连翘子药材质量标准研究

魏惠华， 郭 静， 黄孝春， 贾建华， 玄振玉

(苏州玉森新药开发有限公司， 江苏 苏州 215123)

连翘为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实，为中医常用的清热解毒药，历来被视为疮家要药，其性微寒，味苦。具有清热解毒、消肿散结之功能。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”，筛取种子，习称“连翘心，连翘子”。中医用于清心热、治疗热病、心烦、不寐等症。《温病条辨》卷一记载的清宫方及其加减方治疗太阴温病，神昏谵语者。现代临床报道使用连翘心治疗呃逆[1]。对连翘子化学成分的研究，目前尚不多见，但已有报道连翘子中连翘酯苷的量明显高于青翘及老翘[2-11]。连翘子中油类成分α-蒎烯、ß-蒎烯、松油烯-4-醇、α-柠檬烯等和果皮挥发油所含化学成分基本一致，种子中挥发油含有量高于果皮，约为果皮的10倍[12-15]。《中国药典》2010年版一部收载的连翘药材分为青翘和老翘两种[16]，连翘按青翘采收，基本能保留连翘子，而按老翘采收，则其中的连翘子往往被当作杂质而除去，这导致了连翘子这一宝贵药材资源的大量浪费。

本实验为了更好地控制连翘子质量，对连翘子的显微鉴别、薄层鉴别和成分测定进行了研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Sartorius BS110S分析天平(万分之一级)；硅胶G薄层预制板(青岛海洋化工厂)；美国Agilent系列HPLC色谱仪包括Agilent 1100 series，G1314 VWD检测器，Agilent色谱工作站；756 CRT紫外-可见分光光度计；BM 1000显微镜(江南永新光学有限公司)；SX2-4-10型箱式电阻炉(上海亚明热处理设备公司)。

1.2 试药 甲醇(HPLC，TEDIA公司出品)；冰醋酸，石油醚、乙酸乙酯、丙酮(分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司)；连翘酯苷A对照品(中国食品药品检定研究院，批号111810-201102，纯度为93.2%)；连翘子均购自安徽省亳州市厚朴药业有限责任公司，经上海中医药大学可燕老师鉴定为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的种子。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别 本品横切面：种皮表皮为1列细胞组成，细胞方形或四方形，排列整齐，外壁稍增厚，内含油滴；下层为数列不规则薄壁细胞。胚乳细胞含糊粉粒和脂肪油滴。粉末棕褐色。种皮表皮细胞表面观细胞呈多角形，垂周壁平直，略增厚，内含油滴；横切面观细胞呈正方形或长方形，长70～150 μm，宽70～98 μm，排列整齐。胚乳细胞含糊粉粒和脂肪油滴。见图1。

图1 连翘子横切面图及粉末图

2.2 薄层色谱鉴别 取本品粉末1.5 g，加石油醚(30～60 ℃)50 mL，加热回流1 h，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加50%甲醇40 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加50%甲醇10 mL使溶解，作为供试品溶液。另取连翘酯苷A对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录IV B)试验，吸取上述2种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-水(5∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。

1.连翘酯苷A 2～11.连翘子药材

2.3 挥发油、水分、灰分、浸出物检查 根据《中国药典》2010年版一部附录XD挥发油测定甲法、IX H水分测定第二法、IX K灰分测定法，X A浸出物测定法对10批连翘子药材进行检查，结果见表1。

表1 不同批连翘子挥发油、水分、灰分、浸出物检查

2.4 连翘酯苷A测定

2.4.1 色谱条件 Global-SP-120-5-C18-BP色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以甲醇-水-冰醋酸(33∶67∶0.2)为流动相；检测波长为332 nm；体积流量为1.0 mL/min。理论塔板数按连翘酯苷A峰计算应不低于8 000。

2.4.2 对照品溶液的制备 取干燥至恒重的连翘酯苷A对照品10 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加50%甲醇溶解，定容摇匀；精密量取上述母液1 mL置10 mL量瓶中，加50%甲醇定容摇匀，即得。

2.4.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约1.5 g，精密称定，加石油醚50 mL，加热回流1 h，滤过，弃去滤液，药渣挥干，精密加入50%甲醇40 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，加50%甲醇补足减失的质量，滤过，精密量取续滤液1 mL至25 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。

2.4.4 系统适用性试验 在上述确立的色谱条件基础上，分别精密吸取“2.4.2”项下对照品溶液及“2.4.3”供试品溶液各10 μL，对照品溶液连续进样5针，计算结果表明，5次峰面积的RSD为0.2%，拖尾因子为1.15。理论塔板数按连翘酯苷A计算为10 021，分离度10.66。

2.4.5 专属性试验 分别取空白溶剂、对照品、连翘子供试品注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件，进样10 μL，测定，结果溶剂无干扰，方法专属性好，见图3。

1.连翘酯苷A

2.4.6 线性关系 精密称取连翘酯苷A对照品10.02 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取0.50、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL，分置于10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，连翘酯苷A对照品进样量为横坐标进行回归计算，得回归方程为y=1 463.4x-11.586，r=0.999 9，连翘酯苷A在0.046 7～0.747 1 μg范围内线性关系良好。

2.4.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10 μL，分别于0、4、8、12、24 h进样，记录峰面积，RSD为0.5%，表明供试品溶液在24 h内稳定，能满足测定要求。

2.4.8 重复性试验 平行取同批样品6份(批号20120325)，按供试品制备方法处理，测定。结果连翘酯苷A平均含有量为2.93%，RSD为0.9%。表明本方法的重复性良好。

2.4.9 中间精密度试验 使用不同型号的高效色谱仪，由不同人员于不同时间进行试验。实验结果表明，12份样品测定结果的RSD为1.0%，表明精密度良好。

2.4.10 加样回收率试验 取本品粉末(批号20120325，连翘酯苷A含有量为2.93%)9份，每份0.75g，分别加入对照品约17.6、22.0、26.4mg各3份，按“2.4.3”项下制备供试品溶液。按上述色谱条件测定连翘酯苷A，计算准确度，本方法平均回收率为100.3%，RSD为1.9%。结果表明，准确度良好，符合定量测定的要求，见表2。

表2 加样回收试验结果

2.4.11 样品测定 按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，按拟订方法测定不同批次连翘子中连翘酯苷A，结果见表3。

表3 不同批次连翘子中连翘酯苷A测定结果

3 讨论

连翘心被收录于《上海市中药炮制规范》(1994年版)中。目前连翘子尚未被收录于《中国药典》，连翘子药材中有效成分检测指标的缺失严重影响其药材质量，建立连翘子中成分的定性定量的检查方法对于保证连翘子药材的质量具有重要意义。

本实验采用连翘酯苷A为对照品，建立了其薄层色谱检识方法和高效液相色谱定量测定方法。连翘子挥发油及连翘酯苷A是连翘子中有效成分[ 2-3]，本实验对所采购的10批连翘子挥发油含有量进行了检测，约在3%～5%之间，连翘酯苷A含有量在2%～4%。

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