目平外睾吸虫——疑似新种的发现与鉴定

姜 谧，郭 跃

外睾类吸虫(Exorchisspp.)属于隐殖科(Cryptogonimidae)、外睾亚科(Exorchiinae)。本亚科吸虫以睾丸位于两肠支外侧而有别于其他亚科，是寄生于淡水鱼肠道的一类小型吸虫[1]。迄今为止，已报道的外睾类吸虫种类有卵形外睾吸虫(ExorchisoviformisKobayashi，1915)[2]、多卵黄外睾吸虫(ExorchismultivitellarisPan，1984)[3]、叶巢外睾吸虫(Exorchisovariolobularis Cao，1990)[4]和洞庭湖外睾吸虫(ExorchisdongtinghuensisZhang et al，1993)[5]。唐崇惕等(2009a，2009b，2010)[6-8]用在湖南汉寿县目平湖区所获得的外睾类吸虫虫卵饲食钉螺, 实验钉螺切片镜检结果显示96.38%螺体有血淋巴细胞增生现象。其情况与叶巢外睾吸虫感染湖北钉螺和窄口螺所表现的情况相同, 但叶巢外睾吸虫所引发螺体血淋巴细胞反应会更强烈些。除此以外还发现实验螺有大量增加体液分泌物情况；钉螺感染该外睾吸虫后不同时间段分别再感染日本血吸虫毛蚴，2～82 d对实验螺作切片观察, 发现后入侵的血吸虫幼虫全部受到攻击而发育异常并死亡： 双重感染外睾吸虫和血吸虫的实验钉螺, 在感染血吸虫后时间越长虫体受害越重；而且随着时间的推移血吸虫的虫数随之减少，说明该外睾类吸虫具控制血吸虫功能。经比较，该外睾类吸虫的形态结构与已报道的洞庭湖外睾吸虫和叶巢外睾吸虫有明显区别，特对其形态和生活史详细的观察研究。

1 材料与方法

1.1材料 鲶鱼均采自湖南省常德市汉寿县目平湖，经定种为鲶鱼Parasilurusasotus。饲养于去氯水的水桶中，水泵通气，并放入适量冰块以保持低水温。

第一中间宿主湖北钉螺(Oncomelaniahupensis)采集自湖南省常德市汉寿县目平湖羊咯洲，湖北钉螺置平皿水中逸尾蚴，发现外睾类吸虫阳性钉螺单独饲养。

实验所用第二中间宿主为金鱼(Carassiusauratus)，购自厦门大学路观赏鱼之家。所选金鱼个体大小为6～8 cm，体型正常，健康状况良好。实验用鱼的饲养环境通过加热棒控制控制，均维持水温在25℃左右。

