化学发光参与的免疫测定在临床中的应用

麻志慧

（赤峰学院第二附属医院，内蒙古 赤峰 024000）

1 引言

化学发光免疫测定分析技术是指通过化学发光剂对抗体或抗原进行标记，并利用试剂的这种发光特性进行检测的一种分析技术，可以进行有效定量或定性，现在已经被广泛应用在了临床诊断的许多领域.现综述及展望如下.

2 化学发光免疫分析技术

2.1 起源

化学发光免疫测定分析技术最早应用在上世纪七十年代，当时只限于作为示踪信号，而且仪器发展水平有限，其灵敏度差，且发光时长不足，依赖手工操作，无法实现试验条件的即时控制，应用领域严重受限.后来发展到八十年代中期，辣根过氧化物酶标记技术的出现，使信号强度及发光时间明显提高，解决了技术难题，从而得到迅猛发展和广泛应用.

2.2 原理

2.2.1 发光原理

基于化学发光的免疫测定，首先是把化学发光物或酶标记物标记在抗体或抗原上，促使其相互之间发生免疫反应，即抗体与抗原进行特异性结合成复合物，之后把氧化剂或者化学发光剂加入生成的复合物，使其发光.之后再通过仪器检测发光强度，进一步换算待测物的浓度.

能够作为化学发光物的多为有机化合物，通过氧化反应出现发光现象，这是由于反应过程中的中间体能量释放而发光.

2.2.2 检测原理

处于激发态的分子在释放的多余能量部分以光能释放，从而发出波长一定的光子，而被检测出，由于是否能够的光子是微量的，在检测的过程中往往加入微量倍增技术，从而提高颗粒磁粉的吸附量，加快反应速度，从而利于检出.

2.3 分类

根据发光原理及试剂的不同，化学发光免疫技术被分为三种主要类型，发光物免疫测定、发光酶免疫测定及发光辅助因子免疫测定等.

3 临床应用

3.1 对病毒的检测

3.1.1 对梅毒螺旋体的检测

对于梅毒的筛查，临床常用的方法为检测患者体内的非密螺旋体特异性抗体，然后进行确证检测而确诊.而常用的梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验、血凝试验等人工检测方法，操作繁琐，耗时长但准确率低，无法满足临床，而广州中医药大学第一附属医院检验科的何惠[1]等采用化学发光免疫测定法，可以利用全自动免疫化学发光分析仪，通过两步法定性检测，明显降低了假阳性率，符合临床需求.

3.1.2 对乙肝病毒标志物HBsAg的测定

乙型肝炎是一种传染性强、流行广泛且具有严重危害性的病毒性肝炎，传统的检测多采用ELISA法进行定性，但不能满足临床定量的要求.目前，多以HBsAg作为判断病毒感染的标志，可以采用化学发光免疫测定法，对乙肝HBsAg抗原进行测定，既能定性，又可定量，灵敏度可以达到100%，特异性和符合率可分别高达96.15%及97.50%，各指标均能符合临床诊断及治疗的需求.焦梅[2]等通过化学发光免疫分析技术进行乙肝HBsAg的测定，发现其在较大范围内线性较好.

3.1.3 艾滋病的预防

获得性免疫缺陷综合征，即艾滋病（AIDS），是由HIV病毒（人类免疫缺陷病毒）引起的，迄今为止没有有效的治疗手段，因此切断感染途径是重要措施.研究发现，可以通过化学发光免疫测定法进行对需要检查的血清、仪器等样本进行HIV抗原检测，可不受黄疸、酯血及溶血的影响，降低了假阳性率，提高了检测准确度.

3.2 对肿瘤标志物的检测

在肿瘤患者细胞中，肿瘤标志物存在于其细胞及组织中，肿瘤标志物主要有蛋白质、癌基因产物、酶、激素等等.现在国内外许多学者通过化学发光免疫测定法对肿瘤标志物进行了检测，对肿瘤的早期体外诊断及术后监测均提供了重要而有效的方法.例如Mac等通过化学发光免疫测定法检测了血清中鳞状细胞癌抗原、癌胚抗原以及cy-fra21-1的浓度，从而进行了食管癌的诊断和病情监测，效果显著.

