2009-2011年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病禽流感监测情况

黄建龙，王昌建 ，邓国华，谭 丹,，范仲鑫，何世成，朱春霞，汪洪冰，刘道新

禽流感是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的一种禽类(家禽和野禽)传染病，迄今为止，共有16种HA(H1-H16)亚型和9种NA(N1-N9)亚型被鉴定，根据禽流感病毒致病性和毒力的不同，将禽流感分为高致病性、低致病性和非致病性禽流感。高致病性禽流感的危害很大，大家对其高度关注，但近年来不断有国家和地区有低致病性禽流感疫情的报道[1-6]，其流行和传播呈上升趋势。很多报道显示H9亚型禽流感是影响我国养禽业的主要禽流感病毒亚型，且对禽的危害越来越严重，除引起上呼吸道感染、产蛋量严重下降外，个别毒株可引发较大的死亡。近年来我国南方地区和香港均出现了人感染H9N2亚型AIV的病例[7]。有报道称H6亚型禽流感病毒不仅可以向H5亚型高致病性禽流感病毒和H9N2亚型禽流感病毒提供内部基因片段，而且还可以感染鼠、水貂和人[8-9]。

为了加强活禽经营市场管理，规范活禽经营行为，为了解环洞庭湖地区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况，从而有效预防和控制禽流感，保护人体健康和公共卫生安全。2009-2011年冬春季节，我们对环洞庭湖活禽批发市场家禽进行低致病性禽流感监测，为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据。

1 材料与方法

1.1样品采集 按随机抽样的方法,每年的冬季和春季到每个市场抽取10个经营户，每户采10对咽喉拭子和泄殖腔拭子，采样时详细记录家禽产地、日龄、采样数量等信息。

1.2主要试剂 Taq DNA聚合酶、dNTPs和分子量Marker均购自宝生物工程(大连)有限公司；反转录酶、LS TRIzol RNA提取试剂购自Invitrogen公司。

1.3鸡胚 SPF鸡胚购自哈尔滨兽医研究所实验动物中心。

1.4病原分离和鉴定 拭子样品1 000 r/min离心5 min，吸取上清液，以每胚0.2 mL的注射剂量由尿囊腔接种9～10 d龄SPF鸡胚，每个样品接种2～3枚SPF鸡胚，37 ℃孵育，每天观察2次，弃去24 h内死亡的鸡胚，及时收集之后死亡鸡胚，至96 h收集所有鸡胚，置于4 ℃过夜，收获鸡胚尿囊液，用血凝试验(HA)测定，阴性者再盲传1代，如果HA认为阴性，则终定为阴性样品。对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI)和RT-PCT方法相结合鉴定病毒的亚型。

2 结 果

2.1总体检测情况 2009-2011年，对环洞庭湖区主要活禽批发市场禽流感进行监测，共采集2 819对拭子，经病原分离和鉴定发现，有627对拭子为低致病性禽流感阳性拭子，总的分离率为22.2%，其中鸭拭子低致病性禽流感的分离率最高为24.6%，其次是鸡拭子，达21.5%，鹅拭子为11%，见表1。

表1 总体检测结果

2.2各个活禽批发市场低致病性禽流感分离率 在所监测的5家活禽批发市场中都检出阳性样品,其中益阳市学门口市场、长沙市石马家禽批发市场和岳阳市枫桥胡蛋禽批发市场低致病性禽流感分离率较高，分别为27.4%、27.3%和23.0%。

2.3不同HA亚型低致病性禽流感分离率 3年的持续监测过程中，在活禽批发市场的禽拭子中分离出了6种亚型的低致病性禽流感病毒，有H3亚型、H4亚型、H6亚型、H9亚型、H10亚型和H11亚型。其中H9亚型、H6亚型和H4亚型比较高，其分离率分别可达到11%、6.3%和3.4%。

2.4活禽批发市场低致病性禽流感隐性带毒种群分布情况 在对所采集的鸡、鸭、鹅拭子中都检测到禽流感病毒。在鸭拭子中可以分离到有H3、H4、H6、H9、H10和H11等6种亚型的低病性禽流感病毒，并且AIV H6亚型隐性带毒率最高，达到10.2%。在鸡拭子中可以分离到有H3、H4、H6和H9型等4种低病性禽流感病毒，其AIV H9亚型隐性带毒率最高，达到15.1%。在鹅拭子中可以分离到有H4、H6和H9等3种亚型低病性禽流感病毒，见图1。

图1活禽批发市场中鸡、鸭、鹅不同HA亚型低致病性禽流感分离率

Fig.1PositiverateofdifferentHAsubtypesoflowpathogenicavianinfluenzainchickens,ducksandgeeseinlivepoultrywholesalemarket

3 讨 论

这3年的持续监测过程中，每年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒分离率都不低。并在所监测的5家活禽批发市场中都分离到低致病性禽流感病毒，分离出有H3、H4、H6、H9、H10型和H11等6种亚型的禽流感病毒。表明在活禽批发市场中低致病性禽流感隐性带毒的情况普遍存在，活禽批发市场发生禽流感疫情的威胁比较大。目前，我们市场的禽流感检疫水平不是很高，这就需要我们加强对活禽批发市场中家禽特别是水禽的病原学监测和家禽的抗体水平监测。

水禽特别是家鸭是禽流感病毒的储存库和传染源，由于家鸭经常同时被多个亚型的禽流感病毒混合感染，这为各亚型的基因重组提供了很好的载体，禽流感病毒在水禽与陆禽间传播，可加快表面蛋白的变异，不断丰富内部基因的重配，并加速了种间传播的机会[10-11]。因此，其在流感病毒的进化和生态分布的重要地位已经得到广泛认可。在对洞庭湖区活禽批发市场所采集的鸡、鸭、鹅拭子检测中发现，鸭拭子低致病性禽流感的分离率最高，达到24.6%，并且在鸭拭子中可以检测到的低致病性禽流感病毒亚型最多，有H3、H4、H6、H9、H10和H11等6种亚型。通过问卷调查发现省内低致病性禽流感隐性带毒鸭拭子主要来源于长沙、益阳、岳阳和常德，表明洞庭湖区的水禽低致病性禽流感隐形带毒是很高的，从而较大地威胁该地区发生禽流感疫情。因此，必须尽量防止野生水禽、家养水禽及其它野鸟与陆禽间的相互接触，在市场禽流感的防控方面，水禽和其它禽类应分别建立市场，独立经营。

在鸡拭子中可以检测到有5种亚型低致病性禽流感病毒，这说明鸡低致病性禽流感隐性带毒也是很严重的。根据我们的调查和分析，活禽批发市场上的鸡低致病性禽流感隐性带毒如此之高，原因可能有以下2个方面：第一，市场上的淘汰蛋鸡比较多，蛋鸡感染H9亚型的几率比较大，有些养殖场的鸡可能感染了H9亚型禽流感导致产蛋下降而紧急淘汰这部分蛋鸡；第二，有些鸡可能来源于运输过程中的感染或市场内阳性带毒鸭把病毒传播给鸡的。有专家预测H9N2亚型禽流感病毒可能成为毒力较强的毒株，成为下次流感大流行的亚型[12]。

本次监测中，鹅拭子的监测数量不是很多，但是在鹅拭子中检测到有H4、H6和H9等3种亚型低病性禽流感病毒，说明鹅在流感病毒的进化和生态分布的作用同样不可忽视，须继续加强和重视对各种家禽禽流感的监测。

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