1.2方法 剖检鲶鱼，用0.6%生理盐水进行冲洗鲶鱼消化道，收集成虫及童虫并清洗干净。

单只外睾类吸虫阳性钉螺定期于25 ℃，光照条件下逸尾蚴并计数，感染第二中间宿主，感染以后的实验鱼定期或一发现将死即解剖检查，以获得外睾类吸虫的囊蚴或后蚴。

将上述单只外睾类吸虫阳性钉螺压碎，以获得该钉螺内的外睾类吸虫幼虫期虫体。

上述获得的外睾类吸虫的成虫、童虫、钉螺内的幼虫期虫体、囊蚴和后蚴均在剖检收集保存，显微镜观察并用生物描绘器绘图，文中测量单位为mm。

2 结 果

2.1虫种鉴定 目平湖外睾吸虫Exorchismupingensissp. nov., 2011 见图1之1.1、1.2和1.3。

终末宿主：鲶鱼Parasilurusasotus

寄生部位：胃幽门与肠道交界处

发现地点：湖南省常德市汉寿县目平湖

模式标本存放处：厦门大学生命科学学院寄生动物研究室。

虫体描述：虫体梨形、瓜子形及椭圆形，前端稍突出，后端钝圆，平均长宽比：1.53～1.78。体表有小棘，咽两侧各有一个眼点色素。虫体大小为：(0.342～0.908)mm×(0.260～0.532)mm，口吸盘在顶端，(0.078～0.142)mm× (0.072～0.142)mm，咽紧接在口吸盘后(0.036～0.084)mm×(0.028～0.072)mm。食道极短0.002～0.016 mm，两肠支到达虫体末端处。腹吸盘在体前1/3～2/5部位，大小为(0.042～0.105)mm×(0.046～0.107)mm。卵巢(0.041～0.140)mm×(0.040～0.189)mm，分叶小。阴茎囊缺，储精囊大，分为前后两个部分，前储精囊(0.067～0.135)mm×(0.052～0.149)mm，后储精囊(0.056～0.189)mm×(0.040～0.188)mm，生殖孔开口于腹吸盘前。两侧睾丸(0.113～0.202)mm×(0.069～0.167)mm及(0.106～0.208)mm×(0.081～0.163)mm，位于腹吸盘水平位置，体中位线前，在两睾丸的上顶端分别引出一条弯曲的输精管，向体内侧下方延伸，到后储精囊的后1/3或1/4部分水平处汇合成一短总管通入后储精囊。受精囊为一大的圆囊，位于后储精囊的后方，大小为(0.033～0.098)mm×(0.029～0.092)mm，从囊前端引出一条向前直伸的小管，于卵模附近稍为折弯或直接通入其附近的输卵管中。卵黄腺两侧分为多条纵向长条，从体前端延伸到体后端。卵黄横管两端各联于两侧卵黄腺的基部(位于二睾丸上部内侧)，在卵巢附近汇合成卵黄总管，在受精囊管与卵模之间通入输卵管。子宫盘曲在体后部，其末端上行与储精囊的输精管一起开口于腹吸盘前方的生殖孔。成熟成虫体后部子宫内充满虫卵，虫卵大小为(0.019～0.027)mm×(0.012～0.019)mm。排泄囊为不典型V形(即包括V形和倒三角形短主干Y形)。

2.2生活史

2.2.1童虫：见图1之1.4、1.5和1.6。

同成虫一起检获于鲶鱼的胃幽门与肠道交界处，体梨形、瓜子形及椭圆形，大小为(0.308～0.579)mm×(0.212～0.474)mm，平均长宽比：1.35～1.81。口吸盘在顶端，(0.081～0.140)mm×(0.071～0.148)mm，咽紧接在口吸盘后(0.038～0.089)mm×(0.029～0.068)mm。食道极短0.002～0.014 mm，两肠支到达虫体末端处。腹吸盘在体前1/3～2/5部位，大小为(0.069～0.087)mm×(0.067～0.096)mm。卵巢(0.051～0.112)mm×(0.047～0.135)mm，分叶小。阴茎囊缺，储精囊大，分为前后两个部分，前储精囊(0.042～0.152)mm×(0.040～0.131)mm，后储精囊(0.052～0.135)mm×(0.040～0.100)mm，生殖孔开口于腹吸盘前。两侧睾丸(0.075～0.180)mm×(0.058～0.128)mm及(0.075～0.194)mm×(0.060～0.128)mm，位于腹吸盘水平位置，体中位线前，在两睾丸的上顶端分别引出一条弯曲的输精管，向体内侧下方延伸，到后储精囊的后1/3或1/4部分水平处汇合成一短总管通入后储精囊。受精囊为一大的圆囊，位于后储精囊的后方，但相对于成虫来说较小且囊内为空，无活跃的精子，大小为(0.027～0.077)mm×(0.028～0.065)mm，从囊前端引出一条向前直伸的小管，于卵模附近稍为折弯或直接通入其附近的输卵管中。卵黄腺未见。排泄囊也和成虫一样为不典型V形。

2.2.2雷蚴 图1.7。成熟雷蚴位于钉螺消化腺和生殖腺内，呈腊肠型，无领围，大小为(0.325～1.025) mm×(0.094～0.279) mm。球形的咽大小为(0.017～0.038)mm×(0.015～0.038)mm，其后部有一短小的肠管，大小为(0.009～0.029)mm×(0.007～0.025)mm。生产孔靠近咽部，为肌质性，产孔直径平均0.019 mm，生产道平均长0.026 mm。 产道壁上有细胞结构。雷蚴体内体内含有10到30个不同发育阶段的尾蚴胚体。

图1目平外睾吸虫新种的发现与鉴定之一

Fig.1DiscoveryandidentificationofExorchismupingensissp.nov.—Ⅰ

1.1目平外睾吸虫新种梨形成虫(The pear-shaped adult ofExorchismupingensissp. nov., scale bar=0.1 mm)；

1.2目平外睾吸虫新种的瓜子形成虫(The equsi-shaped adult ofExorchismupingensissp. nov. scale bar=0.1 mm)；

