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一种结核分枝杆菌RNA/DNA同步定量分析方法

申请号:201310557556.6公布号:CN103602737A

申请日:2013.11.11公布日:2014.02.26

申请人:复旦大学;深圳市浩鼎生物科技有限公司

发明人:李瑶;彭劲甫;骆子义;吴海;姜丽娟

本发明属于生物工程检测技术领域，具体为一种结核分枝杆菌RNA/DNA同步定量分析方法。本发明包括如下步骤:结核分枝杆菌特异性定量PCR和RT-qPCR引物和探针设计;标准DNA的克隆和质粒改造;细菌RNA与DNA的同时抽提;在同一反应管中同时进行RT-qPCR和PCR;荧光定量PCR检测方法的建立和优化。利用本发明的方法可以实现对结核分支杆菌的快速定量检测，并确定细菌的生长活性状态。本发明方法简单、灵敏度高、特异性强，解决了现有检测方法中检测周期长、阳性率低、不能区分细菌的生长状态的问题，对基础研究、临床快速诊断，及药物开发和药物使用效果的临床评价具有重要的实际意义。

一种化妆品微生物的检测方法

申请号:201310618267.2公布号:CN103614451A

申请日:2013.11.29公布日:2014.03.05

申请人:中山鼎晟生物科技有限公司

发明人:郭狄

摘 要:本发明涉及一种化妆品微生物的检测方法，该检测方法，包括以下步骤:先分别配制高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、不含样品的空白对照液和含微生物的阳性对照液;然后将制得的高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、空白对照液和阳性对照液分别注入四个含有培养基的培养皿中进行培养并进行菌落计数，仔细观察细菌培养结果，通过对比对细菌进行鉴定。该方法采用SCDLP增菌液对样品进行稀释，可明显提高检测灵敏度，将卵磷脂吐温80营养琼脂作为大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的培养基，使操作更为简单，检测结果更准确。

河口弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒及检测方法

申请号:201310276906.1公布号:CN103614455A

申请日:2013.07.03公布日:2014.03.05

申请人:淮海工学院

发明人:张晓君;徐加涛;阎斌伦;秦国民

摘 要:本发明是一种用于河口弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒，其组成为:反应液A，1支，其组成为:10×Lampbuffer，dNTP，硫酸镁水溶液，甜菜碱水溶液，引物Vaes-F3、Vaes-B3、Vaes-FIP、Vaes-BIP，BstDNA 酶，10×荧光染料SYBR GreenⅠ，阳性对照试样，阴性对照试样和超纯水。本发明还涉及应用该试剂盒进行检测的方法。本发明试剂盒具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于水产养殖场现场快速检测。本发明方法解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂、需要复杂仪器等缺陷，为水产动物疾病检测提供了新的技术平台，能较好满足目前对河口弧菌引起的疾病的现场检测的迫切需要。

用于创伤弧菌的LAMP-LFD检测的引物和探针序列

申请号:201310556940.4公布号:CN103614466A

申请日:2013.11.11公布日:2014.03.05

申请人:宁波大学

发明人:陈炯;周前进

摘 要:本发明公开了用于创伤弧菌的LAMP-LFD检测的引物和探针序列，特点是包括三对LAMP的引物TolC-F3、TolC-B3、TolC-FIP、TolC-BIP、TolC-LF、TolC-LB 和一条探针TolC-HP步骤，其中Van-FIP为5'端生物素标记引物，探针TolC-HP为5'端异硫氰酸荧光素FITC标记探针，具体序列如序列表中SEQNO1-NO7所示，优点是具有更高的快捷性、特异性和灵敏度，仪器需求简单，有利于创伤弧菌的早期诊断和检测，可满足基层检测机构和现场疫源地检测的需要。

一种花生青枯病菌巢式PCR检测方法

申请号:201310609847.5公布号:CN103614475A

申请日:2013.11.27公布日:2014.03.05

申请人:福建省农业科学院植物保护研究所

发明人:游泳;谢世勇;李本金;陈庆河;丁雪玲;刘裴清

摘 要:本发明涉及一种花生青枯病菌的巢式PCR检测方法，以样品DNA为模板，利用细菌16S-23S rDNA ITS序列通用引物L1/L2进行第一轮PCR扩增，再以第一轮PCR产物为模板，通过设计的一对鉴别花生青枯病菌的特异性引物W1/W2，进行第二轮PCR扩增，扩增产物进行电泳检测，如果出现374 bp的特异条带，则确定所检测的病原菌为花生青枯病菌。本发明的花生青枯病菌巢式PCR检测方法，对病菌基因组 DNA的检测灵敏度为10 fg，且能克服生物学鉴定、酶联免疫技术和常规PCR等方法的缺点，提供了一种快速、灵敏、特异的花生青枯病菌检测方法，可用于田间花生青枯病菌的早期诊断，对该病害的早期检测和及时防治具有十分重要的意义。

