可溶性血管内皮生长因子受体sFlt-1、Flt-1在妊娠期高血压疾病患者中的水平和意义

王 芳

(河北大学附属医院妇产科，河北 保定071000)

妊娠期高血压是产科常见疾患，占全部妊娠的5%～10%，所造成的孕产妇死亡约占妊娠相关死亡总数的10%～16%，是孕产妇死亡的第二大原因。其主要症状有高血压、蛋白尿、水肿等[1]。妊娠期高血压的发病机制尚不确定，目前文献研究报告其机制可能是胎盘缺血缺氧，导致血管内皮损伤造成的血压升高[2]。该学说认为妊娠期高血压疾病分为两步，首先以滋养细胞侵入过浅为特点，导致胎盘浅着床[3]，此阶段无临床表现；第二阶段胎盘缺血缺氧，释放的可溶性因子进入母体循环，引起内皮系统功能受损而出现血压升高和蛋白尿等症状。本研究欲通过酶联免疫吸附实验、免疫组织化学法分别探讨妊娠期高血压患者和正常孕妇的血清可溶性血管内皮生长因子受体(sFlt-1)和胎盘可溶性血管内皮生长因子受体(Flt-1)蛋白的差异，寻找其内在联系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2008年1月至2010年1月在河北大学附属医院妇产科待产的产妇，排除与妊娠高血压有相关性并发症，如原发性高血压、慢性肝炎、贫血、胎儿生长迟缓等。按是否发生妊娠期高血压分为妊娠期高血压组(妊娠高血压组)40例，年龄24～32(26.1±3.2)岁，孕周未发生妊娠期高血压组(无妊娠高血压组)20例为无妊娠高血压组，年龄24～32(27.4±2.8)岁，孕周34.2～42.4(38.4±2.7)周。妊娠高血压组中按是否发生突然晕厥、四肢抽搐分为轻度子痫前期组18例，年龄25～31(28.6±2.0)岁，孕周35.1～42.4(37.7±1.8)周；重度子痫前期组22例，年龄24～32(37.7±1.8)岁，孕周37.2～41.7(39.3±1.9)周。年龄、孕周在轻度子痫前期组和重度子痫前期组间的差异无统计学意义(P>0.05)，妊娠高血压组和无妊娠高血压组之间存在可比性。

1.2方法

1.2.1实验仪器和试剂 采用由上海蓝基生物有限公司生产的酶联免疫吸附测定试剂盒检测血清sFlt-1，上海亿欣生物公司生产的Flt-1兔抗人单克隆抗体检测胎盘Flt-1。在南京华东电子集团医疗装备有限责任公司生产的DG5033A 酶联免疫检测仪下检测结果。

1.2.2实验方法 血清sFlt-1水平的测定采用酶联免疫吸附实验法:在条板中加入不同浓度标准品室温孵育2 h后震动吸净残留物，每孔加入200 μL sFlt-1酶结合物再孵育2 h，震动吸净，再孵育30 min，加入50 μL终止液，5 min内酶标仪OD450(波长450 nm时的吸光度)进行吸光度定量测定。

胎盘Flt-1蛋白表达水平的测定采用免疫组织化学法。化学处理消除内源性过氧化物酶活性，用高压锅法冒气2 min后滴加封闭液，室温孵育10～15 min不洗片；滴加一抗兔抗人Flt-1(效价1∶50)，置于湿盒中4 ℃冰箱过夜，改良磷酸盐缓冲液振洗3次，每次5 min；滴加二抗PV6001葡聚糖-酶复合物，37 ℃孵育60 min；改良磷酸盐缓冲液振洗3次，每次5 min；滴加过氧化物酶显色剂：改良磷酸盐缓冲液4 mL，过氧化物酶5 g，H2O 25 μL，显色10 min左右；蒸馏水充分冲洗5次；苏木精复染1 min，酒精梯度脱水，二甲苯透明后中性树胶封片；光镜下观察结果。

1.2.3胎盘组织Flt-1染色方法 从胎盘母体面中央(避开明显纤维化、钙化区)切取胎盘组织1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm，充分漂洗，置10%甲醛溶液中固定24 h以上，石蜡包埋，连续切片，厚度2 μm，苏木精-伊红染色观察胎盘组织学特征，再进行免疫组织化学染色。

1.2.4胎盘组织Flt-1免疫组织化学染色评分 以细胞胞质有棕褐色颗粒沉着为阳性细胞，计数每个视野所含细胞数，计数其中阳性细胞数及着色强度。根据阳性细胞所占比例及着色强度综合制订免疫组织化学半定量记分标准：①阳性细胞记分-无阳性细胞为0分；<25%为1分；25%～50%为2分；>50%为3分。②着色强度记分-细胞内无染色或染色与背景一致为0分；细胞质内可见少量淡黄色颗粒，明显高于背景为1分；细胞质内可见较多深棕色颗粒为2分；细胞质内可见大量深棕色或褐色颗粒为3分。阳性细胞计分和着色强度计分相加为最终判定结果：0～1分(阴性)，1～3分(弱阳性)，3～5分(阳性)，5～6分强阳性。