1.3目平外睾吸虫早期成虫椭圆形个体(The oval early stage adult ofExorchismupingensissp. nov., scale bar=0.1 mm)；

1.4目平外睾吸虫新种梨形童虫(The pear-shaped adolescaria ofExorchismupingensissp. nov., scale bar=0.1 mm)；

1.5目平外睾吸虫新种的瓜子形童虫(The equsi-shaped adolescaria ofExorchismupingensissp. nov., scale bar=0.1 mm)；

1.6目平外睾吸虫新种椭圆形童虫。(The oval adolescaria ofExorchismupingensissp. nov., scale bar=0.1 mm)；

1.7目平外睾吸虫新种成熟雷蚴，具比咽小的肠囊(The redia ofExorchismupingensissp. nov. with smaller intestinal cyst than the pharynx, scale bar=0.1 mm)；

1.8目平外睾吸虫新种早期尾蚴胚体(The early stage immature cercaria ofExorchismupingensissp. nov, scale bar=0.1 mm)；

1.9目平外睾吸虫新种尾蚴胚体(The immature cercaria ofExorchismupingensissp. nov., scale bar=0.1 mm)；

1.10目平外睾吸虫新种尾蚴(The early stage cercaria ofExorchismupingensissp. nov., scale bar=0.1 mm)。

表1 目平外睾吸虫新种与本属其它种主要特征的比较

2.2.3尾蚴 图1.8、1.9和1.10 由胚球形成的尾蚴胚体，体部中有口吸盘雏形, 数个穿刺腺的细胞体及在腺管和排泄囊部位出现有规则排列的颗粒。

尾部较长的未成熟尾蚴, 体内显现各器官雏形，体前端两眼点及尾部排泄管的结构也已显明，穿刺腺细胞可见到7对。

成熟尾蚴有两个眼点，为具有尾鳍膜的单尾尾蚴，尾蚴体部大小为(0.128～0.221)mm× (0.091～0.164)mm，尾部大小为(0.256～0.406 )mm× (0.033～0.050)mm，尾鳍膜厚度0.015 mm～0.021 mm，体部前端有微小的棘，体两侧后部有感觉毛10根。口吸盘直径0.025 mm～0.038 mm，两个棕黑色的眼点位于口吸盘的两侧，腹吸盘位于排泄囊前方，略小于口吸盘，直径0.025 mm～0.038 mm，较不明显。7对穿刺腺细胞位于腹吸盘前方两侧，腺管两束在眼点之间向前延伸，至口吸盘后缘时又分为两小束，内束四条管，外束三条管，继续前行终止于口吸盘北缘。排泄囊为圆形，直径0.015 mm～0.023 mm，排泄管具有很厚的囊壁细胞，长度为0.046 mm～0.062 mm，排泄孔开口于近尾基部，排泄管在尾部约尾长前方1/5.8处分叉。生殖原基细胞位于腹吸盘之下，排泄囊之上。

2.2.4囊蚴和后蚴(图2.1至2.8)。

感染后12至24 h解剖金鱼，在其体部，尾鳍，鳃部均发现囊蚴，在显微镜下可见，虫体为一层薄膜所包围，薄膜即为囊壁，此期间囊壁不断增厚，腹吸盘增大变明显，排泄囊上皮细胞肿大。

感染后24至60 h所获得的囊蚴结构与之前的基本相同，区别在于排泄囊中的圆形棕黑色颗粒越来越多。

感染后3到7 d获得的囊蚴可见两个黑色眼点，虫体两侧有两个睾丸，口吸盘明显，在口吸盘下紧接一个咽，但这些结构均处于初步发育阶段，有些不明显。感染4 d以后可见咽下接一分叉的肠管(食道极短)，直到虫体的后端。在本吸虫的囊蚴发育期，排泄囊的形状呈V形、倒三角形末端稍伸长短主干Y形及倒三角形短主干Y形，囊内充满圆形的棕黑色颗粒。至第9d可见储精囊内充满活跃的精子，储精囊体积开始明显增大。

