Livin与caspase-3蛋白在胃腺癌组织中的表达及临床意义

王亚东，杨留才

(1.阜宁县人民医院普外科，江苏 阜宁 224400； 2.盐城卫生职业技术学院，江苏 盐城 224005)

胃癌是我国最常见的消化系统恶性肿瘤，其主要的病理类型是胃腺癌，其发病率仅次于肺癌居所有恶性肿瘤的第二位。最近的研究表明，胃癌的发病率逐年上升，对人们的生命健康造成了很大的威胁[1]。研究显示,胃癌患者的组织学类型、病理分化、转移等临床指标与肿瘤组织中不同基因的表达密切相关,对胃癌患者预后地评估具有很大的临床参考价值[2]。其中，生存蛋白(livin)是凋亡抑制蛋白家族成员之一，主要在乳腺癌[3]、食管癌[4]等实体肿瘤中高表达，通过抑制胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-9等凋亡因子的活性来发挥其阻断细胞凋亡过程的生理功能[5]。Caspase-3是caspase家族中最重要的凋亡执行者，其主要的功能是负责水解大量底物蛋白[6]。同时caspase-3也是细胞凋亡通路下游最重要的效应分子，凋亡通路一旦激活就会引起caspase-3级联反应并使其活化，最终引起细胞凋亡[7]。本研究通过免疫组织化学染色的方法研究livin与caspase-3在胃腺癌癌组织中的表达情况，并且探讨两者在胃腺癌的临床诊断和预后中的意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2010年1月至2012年6月在阜宁县人民医院普外科就诊进行手术治疗，并且经过病理诊断确诊为胃癌的蜡块标本114例作为胃癌组，其中男68例、女46例，年龄39～74(47.2±6.6)岁；按照年龄进行分类，年龄<60岁者71例，年龄≥60岁者43例；按照国际抗癌联盟临床分期标准对胃癌患者进行分期，Ⅰ期23例，Ⅱ期27例，Ⅲ期36例，Ⅳ期28例；病理诊断为高分化27例，中分化47例，低分化30例，未分化10例；术后病理诊断确认有淋巴结转移71例，无淋巴结转移43例，所有胃癌患者在进行手术之前均未经过化疗等治疗措施。标本均采用4%多聚甲醛进行固定，常规石蜡包埋切片，切片厚度为5 μm。另外，取病理诊断为正常胃黏膜的蜡块标本46例作为对照组，标本来自于胃溃疡切除术或者十二指肠切除术的患者，均通过病理诊断排除了高度不典型增生，其中男31例、女15例，年龄36～76(46.9±6.5)岁。胃癌组和对照组的性别、年龄等一般资料具有均衡性。

1.2免疫组织化学染色方法 石蜡切片使用梯度乙醇脱蜡水化，微波抗原修复5 min，3%过氧化氢孵育10 min去除内源性过氧化物酶，加兔抗人livin一抗(1∶100,美国Santa Cruz公司)和兔抗人caspase-3一抗(1∶200,美国Santa Cruz公司)，室温过夜，pH 7.4的磷酸盐缓冲液清洗，加生物素标记的羊抗兔IgG二抗(1∶100，美国Sigma公司)室温孵育40 min；磷酸盐缓冲液清洗，DAB底物液(中国迈新公司)显色20 min，苏木精复染30 min，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察摄片。

1.3染色结果判断标准 Livin和caspase-3均定位于胞质中，以胞质中出现棕黄色颗粒为阳性细胞标志。在高倍镜下随机选取10个视野，根据阳性细胞在全部组织细胞中所占比例判定实验结果，阳性细胞比例<5%判断为(-)，阳性细胞比例≥5%判断为(±)[5,7]。

1.4统计学方法 应用SPSS 15.0统计软件进行数据分析，计数资料采用χ2检验，相关性采用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1Livin和caspase-3在不同组织中的表达情况 Livin在胃癌组的阳性表达率高于对照组(χ2=66.74，P<0.05)；caspase-3在胃癌组的阳性表达率低于对照组(χ2=68.01，P<0.05)(表1)。

表1 Livin和caspase-3在不同组织中的表达情况

2.2Livin和caspase-3在胃腺癌组织中表达以及与临床、病理指标的关系 不同性别、年龄的livin和caspase-3阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)；不同临床分期、组织分化、肿瘤浸润深度以及淋巴转移与否的livin和caspase-3阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表2 Livin和caspase-3在胃腺癌癌组织中表达以及与临床、病理指标的关系 (例)

2.3Livin和caspase-3在胃腺癌癌组织表达的相关性 在胃腺癌组织中，livin和caspase-3阳性表达率分别为77.19%和15.79%，Spearman等级相关检验分析结果显示：两者在胃腺癌组织中的表达呈负相关(rs=-0.56，P<0.05)(表3)。

表3 Livin和caspase-3在宫颈鳞癌组织表达的相关性 (例)

3 讨 论

目前的研究表明，致癌因子引发的细胞增殖和凋亡的失衡与恶性肿瘤的发生、发展有密切关系[8]，其中caspase家族蛋白[9]、Bcl-2家族蛋白[10]和p53[11]等细胞因子在凋亡的信号转导中均发挥重要的生理功能。本研究结果显示，livin在胃癌组的阳性表达率高于对照组(P<0.05),且其与临床分期、病理分级、浸润深度、淋巴结转移均显著相关(P<0.05)。本研究结果和Liang等[12]的研究结果一致。

Caspase是一组存在于细胞质中的半胱氨酸蛋白酶，在细胞凋亡中发挥着关键作用。其中caspase-3是caspase家族中最重要的细胞因子，其主要功能是负责水解全部或部分负责大量底物[6]。凋亡通路激活caspase-9，caspase-9引起caspase-3活化，并且发生级联反应，引发细胞凋亡[7]。本研究结果显示，caspase-3在胃腺癌组织中的阳性率较正常胃黏膜组织低，通过对胃腺癌患者的临床和病例指标分析发现，caspase-3在胃腺癌组织中的阳性表达率和临床分期、病理分级、浸润深度和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。本研究结果与卵巢癌[13]、乳腺癌[14]患者的研究结果基本相同。

此外，本研究结果还显示，livin与caspase-3在胃腺癌癌中的阳性表达率呈负相关，提示livin可能通过影响caspase-3的表达水平来抑制胃腺癌细胞的凋亡。目前的研究认为，livin调节凋亡主要通过以下两种途径：①livin直接下调caspase-3的表达水平，抑制死亡受体途径来减少凋亡；②livin通过与caspase-9结合，使caspase-9失活，从而间接降低caspase-3的活性，抑制线粒体途径来减少凋亡[15]。

综上所述，livin与caspase-3在胃腺癌癌组织表达水平呈负相关，并且均与临床分期、病理分级以及淋巴结转移有关。这提示livin可能通过抑制细胞凋亡来促进胃腺癌的发生、发展。

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