2 结 果

2.1sFlt-1的检测结果 妊娠高血压组sFlt-1值为(9012.74±3892.12) ng/L显著高于无妊娠高血压组的(2012.46±401.23) ng/L，比较差异有统计学意义(t=17.86,P<0.05)。且轻度子痫20例sFlt-1为(5832.53±417.34) ng/L，重度子痫20例sFlt-1为(1243.15±278.37) ng/L，轻度子痫者的sFlt-1显著高于重度子痫者(t=59.00,P<0.01)。

2.2胎盘组织Flt-1的检测结果 妊娠高血压组的绒毛膜滋养细胞出现增生，有血管内皮细胞的损伤，其中滋养细胞增厚，基质出现纤维化，绒毛毛细血管内膜增厚，宫腔不畅，血管内皮损伤，出现红细胞，而无妊娠高血压组基本均表现正常(见表1)。

表1 无妊娠高血压组与妊娠高血压组胎盘组织苏木精-伊红染色结果

2.3胎盘组织中Flt-1蛋白表达强度(免疫组化染色评分)比较 在妊娠高血压组中，轻度子痫组蛋白表达强度均值为(1.5±0.5)分，重度子痫组均值为(1.2±0.3)分，两组数据比较有统计学意义(t=3.35，P<0.05)随着病情的加重，胎盘组织中Flt-1蛋白表达强度依次下降，经统计学检验，差异有统计学意义(Z=8.67，P<0.05)(表2)。

表2 无妊娠高血压组和妊娠高血压组胎盘组织中Flt-1蛋白表达强度比较

3 讨 论

本研究结果与其他学者报道的研究结果基本一致[4]。关于Flt-1对妊娠高血压的发病机制，可能涉及母体、胎盘和胎儿等多种因素，滋养细胞侵袭异常、免疫调节功能异常、内皮细胞损伤、遗传因素和营养因素[5]；血管痉挛、内皮细胞激活、升压反应增加、前列腺素、一氧化氮、内皮素和血管生成和抗血管生成的蛋白质等。但是没有任何一种单一因素能够解释所有子痫前期发病的病因和机制。相关研究镜下观察结果表明滋养细胞浸润不足[6]，胎盘小动脉数量减少、深度过浅导致胎盘绒毛缺血缺氧[7-8]，导致血管内皮细胞损伤，从而释放大量活性细胞因子，进一步加剧妊娠高血压的发生。

另有研究表明，妊娠高血压是一种多因素多基因引发的疾病，有家族遗传倾向。患子痫前期的母亲其女儿子痫前期发病率为20%～40%；患子痫前期的妇女其姐妹子痫前期发病率为11%～37%；双胞胎中患子痫前期的妇女其姐妹子痫前期发病率为22%～47%[9-10]。但至今为止，其遗传模式尚不清楚。故在有妊娠高血压家族史的产妇中应特别关注子痫的发生。

本研究显示，血清sFlt-1、胎盘组织Flt-1参与了上述病理生理过程。本试验表明，血清sFlt-1和胎盘组织Flt-1蛋白可能对妊娠期高血压疾病的发生、发展起到一定的促进作用。对孕妇检测有助于妊娠高血压的早期诊断。

[1] 赵云,邹丽,李剑,等.妊娠期高血压疾病母体血清及胎盘组织中HCG的表达[J].中国妇幼保健，2008,23(2)：252-254.

[2] 王明松，邹良健.血管内皮细胞生长因子家族的研究现状[J].医学综述,2006,12(9)：534-536.

[3] 林其德.妊娠高血压综合征病因学研究的现状[J].中华妇产科杂志,2003,38(8):471-473.

[4] 刘世凯，宋莉莉，李铁军，等.胎盘早剥孕妇与正常孕妇血清CA125、AFP和PLGF的比较[J].河北医药，2011,33(10)：1494-1495.

[5] 李东志,林其德,林建华.胎盘绒毛缺氧与血管内皮细胞损伤关系的实验研究[J].中国病理生理杂志,2004,20(3)：411,416.

[6] 丛克家.妊娠高血压疾病急重症的诊断和鉴别诊断[J].中国医刊，2009，41(5):46-47.

[7] 尹剑.血管内皮损伤大鼠模型研究进展[J].医学综述,2010,16(11):83-85.

[8] 沈洁,杨孜,王伽略.母体基础疾病状况对子痫前期的影响[J].中华妇产科杂志,2012,47(6):39-40.

[9] 潘正军，王振平，陈忠科.妊娠期高血压疾病病因探析[J].中国实用妇科与产科杂志,2009，23(6):465-467.

[10] 沈杨，蒋小青.妊娠期高血压疾病孕前高危因素研究进展[J].国外医学·妇幼保健分册，2010，16(2)：76-78.