血管内皮生长因子在前列腺增生合并高血压患者中的表达及意义

张 晋，唐玉分，李 珅，李 超，杨立军，胡晓雷，庞书舰

(石家庄市第一医院泌尿外科,石家庄 050011)

前列腺增生是男性泌尿系最常见的疾病之一，其发病率随年龄增长而增高，随着社会的老龄化，前列腺增生已成为老年医学研究的重要课题，越来越多的研究表明前列腺增生与前列腺处新生血管形成有密切关系。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在前列腺增生患者中的表达有显著升高[1-2]。原发性高血压是和年龄相关的中老年多发性疾病,高血压与VEGF关系密切，同时，男性高血压患者发生前列腺增生的病例报道越来越多，但目前高血压对前列腺增生的发生和疾病进展、相关调节因素及其机制的研究鲜有报道。

1 材料与方法

1.1实验标本 本研究标本取自2009年1月至2010年12月在石家庄市第一医院泌尿外科住院的前列腺增生患者的前列腺组织，患者共60例，其中单纯性前列腺增生患者30例(前列腺增生组)，前列腺增生合并高血压患者30例(合并高血压组)。高血压符合WHO高血压诊断标准[3][收缩压≥140 mm Hg和(或)舒张压≥90 mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa]，入选患者均排除同时患有糖尿病、脑血管意外、冠状动脉粥样硬化性心脏病及其他有可能影响血管新生的疾病，患者均无术前服用α肾上腺能阻滞剂和5α还原酶抑制剂等抗前列腺增生的药物治疗史。分为单纯前列腺增生组30例，年龄55～79(65.2±8.6)岁,前列腺增生合并高血压组30例，年龄57～81(67.3±8.2)岁。两组患者年龄、病情等具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1主要试验方法和试剂 所用抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。试剂如下，试剂A:内源性过氧化酶阻断剂;试剂B:正常非免疫动物血清;试剂C:生物素标记的第二抗体;试剂D:链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶;二氨基联苯胺(3,3′-diaminobenzidine,DAB)液。VEGF的测定采用免疫组织化学染色S-P法(链霉卵白素-过氧化物酶连结法)，主要过程如下:①石蜡切片脱蜡；②蒸馏水冲洗、磷酸盐缓冲液浸泡5 min，采用微波加热抗原修复；③3% H2O2温室孵育5～10 min，以清除内源性过氧化物酶的活性，磷酸盐缓冲液冲洗，2 min×3次；④5%～10%正常血清封闭，室温孵育10 min，倾去血清，勿洗，加一抗VEGF/转化生长因子β1，4 ℃过夜；⑤磷酸盐缓冲液冲洗，2 min×3次；⑥滴加生物素标记二抗工作液，37 ℃孵育10～20 min；⑦磷酸盐缓冲液冲洗，2 min×3次；⑧滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37 ℃孵育10～20 min；⑨磷酸盐缓冲液冲洗，2 min×3次；⑩显色剂显色；去离子水充分冲洗，复染，脱水透明，封片。

1.2.2病理切片结果判定 细胞胞质出现棕黄色染色为阳性，未见或偶见阳性胞质为(-)，随机选取视野内的五个区域作总细胞计数及阳性细胞计数，计算阳性细胞占总细胞数的比值的平均值即为阳性细胞率。阳性细胞率<10%为(+，即为弱阳性),阳性细胞率(10%～50%)为(++，即为中阳性)，阳性细胞率>50%为(+++，即为强阳性)。

1.3统计学方法 应用SPSS 11.5统计软件进行分析处理，在前列腺增生患者前列腺组织中VEGF表达程度的比较采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

免疫组织化学结果显示，VEGF在单纯前列腺增生与前列腺增生合并高血压组的标本中均可见有表达(图1)，表达特征为间质细胞染色，胞核、胞质均染色，分泌腺上皮基底上皮着色浅。其中单纯前列腺增生组VEGF染色较浅，数目较少，阳性率为60%，[(-)12例，(+)16例，(++)2例；前列腺增生合并高血压组VEGF染色较深，数目较多，阳性率为86.67%(-)4例，(+)14例，(++)9例，(+++)3例]。通过比较，VEGF在前列腺增生合并高血压组阳性表达率高于单纯前列腺增生(86.67% vs 60%)，差异存在统计学意义(u=3.321，P<0.05)(表1)。