由免疫复合物直接对微生物进行测序的测定法与方法

申请号:201280015562.2公布号:CN103635591A

申请日:2012.01.26公布日:2014.03.12

申请人:布里格姆及妇女医院股份有限公司;因斯布鲁克医科大学

发明人:阿瑟·卡泽尔;理查德·布隆伯格

摘 要:本文提供了用于在患者样品中对免疫刺激性微生物进行检测和/或识别的MiIP-Seq测定法和方法。本文还提供了用于对感染性疾病进行诊断或在患者样品中对先前未特征化的微生物进行识别的方法。本文所述的方法和测定法相对于现有方法的优势在于:(i)不需要用于微生物扩增的培养步骤;(ii)并非特异性针对特定微生物，可用于对先前未特征化的微生物进行识别;以及(iii)由于不进行微生物培养步骤，因此允许快速处理。

用于测定人免疫缺陷病毒(HIV)的方法、组合物和试剂盒

申请号:201280028651.0公布号:CN103635575A

申请日:2012.06.14公布日:2014.03.12

申请人:盖立复治疗公司

发明人:达努塔·夫龙斯卡;凯瑟琳·舒斯特;莱斯利·特雷姆利特

摘 要:本发明涉及组合物、方法和试剂盒，它们用于测定样品中存在或不存在HIV，特别是用于测定HIV-1M组、HIV-1O组和/或HIV-2，特别是用于同时测定HIV-1M组、HIV-1O组和HIV-2。

一种检测Notch信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用

申请号:201310686645.0公布号:CN103627814A

申请日:2013.12.13公布日:2014.03.12

申请人:青岛大学医学院附属医院

发明人:王海波;梁晔;刘相萍;王丽萍;刘世海;姚如永;隋爱华;杨堃;迟静薇;周泉;刘加秀

摘 要:本发明提供了一种检测细胞内Notch信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用，本发明所述检测试剂包括检测ADAM10基因、ADAM17基因、AES基因、CBL基因、CCND1基因、CD44基因等PCR反应引物以及相应的内参调控基因GAPDH、ACTB、B2M的引物。本发明提供了检测NOTCH信号通路核心分子变化的试剂，借助于所述检测试剂可以通过实时荧光定量PCR在转录水平快速检测出与NOTCH通路相关的基因，在此基础上分析研究肿瘤NOTCH信号通路的核心分子及作用机理，从而快速准确的找到肿瘤相关药物的NOTCH调节信号通路，为抗癌药物筛选、新靶向药物的机制探讨等提供了有力的工具。

奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速检测试剂盒

申请号:201310673972.2公布号:CN103627812A

申请日:2013.12.11公布日:2014.03.12

申请人:广西大学

发明人:何宝祥;陈亚明;杜向宏

摘 要:本发明公开了一种奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速检测试剂盒，包括由四对特异性引物构成的引物对组。应用本发明结合多重PCR技术可一次性同时扩增致病性无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌的特异性基因sip、nuc、rrnB和HblA，再通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，能对奶样中存在的主要病原菌进行全面、高效、准确的检测与鉴定。本发明克服了常规病原菌检测技术操作繁琐、费时耗力等缺点，增加病原菌检查的种类，提高了检测的特异性和灵敏度，具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，适合在基层兽医站和奶牛养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。

环境微生物快速检测方法

申请号:201310564815.8公布号:CN103627800A

申请日:2013.11.14公布日:2014.03.12

申请人:浙江天科高新技术发展有限公司

发明人:陈欢;刘雳;郭红樱;张遐耘;张启坤;方序;钱兵

摘 要:本发明公开了一种环境微生物的检测方法。①微生物收集，微生物收集自空气滤网，②微生物基因组提取，③细菌16S rDNA扩增，真菌18S rDNA扩增，④rDNA测序，⑤数据分析，包括去污染序列、低质量序列，归并高相似度序列，序列注释;⑥建立该环境细菌数据库，包含种类信息、序列信息和丰度信息;和该环境真菌数据库，包含种类信息、序列信息和丰度信息。本发明尤其适于对洁净区环境微生物进行普查，较常规基于培养的检测技术更加快捷、准确、灵敏，检测成本和时间大幅度降低，显著提高微生物污染监测和控制能力。另一方面，基因测序数据还提供了微生物分子水平的标记，对于追溯和判断微生物来源，准确识别污染源具有重要价值。

一种提高水中人源隐孢子虫特异性的方法以及评价水中人源隐孢子虫活性的方法

申请号:201310542387.9公布号:CN103627797A

申请日:2013.11.05公布日:2014.03.12

申请人:深圳职业技术学院

发明人:李绍峰;冉治霖;胡健龙;曾辉

摘 要:本发明涉及一种提高水中人源隐孢子虫特异性的方法以及评价水中人源隐孢子虫(Cryptosporidium hominis)活性的方法，该方法利用荧光定量 PCR(quantitative PCR，qPCR)技术并结合叠氮类染色剂叠氮溴化丙锭(propidium monoazide，PMA)评价水中人源隐孢子虫的活性，对添加PMA染料的样品进行强光照射，构建目的基因以及引物，并进行qPCR反应，检测具有活性的人源隐孢子虫。该方法提高了检测的灵敏度和特异性，简化了操作步骤，缩短了检测时间，降低了检测成本。

