老年性上睑下垂患者眼轮匝肌组织中Elastin、MMP-9、MMP-12的表达变化及意义

2014-04-05 23:49庞润晖张宏斌段国琴
山东医药 2014年11期
关键词:睑下垂眼轮眼睑

庞润晖,白 萍,苗 杰,王 娟,张宏斌,段国琴

(1邢台市眼科医院,河北省眼病治疗中心,河北省眼科学重点实验室,河北邢台054001; 2邢台市人民医院;3宁晋县中西医结合医院)

老年性上睑下垂是常见的老年性眼睑退行性病变,临床表现为上睑皮肤下垂,遮盖瞳孔、额部皱纹加重、眉毛上移、上睑皮肤牵拉延长等[1,2]。关于老年性上睑下垂的形成机理,考虑可能为皮肤松驰、弹性减退、提上睑肌乏力及Muller氏肌渐趋萎缩乏力综合因素所致[3]。国外研究[4]表明,在上睑折叠区,Muller氏肌键、提上睑肌腱膜、睑板前眼轮匝肌和联合筋膜内有大量的弹性纤维表达,而弹性纤维是由弹性蛋白(Elastin)构成,基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-12能有效降解弹性蛋白和细胞外基质。2011年6月~2013年6月,我们检测了30例老年性上睑下垂眼轮匝肌组织中Elastin、MMP-9、MMP-12,观察其表达变化,并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择我院收治的老年性上睑下垂患者30例(观察组),男11例,女19例;年龄50~72岁,平均61岁;提上睑肌肌力0~4 mm 5例,4~8 mm 12例,8~12 mm 13例;另选30例单睑行重睑手术患者作为对照组,男5例,女25例;年龄18~35岁,平均22岁,提上睑肌肌力正常。两组一般资料无统计学差异,具有可比性。

1.2 Elastin、MMP-9、MMP-12的检测方法 将术中切除的睑板前眼轮匝肌组织用10%甲醛溶液固定,经常规组织脱水、透明石蜡浸泡与包埋备用。4μm厚石蜡切片,60℃烘片30 min,二甲苯脱蜡15 min ×3次,梯度乙醇水化。切片于3%H2O2溶液中浸泡30 min,以灭活内源性过氧化物酶。后置于乘有枸椽酸盐抗原修复液的电热式压力蒸汽灭菌器中,高压修复20 min,室温下冷却,PBS洗5 min×3次。滴加10%正常山羊血清,湿盒内作用30 min,中和非特异性抗原。再滴加经预试验确定的浓度(1∶200)兔抗人Elastin、MMP-9、MMP-12单克隆抗体(武汉博士德公司),置湿盒内作用60 min后4℃过夜,PBS缓冲液洗5 min×3次;滴加生物素化羊抗兔lgG二抗(1∶100)作用30 min,PBS缓冲液洗5 min×3次。滴加新鲜配置的DAB显色液,显色5~15 min,流水洗涤。苏木素复染,乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,光学显微镜下观察。用已知阳性切片作为阳性对照,PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。Elastin、MMP-9、MMP-12在眼轮匝肌的染色均为胞质着色,以棕黄色或淡黄色定性为阳性。用MPIAS-1000真彩色病理图像分析系统(北京航空航天大学图像中心)测定1 000个细胞中阳性细胞数,取其平均值。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。采用t检验。随机统计1 000个肌纤维细胞中免疫组化染色阳性细胞总数,实验数据经Kolmogorov-Smirnov检验证实呈正态分布,均以±s表示,各组样本均数经Levene检验方差齐性。以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

观察组Elastin、MMP-9、MMP-12阳性细胞数分别为(210.12±46.76)、(345.12±58.23)、(365.54 ±30.28)个,对照组分别为(460.34±5.21)、(153.32±21.45)、(126.27±16.31)个,两组比较P均<0.05。

3 讨论

随着我国老龄人口的增加,老年性上睑下垂的发病呈逐渐上升趋势,据统计其发病率约占老年人口的11.5%,患者出现睑裂变形、变窄,向前注视比较困难,常出现仰视征象,给老年人带来许多不便[5]。关于老年性上睑下垂的发病机理,目前观点不一[6,7]。有人认为,由于年龄的增长,部分老年人的提上睑肌肌肉供血不足,肌纤维渐趋萎缩,力量降低,从而出现了上睑下垂;也有人认为,老年性上睑下垂是由于皮肤松驰、弹性减退及Muller肌渐趋萎缩乏力综合因素所致。刘瑞华等[8]观察了20例老年性上睑下垂患者眼睑皮肤,发现皮肤角质层变薄、扁平,基底细胞排列散乱、大小不一,眼睑皮肤胶原纤维数量和质量均下降。

Elastin是一种细胞外基质蛋白,主要由成纤维细胞产生,在体内与微原纤维结合形成弹性纤维。弹性蛋白的下降代表弹性纤维的减少,而体内有多种物质能够分解弹性蛋白,如MMP和丝氨酸蛋白酶。MMP-9、MMP-12均是基质金属蛋白酶家族中的新成员,其能有效降解弹性蛋白和细胞外基质,而且是对抗弹力纤维的最活跃的MMP[9,10]。这三种因子均可在眼睑皮肤及眼轮匝肌组织表达,根据它们之间的不平衡表达可推测出眼睑松弛的发病机理[11]。本研究显示,与对照组比较,观察组Elastin阳性细胞数减少,MMP-9、MMP-12阳性细胞数增加,推测老年性上睑下垂肌肉松弛的发病机理与弹性蛋白含量下降有关,弹性蛋白的下降导致弹性纤维含量的减少,而弹性蛋白降解酶的增加又进一步促进弹性蛋白的降解。这与以往对皮肤松弛的研究结果是一致的,皮肤弹性蛋白的含量随着年龄的增长、紫外线的照射,成纤维细胞逐渐减少,胶原纤维和弹力纤维逐渐排列紊乱、变性、扭曲,引起皱纹、松弛及下垂等皮肤衰老表现[12,13]。从我们的实验研究可以看出,这些改变不仅是皮肤衰老的结果,也将进一步促进眼轮匝肌的松弛,甚至提上睑肌的松弛。

近十余年不断有细胞抗皮肤衰老报道,如注射成纤维细胞或移植表皮干细胞等[14,15];但因其维持时间短或取材困难等而受限。金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)是MMP的抑制剂,可以抑制其对胶原的降解作用,若能在此环节加以干预调节,抑制MMP的过度表达,或者利用MMP-TIMP之间的动态平衡解决衰老的问题,可在一定程度上抑制或者延缓眼睑皮肤及眼轮匝肌的松弛进程。尽管老年性上睑下垂的手术方法已经成熟,但因各个地方的医生水平良莠不一,相当一部分老年人对手术有恐惧的心理,根据我们的研究结果,如果能研制出对抗弹性蛋白下降或提高MMP水平的药物进行皮肤层及眼轮匝肌层的注射治疗,从基础学方面延缓皮肤及肌肉的老年性改变,相信会给广大的老年患者带来福音。

总之,老年性上睑下垂眼轮匝肌组织Elastin表达下降,MMP-9、MMP-12表达上升,其发病机理可能与上述指标变化有关。

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