感染后18到25 d，后蚴两侧睾丸更加明显，同时可见卵巢、储精囊、受精囊，排泄囊呈不典型V型。20到25 d的后蚴已经具备上述本吸虫童虫的全部结构，大小为(0.154～0.253)mm×(0.139～0.234)mm。口吸盘(0.021～0.029)mm×(0.031～0.040)mm , 咽(0.016～0.030)mm×(0.011～0.025)mm, 食道长0.004 mm～0.005 mm, 肠管延伸到体后端。腹吸盘(0.025～0.026)mm×(0.022～0.031)mm。左睾丸(0.043-0.061)mm×(0.027～0.042)mm，右睾丸(0.040～0.047)mm×(0.0276～0.045)mm。卵巢分叶少，大小为(0.023～0.043)mm×(0.029～0.033)mm。储精囊呈葫芦状，下部(0.038～0.046)mm×(0.028～0.044)mm，上部(0.025～0.040)mm×(0.019～0.033)mm。受精囊大小为(0.016～0.030)mm×(0.023～0.044)mm，内部无精子，位于储精囊的后方，从受精囊的前端引出一细管，通到卵模前方的输卵管上。

图2目平外睾吸虫新种的发现与鉴定之二

Fig.2DiscoveryandidentificationofExorchismupingensissp.nov.—Ⅱ

2.1目平外睾吸虫新种囊蚴，感染后24 h囊蚴，排泄囊V形(Metacercaria ofExorchismupingensissp. nov. with v-shaped excretory bladder, 24 hours after infection , scale bar=0.05 mm)；

2.2目平外睾吸虫新种囊蚴，感染后48 h囊蚴，排泄囊V形(Metacercaria ofExorchismupingensissp. nov. with v-shaped excretory bladder, 48 hours after infection , scale bar=0.05 mm)；

2.3目平外睾吸虫新种囊蚴，感染后60 h囊蚴，排泄囊2支干细长，主干倒三角形(Metacercaria ofExorchismupingensissp. nov., for 60 hours after infection, the excretory bladder was provided with two long and thin branches and a inverted triangle main trunk., scale bar=0.05 mm)；

2.4目平外睾吸虫新种囊蚴，感染后4 d(Metacercaria ofExorchismupingensissp. nov., 4 days after infection , scale bar=0.05 mm)；

2.5目平外睾吸虫新种后蚴，感染后9 d(Excysted metacercaria ofExorchismupingensissp. nov., 9 days after infection , scale bar=0.1 mm)；

2.6目平外睾吸虫新种后蚴，感染后18 d(Excysted metacercaria ofExorchismupingensissp. nov., 18 days after infection , scale bar=0.1 mm)；

2.7目平外睾吸虫新种后蚴，感染后25 d(Excysted metacercaria ofExorchismupingensissp. nov., 25 days after infection , scale bar=0.1 mm)；

2.8目平外睾吸虫新种后蚴，感染后41 d(Excysted metacercaria ofExorchismupingensissp. nov., 41 days after infection , scale bar=0.1 mm)；

感染后30到41 d，后蚴大小为(0.124～0.198)mm×( 0.152～0.178)mm，体内主要结构相同，口吸盘(0.021～0.037)mm×(0.022～0.038)mm，咽(0.008～0.024)mm×( 0.011～0.013)mm，食道长0.001mm～0.002mm，肠管延伸到体后端。腹吸盘(0.016～0032)mm× (0.015～0.028)mm。左睾丸(0.032～0.061)mm× (0.021～0.041)mm，右睾丸(0.029～0.061)mm× (0.017～0.023)mm。卵巢分叶少，大小为(0.018～0.033)mm×(0.019～0.024)mm。储精囊呈葫芦状，下部(0.015～0.035)mm× (0.013～0.025)mm，上部(0.013～0.022)mm× (0.010～0.023)mm。受精囊大小为(0.010～0.021)mm× (0.004～0.020)mm，内部始终为空，且子宫中内未见虫卵。

3 讨 论

动物学者认为排泄系统构造的变化受外界影响较小，其形态构造的不同可作亲缘上区别的重要标志[1]。外睾吸虫到目前有4种，它们的排泄囊构造有显著的差异：卵形外睾吸虫和多卵黄外睾吸虫的排泄囊均为V形；叶巢外睾吸虫的排泄囊为主干宽长的Y形；洞庭湖外睾吸虫成熟后蚴，尤其童虫和成虫的排泄囊二支干呈椭圆形又叶状，主干缩小成小球状或小管状。而本吸虫的排泄囊在童虫和成虫均为不典型的V形，即包括V形和倒三角形短主干Y形。此外，本吸虫在成虫和幼虫期与已经报道的外睾吸虫还存在诸多明显的差异见表1，故鉴定为新种，命名为目平外睾吸虫Exorchismupingensissp. nov., 2011。

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