1a 单纯性前列腺增生(SP×250) 1b 前列腺增生合并高血压(SP×250)

图1血管内皮生长因子在两组患者前列腺组织中的表达(单纯前列腺增生组VEGF染色较浅，数目较少；前列腺增生合并高血压组VEGF染色较深，数目较多)

表1 VEGF在两组前列腺增生患者的前列腺组织中的表达比较 (例)

VEGF:血管内皮生长因子

3 讨 论

前列腺增生是老年男性常见的疾病之一，随着年龄的增长，前列腺增生发病率也明显增加，已严重影响老年男性健康。虽然前列腺增生的病因学迄今未完全阐明。但大量研究已表明前列腺增生的发生与前列腺的众多生长因子有关[1]。前列腺依赖于雄激素诱导，产生多种生长因子，以旁分泌、自分泌或内在分泌的模式，刺激细胞生长，抑制细胞增殖或促进细胞分化、恶化或死亡。作用于前列腺的各类生长因子与各自的特异性受体结合而发挥作用，调节前列腺细胞的增殖、分化和凋亡。其中VEGF发挥了重要作用。

对于血管内皮细胞，VEGF是一种强烈的有丝分裂原，也是一种分泌性分子，以可溶性调节物的形式调节内皮细胞的生长和血管形成，对于血管生成过程是十分重要，对增殖性病变过程也具有重要的调节意义。Folkman[1]认为，前列腺增生的发生有赖于新生的血管，而新生血管的形成与VEGF、碱性成纤维细胞生长因子及血管生成素密切相关[2]，Harper等[4]对10例前列腺增生组织进行检测，发现绝大多数组织标本VEGF表达呈阳性，Jackson等[5]采用免疫组织化学技术研究发现，VEGF广泛分布于前列腺增生组织的上皮细胞、基质细胞和血管壁及其周围组织细胞。Levine等[6]的一份研究中显示，VEGF在前列腺增生组织中有表达，但前列腺增生组织中VEGF的表达限于基质细胞，腺上皮细胞无明显表达。Weingartner等[2]研究发现，前列腺增生患者的尿液成分与正常对照组相比，有显著增高的促进血管内皮细胞增殖能力，进一步发现尿液中的VEGF和碱性成纤维细胞生长因子也显著升高，这说明VEGF与前列腺增生的发病可能有非常密切的关系，可能通过调节前列腺组织中血管新生和刺激前列腺基质细胞增殖作用而促进前列腺增生的发生、发展。

世界正步入老龄社会，原发性高血压也是和年龄相关的中老年多发性疾病。国内外流行病学调查资料显示高血压是前列腺增生的危险因素，高血压患者的前列腺增生患病率明显高于对照组[7]，进一步研究发现舒张压增高可能是前列腺增生的危险因素[8]，长期高血压尤其是高舒张压、可能与良性前列腺增生的临床进展有关[9]。近年有文献资料报道高血压与前列腺增生所致的下尿路梗阻症状相关[10]。国外临床资料对单纯前列腺增生和前列腺增生合并高血压的患者进行了比较研究，发现与单纯前列腺增生患者相比前列腺增生合并高血压患者的国际前列腺症状评分显著升高。有研究表明，高血压患者的VEGF水平显著高于正常人[11-12]。国内有研究VEGF在前列腺间质中的表达率，前列腺增生并发高血压时显著增高,同时发现前列腺间质中VEGF表达率与前列腺容积及血尿的发生率有显著的相关性。这说明高血压可以促进VEGF在前列腺组织中的表达,同时VEGF对前列腺组织中的血管新生具有调控作用。本研究通过免疫组织化学的方法显示VEGF在单纯前列腺增生与前列腺增生合并高血压组中均可见有表达。通过比较，VEGF在前列腺增生合并高血压组阳性表达率高于单纯前列腺增生，差异有统计学意义，VEGF主要为间质细胞染色，胞核、胞质均染色，分泌腺上皮基底上皮着色浅。与先前报道的结果相一致；VEGF在前列腺增生合并高血压组强阳性表达率也高于单纯前列腺增生组，但未达显著统计学差异，可能与样本量较小有关。

总之，本实验显示高血压合并良性前列腺增生患者前列腺组织中VEGF蛋白表达增高，提示高血压可能通过参与改变VEGF的表达而影响促进前列腺增生的发生和临床进展。

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