3.3 对心脏疾病的诊断

有学者通过试验，进行了心脏疾病患者的心肌损伤标记物cTnT肌酸激酶同工酶CK-MB以及肌红蛋白之间的相关系数分析，证实三者之间具有良好的相关性，因此可以利用化学发光免疫对这些指标进行临床测定，用于临床标本的检测，有助于心脏类疾病的及时、有效、准确地诊断与病情监测.而且临床的检测技术已经相对成熟.例如，户雪冬[3]等通过电化学光免疫法对患者的血清心肌损伤标志物进行了分析，有效检出和确诊了心肌梗死病例，比传统的诊断方法准确而方便.

3.4 自身免疫性疾病的诊治

3.4.1 系统性红斑狼疮（SLE）的诊治

SLE是一种累及全身的自身免疫亢进类疾病，临床症状多样化，容易造成误诊及延期诊断，造成疾病治疗的延误.但是传统的诊断方法仅从临床表现很难取得正确的结果，有效的实验室检查被迫切需求.有同仁对SLE患者进行了分析，发现其dsDNA抗体与补体C3、C4呈负相关，而与疾病活动指数、血沉等成正相关，说明dsDNA抗体水平对SLE的诊断及病情发展判断有良好的指示价值，可以通过化学发光免疫测定法测定dsDNA抗体的水平，从而帮助进行SLE疾病的判断.但需要指出的是，dsDNA抗体的浓度与SLE病情的危重程度没有直接相关性.

3.4.2 类风湿性关节炎的诊治

类风湿性关节炎也是一种自身免疫系统疾病，常累及多个关节，可以通过血清学标志物的检测进行诊断及监测.有学者采用化学发光免疫测定法检测类风湿性关节炎患者的血清抗环瓜氨酸肽抗体，取得了较其他方法精密度更高，特异性更好的结果，而且整个检测过程仅用了20分钟，能够较好地满足临床检验需求，对该疾病的治疗具有良好的应用价值.

3.5 其他

化学发光免疫测定技术的应用领域还涵盖了妇产科，如诊断早孕及滋养体细胞疾病；内分泌科，如甲状腺疾病；血液科，如贫血等科别领域.

4 讨论与展望

4.1 提高分析方法的灵敏度

能够有效满足疾病标记的抗原毕竟是少量的，因此，应该充分优化检测方法，有效实现分析结果的放大，提高放大倍数，延长检测下限，提高分析方法的灵敏度，使化学发光免疫测定应用范围更加广范，发挥更大价值.

4.2 提高分析仪器的准确性

任何分析和检测，以准确性为最终目的，而凡是使用仪器的分析以提高仪器的准确性为根本.化学发光的免疫测定方法越来越广泛地被应用，但是也有其相应的局限，进一步的改进工作，应以提高分析仪器的准确性、使仪器向小型化及智能化方向转变为首要任务.

4.3 发掘新型发光物和高效催化剂

化学发光的免疫测定方法依赖于发光物的生成及高效催化剂的放大作用，为了扩大应用范围、提高检测的灵敏度，发掘新型发光物和高效催化剂是问题的重点.而且在这个基础上和过程中，可以进一步研究新的分析方法.

4.4 修饰和增强化学发光反应效果

修饰和增强化学发光反应效果与发掘新型发光物及高效催化剂是相辅相成的，应该两方面同时进行研究和改进.有利于扩大化学发光的免疫测定方法的应用领域和范围，并且提高检测灵敏度，提升检测准确度.

5 结语

化学发光免疫分析技术灵敏度高、特异性好、分析方法简单快速、能够稳定地与标志物结合而无污染，不受检测样本的破坏，如溶血等的影响，在对病毒的检测、肿瘤标志物的检测、心脏疾病的诊治以及免疫系统疾病的诊断等各方面应用效果好、但是相比放射性分析方法，尚在仪器的准确性、检测方法的灵敏性方面有一定差距，应充分发掘新型的发光物和高效催化剂、修饰和增强化学发光效果，提高其检测准确度，扩大其临床应用范围.

〔1〕何惠,周迎春,刘基铎,等.化学发光免疫测定在梅毒螺旋体抗体检测中的临床应用[J].国际检验医学杂志,2011,32(13):1469-1471.

〔2〕焦梅,李明.化学发光免疫技术定量测定HBsAg的评价[J].实用医技杂志,2003,10(6):598-599.

〔3〕户雪冬,户秋冬,刘阳贵.电化学发免疫法检测血清心肌损伤标志物及心肌酶学在心肌梗死中的应用[J].中国误诊学杂志,2009,6(23)：4545-4546.

〔4〕施丽娟.化学发光免疫分析技术及在临床检验中的应用[J].检验医学与临床，2012,9（4）：454-456.