毛细管GC法同时测定艾叶油中桉油精、樟脑和龙脑的含量

熊 莹，吴铁军，滕 佳，孙 蕾，葛月宾＊，洪宗国

（1.中南民族大学药学院，武汉430074；2.国药集团致君制药有限公司，广东深圳518000；3.湖北四环制药有限公司，武汉430056）

艾叶为菊科植物艾Artemisia argyi Lévl.et Vant.的干燥叶，具温经止血、散寒止痛、外用祛湿止痒之功效［1］.艾叶油为艾叶经水蒸气蒸馏提取出来的挥发油，具有平喘、祛痰、抗菌、消炎等活性［2－4］.艾叶油化学成分复杂，且各成分含量随产地及提取方式的不同有很大差异［5－6］，其中桉油精、樟脑、龙脑是普遍含量较高的3种主要活性成分.《中国药典》（2010版）对艾叶的质量控制考察了桉油精的含量，也有研究报道了艾叶中龙脑和石竹烯的含量测定［7］，但现有文献还未见能同时测定艾叶油质量的桉油精、樟脑、龙脑3种成分含量方法的报道.故本文采用GC法建立了同时测定艾叶油中桉油精、樟脑、龙脑含量的研究方法，以更全面、准确、有效地控制艾叶油及其制剂的质量.

1 仪器与试剂

Agilent 6890N气相色谱仪和Agilent B.01.01C化学工作站（美国Aligent公司）；CA－1型静音无油空气泵、CH－1高纯氢气发生器（武汉科林普丰仪器有限公司）；AB265－S型1／10万电子分析天平（瑞士METTLER TOLEDO）.

桉油精对照品（批号：110788－201105）、樟脑对照品（批号：110747－201008）、龙脑对照品（批号：110881－201107），以上对照品均由中国食品药品检定研究院提供；乙醇、环己酮均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；艾叶挥发油（不同批次艾叶水蒸气蒸馏法自提获得，简称艾叶油）.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HP－INNOWAX毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm×0.5μm）；进样口温度：250℃；FID检测器温度：280℃；程序升温：初温110℃（保持8 min），以25℃·min－1升至158℃（保持8 min），再以25℃·min－1升至230℃（保持9 min）；载气：氮气，流量：0.7 m L·min－1（0.12 MPa）；氢气流量：40 m L·min－1；空气流量：450 m L·min－1；分流比10∶1，进样量：1μL.

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标溶液 精密称取环己酮适量，加乙醇制成每1 m L含1.40 mg的溶液，作为内标溶液.2.2.2对照品储备溶液 精密称取桉油精、樟脑、龙脑对照品适量，加乙醇制成每1 m L分别含桉油精9.28 mg、樟脑2.00 mg、龙脑1.80 mg的对照品溶液.

2.2.3 混合对照品溶液 精密吸取桉油精、樟脑、龙脑对照品储备溶液适量，加乙醇制成每1 mL含桉油精0.975 5 mg、樟脑0.200 0 mg、龙脑0.223 2 mg的混合对照品储备液.再精密吸取混合对照品储备液适量与内标溶液1 m L于5 mL量瓶中，用乙醇稀释定容，摇匀即得.

2.2.4 阴性对照品溶液 取内标溶液适量，用乙醇稀释，摇匀即得.

2.2.5 供试品溶液 精密称取艾叶油适量，加乙醇制成每1 m L含艾叶油2.632 mg的供试品贮备液；再取供试品贮备液适量与内标溶液1 m L于5 m L容量瓶中，用乙醇定容，摇匀即得.

2.3 方法的专属性

分别吸取混合对照品溶液、阴性对照品溶液、供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪中，按上述色谱条件测定，记录色谱图.结果见图1.结果表明，供试品溶液在与对照品溶液相同保留时间位置上有相应的吸收峰，阴性对照品溶液对测定无干扰.

A.混合对照品；B.阴性对照品；C.艾叶油供试品；1.桉油精（0.439 0 mg·mL－1）；2.环己酮（0.280 0 mg·mL－1）；3.樟脑（0.090 0 mg·mL－1）；4.龙脑（0.100 4 mg·mL－1）.图1 气相色谱图A.mixed reference substance；B.negative control；C.essential oil from Artemisia argyi sample；1.eucalyptol（0.4390 mg·mL－1）；2.cyclohexanone（0.2800 mg·mL－1）；3.camphor（0.0900 mg·mL－1）；4.borneol（0.1004 mg·mL－1）.Fig.1 GC chromatograms

2.4 线性关系与范围

按2.2.3项下制备不同质量浓度的混合对照品溶液6份.按上述色谱条件每个浓度分别测定2次.以对照品与内标物的峰面积比值为纵坐标（Y），以对照品浓度为横坐标（X）进行线性回归，得桉油精、樟脑、龙脑的线性回归方程分别为：Y＝3.9689 X＋0.0113，Y＝4.1289 X＋0.0021，Y＝4.2625 X＋0.0028，r值均为1.000 0.结果表明，桉油精、樟脑、龙脑分别在48.78～731.6μg·mL－1，10.00～150.0μg·mL－1，11.16～167.4μg·mL－1的浓度范围内与各自峰面积呈良好的线性关系.