用于检测生物材料的系统和方法

申请号:201310469534.4公布号:CN103627793A

申请日:2013.08.21公布日:2014.03.12

申请人:财团法人工业技术研究院

发明人:陈奕璋;蔡秀娟

摘 要:本发明涉及用于检测生物材料的系统和方法。涉及一种通过采用捕获试剂和探针来鉴别目标生物材料的方法。每种捕获试剂对于一种目标是特异性的。每种探针被设计成辨别目标的类型。捕获试剂和探针均被一种或多种可检测的标记物标记。

一种对二基丙酮菌株的筛选方法

申请号:201310579438.5公布号:CN103627777A

申请日:2013.11.19公布日:2014.03.12

申请人:周懂懂

发明人:周懂懂

摘 要:本发明公开一种对二基丙酮菌株的筛选方法。具体步骤为:首先，从土壤深处选用合适的突然作为菌种的筛选样品，要求所使用的土壤需要保持一定的潮湿度，连续三年土壤上栽种有植物;对土壤培养基进行富集，其中注入酵母浸膏以及秋水仙素，二者的质量百分比为1∶2;高温杀菌，然后调整其pH为弱酸性状态;倒入碳酸钙溶液，然后加入琼脂，使其pH稳定在6.3;使用光电子天平称取其重量，高速离心，然后静置24 h即可。筛选过程中可以使用显色剂，所述显色剂为氢氧化钠溶液;倒入所有溶液的过程中，都需要快速、不间断搅拌。本发明的有益效果是，条件稳定，操作建议，可以用于批量生产，适应工业化需求，纯度较高。

居泉沙雷菌多克隆抗血清、制备方法及其在检测沙门氏菌中的应用

申请号:201310630974.3公布号:CN103626868A

申请日:2013.12.02公布日:2014.03.12

申请人:山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心

发明人:肖西志;孙敏;吴振兴;陈煜;邓明俊;林超;吴信海;房保海;谭乐义;朱来华

摘 要:本发明公开了一种居泉沙雷菌多克隆抗血清及其制备方法以及在检测沙门氏菌中的应用，包括下列步骤:①居泉沙雷菌免疫抗原的制备;②抗原接种;③多克隆抗血清的采集;居泉沙雷菌多克隆抗血清在检测沙门氏菌中的应用包括含有居泉沙雷菌多克隆抗血清的沙门氏菌选择性增菌培养基及其沙门氏菌方法。本发明的多克隆抗血清可降低甚至完全抑制增菌液中居泉沙雷菌的数量，从而消除因居泉沙雷菌的存在而给沙门氏菌的检测带来的干扰，最终提高沙门氏菌分离鉴定的准确性，适用于现行的包括前增菌和选择性增菌步骤的沙门氏菌检测标准。该方法具有操作简单、结果准确可靠等优点。

一种AraC突变体蛋白及其应用

申请号:201210302998.1公布号:CN103626852A

申请日:2012.08.23公布日:2014.03.12

申请人:中国科学院微生物研究所

发明人:蒋培霞;唐双焱

摘 要:本发明公开了一种AraC突变体蛋白及其应用，具体涉及AraC突变体蛋白在高通量筛选合成四氢嘧啶的菌株中的应用。本发明提供的AraC突变体蛋白为序列表的序列3所示的蛋白质。编码所述蛋白质的基因也属于本发明的保护范围。本方法提供的AraC突变体蛋白能够特异性结合四氢嘧啶并受其诱导开启PBAD启动子表达下游报告基因，建立报告基因表达强度和四氢嘧啶浓度之间的对应关系，从而可以通过荧光强度或者颜色反应来筛选高产四氢嘧啶的菌株。本方法为四氢嘧啶高产菌株的筛选提供一种快速高效的高通量筛选方法，将促进四氢嘧啶工业化应用的发展。

一种快速鉴别普通高温放线菌的特异PCR方法

申请号:201310678186.1公布号:CN103614487A

申请日:2013.12.14公布日:2014.03.05

申请人:中国食品发酵工业研究院;山东扳倒井股份有限公司

发明人:程池;赵纪文;姚粟;信春晖;李辉;刘勇;张明娟

摘 要:本发明公开了一种快速鉴别普通高温放线菌的特异PCR方法，其技术方案是以样品基因组DNA为模板，采用本发明设计的特异引物进行PCR反应，扩增普通高温放线菌特征持家基因，实际扩增片段为733 bp，通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，鉴别样品是否为普通高温放线菌。本发明可快速识别普通高温放线菌，只需DNA提取、PCR扩增和电泳检测三步即可完成鉴别，具有高效、灵敏、便捷及成本低廉等显著优点。