 strains of staphylococcus aureus benzene thiazole Westwood of AGAR plate screening tests identified as methicillin-resistant staphylococcus aureus(MRSA)is 30 strains; 58 grape bacteria strains belong to coagulase negative, of which 48 strains testing identified as methicillin-resistant coagulase negative staphylococcus(MRCNS). Refer to the above standard, cefoxitin disc diffusion method for MRSA detection specificity and sensitivity of 100%, but the benzene azole Westwood disc diffusion method to detect the specificity was 90.91% (40/44), the sensitivity was 93.33%(28/30). The cefoxitin disc diffusion method for MRCNS detection specificity and sensitivity of 100%, but the benzene azole Westwood disc diffusion method to detect the specificity of 40.0%(4/10), the sensitivity was 95.83%(46/48).ConclusionCefoxitin disc diffusion high detection sensitivity and specificity of MRS, have high application value.

The cefoxitin disc diffusion method; Detection; Methicillin-resistant staphylococcus aureus; Evaluation

R446

B

1671-8194（2014）09-0022-02