2.5 最低检测限及定量限

分别将3种对照品储备液逐步稀释进样，至S／N（信噪比）≈3与S／N≈10，测得桉油精、樟脑、龙脑的最低检测限分别为1.05 ng，0.64 ng，0.72 ng.定量限分别为3.14 ng，2.57 ng，2.87 ng.

2.6 日内精密度试验

取混合对照品溶液1份，按上述色谱条件连续进样测定6次，计算各对照品峰面积与内标峰面积的比值，考察其进样精密度.计算桉油精、樟脑、龙脑的RSD分别为0.06%，0.44%，0.57%.结果表明，该方法日内精密度良好.

2.7 日间精密度试验

取混合对照品溶液1份，按上述色谱条件连续进样测定5 d，每天测定1次，计算各对照品峰面积与内标峰面积的比值，考察其进样精密度.计算桉油精、樟脑、龙脑的RSD分别为：0.08%、0.28%、0.32%，结果表明，该方法日间精密度良好.

2.8 稳定性试验

按上述色谱条件分别于0、2、4、6、8、12 h测定同一供试品溶液，计算桉油精、樟脑、龙脑与内标的峰面积比值.计算桉油精、樟脑、龙脑的RSD分别为0.12%，0.68%，1.01%.结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定.

2.9 重复性试验

取同一批号的艾叶油适量，按2.2.5项下制备6份供试品溶液，按上述色谱条件测定并计算桉油精、樟脑、龙脑与内标的峰面积比值.计算桉油精、樟脑、龙脑的RSD分别为0.85%，1.03%，1.42%.结果表明，该方法重复性良好.

2.10 加样回收率试验

精密吸取已知含量的艾叶油样品9份，按低、中、高浓度分别精密加入一定量的混合对照品溶液，每一浓度3份，按2.2.5方法制备溶液，按上述色谱条件进行含量测定，计算加样回收率，结果见表1.

表1 桉油精、樟脑、龙脑加样回收率试验测定结果（n＝9）Tab.1 Results of recovery test of eucalyptol，camphor and borneol（n＝9）

2.11 样品含量测定

取3批艾叶油样品适量，分别按2.2.5方法制备供试品溶液各3份，按上述色谱条件进行含量测定，取平均值，结果见表2.

表2 不同批次艾叶油的含量测定结果（n＝3）Tab.2 Results of content determination of eucalyptol，camphor and borneol in different samples（n＝3）

3 讨论

在实验条件的探索阶段，笔者考察了3根不同商品规格的毛细管色谱柱Agilent HP－5（30 m×0.32 mm×0.25μm）、Agilent HP－INNOWAX（30 m×0.25 mm×0.5μm）、Agilent HP－INNOWAX（30 m×0.32 mm×0.25μm），结果仅有Agilent HP－INNOWAX（30 m×0.25 mm×0.5μm）毛细管色谱柱能使桉油精、樟脑、龙脑及内标物环己酮达到基线分离（峰分离度均大于1.5）；理论塔板数均大于10000，符合药典要求.因此以Agilent HPINNOWAX（30 m×0.25 mm×0.5μm）毛细管色谱柱作为本试验色谱柱.

由于艾叶油成分复杂，使用恒定柱温无法同时使桉油精、樟脑、龙脑完全分离，笔者经多次试验最终选用了文中的程序升温条件.在综合考虑分离度跟分析时间的前提下，最终选用了0.7 mL·min－1的载气流速.

由于手动进样无法精确保证进样量的一致性，故本实验采用内标法定量，试验发现环己酮保留时间适当且对其他峰无干扰，适合作为本实验的内标物.

4 结论

从艾叶油含量测定结果可以看出，不同批次的艾叶所提艾叶油中桉油精、樟脑和龙脑成分含量高低不一，单单监测其中的一种成分无法全面客观地评价艾叶油的质量好坏，故要控制艾叶油的质量需对这3个组分进行同时检测.

由于艾叶油的多种可靠功效，对其进行开发使用正方兴未艾，以它为主要成分生产的制剂日益增多，对其制剂的质量控制亦会有更高的要求.本实验方法简便可靠，准确度高，重复性好，可为艾叶油及其制剂的质量控制提供一定的参考依据.

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：82.

［2］ 黄学红，谢元德，朱婉萍，等.艾叶油治疗慢性支气管炎的实验研究［J］.浙江中医杂志，2006，41（12）：734－735.

［3］ 吴朝霞，夏天爽，李 琦，等.同时蒸馏法提取艾叶挥发油及其抑菌性研究［J］.食品研究与开发，2010，31（8）：19－22.

［4］ 蒋 涵，侯安继，项志学，等.蕲艾挥发油的抗炎、抗过敏和镇痛作用［J］.医学新知杂志，2005，15（2）：36－39.

［5］ 江 丹，洪宗国，易 筠，等.不同品种艾叶挥发油的化学成分分析［J］.中国医药生物技术，2009，4（5）：339.

［6］ 何正有，蓝闽波，张艳红，等.三种不同提取方法制备的艾叶挥发油化学成分分析［J］.中国医药生物技术，2008，3（4）：284.

［7］ 王 芳，王 俊，傅秀娟.毛细管GC法同时测定艾叶中石竹烯与龙脑的含量［J］.中国药房，2012，23（27）：2551.