河南省信阳市动物中新布尼亚病毒感染情况调查

杜燕华，黄学勇，王海峰，尤爱国，胡小宁，康 锴，许汴利

2010年，我国首次从河南省信阳市一名病人血清中分离出新布尼亚病毒，并证明该病毒是引起发热伴血小板减少综合征的病原体，但目前传染源和传播途径还不清楚。河南省信阳市一直是发热伴血小板减少综合征的主要发病地区，根据流行特征、临床症状及生物学特性研究发现该新发传染病具有虫媒传染病流行传播的特点，并存在动物传染源或/和储存宿主的可能，因而本研究选取河南省主要发病地区信阳市，开展动物中新布尼亚血清抗体的调查，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1标本采集 选择商城县和光山县曾经有病例感染过的地点作为调查点，结合当地地理景观特点以及与人类活动接触密切程度，选择鼠、牛、羊、猪和狗这5种当地广泛存在的动物作为调查对象。鼠采用笼夜法捕获后，用注射器取心脏血，其余动物由兽医配合取全血，分离血清后保存于-20 ℃备用。

1.2核酸提取及荧光RT-PCR检测 取动物血清140 μL，采用QIAamp Viral RNA Mini Kit(Lot 52904)，按试剂盒说明书进行，最终收集50 μL RNA提取液。用新布尼亚病毒RNA检测试剂盒(河南省疾病预防控制中心和与北京华大吉比爱生物技术有限公司联合研制)进行PCR扩增： 50 ℃逆转录30 min；95 ℃预变性3 min；95 ℃变性15 s，60 ℃退火45 s并采集荧光(设置仪器收集FAM荧光信号)，40个循环。检测结果Ct值≤35为阳性；无Ct值为阴性；Ct值在35～40为可疑样品，需重新检测。

1.3血清抗体检测 动物血清用样品稀释液1∶10稀释后，连同阴性、阳性对照加入酶标板中，同时设立空白对照，用发热伴血小板减少综合征(SFTS)布尼亚病毒抗体检测试剂盒(购自无锡鑫连鑫生物医药科技有限公司)，按说明书进行操作。结果需满足阳性对照A值≥1.5;阴性对照A值0.05，若试验数据不符合上述试验有效性标准，则需重复试验。Cutoff值为阴性对照平均A值×2.1，若阴性对照平均A值<0.05，按0.05计算；若阴性对照平均A值≥0.05，按实际A值计算。检测结果≥cutoff值判为阳性，检测结果

1.4资料分析 用SPSS 11．5进行数据统计；采用χ2检验，P<0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1调查点标本采集情况 2012年7-9月在河南省信阳市商城县和光山县2个调查点采集动物血液标本315份，其中鼠血94份(商城县58份，光山县36份)、牛血63份(光山县63份)、羊血59份(商城县59份)、猪血56份(商城县28份，光山县26份)、狗血40份(商城县10份，光山县30份)。

2.2核酸检测结果 将采集到的315份动物血清标本，用新布尼亚病毒RNA检测试剂盒检测，阳性对照和阴性对照均成立，标本检测结果均为阴性。

2.3血清抗体检测结果 将采集到的312份动物血清标本，用双抗原夹心ELISA方法检测新布尼亚病毒总抗体，阳性141份，总体阳性率为45.19%，分别为鼠1.06%(1/94)、牛100.00%(63/63)、羊76.27%(45/59)、猪3.57%(2/56)、狗75.00%(30/40)(见图1)。5种动物(鼠、牛、羊、猪和狗)的新布尼亚病毒总抗体阳性率比较，χ2=226.829，P<0.01，有统计学意义。

图15种动物血清新布尼亚病毒抗体检测结果

Fig.1Detectionofnovelbunyavirusantibodyin5kindsofanimals

3 讨 论

新布尼亚病毒是新发传染病发热伴血小板减少综合征的主要病原体，经基因组进化亲缘关系分析证实属于布尼亚病毒科白蛉病毒属，该病毒基因组由大(L)、中(M)、小(S) 3个单股负链RNA片段组成，电镜观察病毒形态呈球形，直径80～100 nm，形态学上和基因组特征都与布尼亚病毒科病毒相似；而布尼亚病毒科除汉坦病毒外，其余感染人的病毒大多是由虫媒传播的[1]。根据发热伴血小板减少综合征的流行特征、病例临床症状、疾病进程规律、新布尼亚病毒生物学特性以及同科病原如裂谷热病毒、蛉热病毒、克里米亚─刚果出血热病毒等取得研究成果相比较，该新发传染病具有虫媒传染病流行传播的特点[2-3]，并且在河南省信阳市发病地区的蜱、牛虻中也检测并分离到了新布尼亚病毒[4]，在江苏省的牛、羊等动物血清中也有检测到新布尼亚病毒抗体的报道[5]，推断该新发传染可能存在动物传染源或/和储存宿主，本次调查也证实了在我国新布尼亚病毒的主要发病区域河南省信阳市动物中存在病毒抗体。

我国目前河南、湖北、山东、江苏、安徽、浙江、辽宁等省已有发热伴血小板减少综合征病例报道，且越来越多省份和地市也陆续发现了类似病例，已经受到了各级政府和卫生行政部门及社会的广泛关注，2010年9月8日，国内媒体报道河南省信阳市商城县“蜱虫叮咬致人死亡事件”，引起社会各界广泛关注，甚至一度造成了局部恐慌[6-7]。河南省信阳市是我国目前发热伴血小板减少综合征疫情最严重并持续流行的地区，根据2007-2011年河南省发热伴血小板减少综合征的监测结果，信阳市占全省报告病例的98%以上，商城县和光山县是报告发病数最多的县区[8]，因而本次研究选择商城县和光山县病例曾经感染过的地点作为调查点，结合当地地理景观特点以及与人类活动接触密切程度，选择了鼠、牛、羊、猪和狗5种动物作为调查对象，结果显示动物血清新布尼亚病毒抗体总阳性率(33.56%)，显著高于江苏省(11.06%)[5]，可能与人群发病率的高低有相关性。对于调查的鼠、牛、羊、猪和狗5种动物，新布尼亚病毒总抗体阳性率有显著差异，牛、羊和狗的抗体阳性率远高于鼠和猪。提示牛、羊和狗感染过新布尼亚病毒，牛、羊和狗都是家养动物，但并未发现有明显的临床症状，可能为隐性感染，在对信阳市的两个调查点采样时发现，目前牛、羊和狗多散养，且动物身上携带蜱或有牛虻叮咬史，因而存在成为新布尼亚病毒储存宿主的可能。虽然动物血清标本中未检测到新布尼亚病毒，但是也不能排除其成为储存宿主的可能，如乙脑病毒的储存宿主猪感染病毒后并无脑炎的临床症状，若错过了急性感染期的病毒血症期再采血，就检测不到病毒核酸[9]，而新布尼亚病毒感染动物也存在这种可能，但要证实这种可能尚需要长期开展对动物宿主的监测以及更深入的病毒感染实验研究。

参考文献：

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