175例急性白血病流式细胞术免疫分型的研究

姚亚洲 郑引索 陈峰云 陈 涛 田昱平 李小妮 杨彩霞 张 玲

（宝鸡市中心医院血液风湿科，陕西 宝鸡 721008）

175例急性白血病流式细胞术免疫分型的研究

姚亚洲 郑引索 陈峰云 陈 涛 田昱平 李小妮 杨彩霞 张 玲

（宝鸡市中心医院血液风湿科，陕西 宝鸡 721008）

目的 探讨急性白血病流式细胞术免疫分型的意义以及与FAB分型的对照。方法 采用流式细胞术三色荧光标记技术和CD45/SC双参数散点图设门，检测175例急性白血病的免疫表型，对抗原表达情况进行分析。结果 FAB分型和免疫分型的相符率90.28%（158/175），175例急性白血病检出B-ALL44例，占25.14%，其主要表达的抗原阳性率从高到低依次为CD19、CD22、CD79a；T-ALL19例，占10.86%，其主要表达的抗原阳性率从高到低依次为HLA-DR、CD34、CD5、CD7、cCD3、CD8、CD38；非M3 AML103例，占58.86%，其主要表达的抗原阳性率从高到低依次为CD33、CD117、CD38、CD13、HLA-DR、MPO、CD34、CD123、CD15、CD64；共检出AML-M3患者6例，占0.34%，其主要表达的抗原阳性为MPO、CD13、CD33、CD117、CD123、CD64。结论 流式细胞术免疫分型在白血病分型中起重要作用，是FAB分型的补充和修正,提高了急性白血病诊断的准确率，有必要进一步加强流式细胞术免疫分型的规范化和标准化工作。

急性白血病；流式细胞术

急性白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病，因白血病细胞自我更新增强、增殖失控、分化障碍、凋亡受阻，而停滞在细胞发育的不同阶段。我国各类白血病的发病率为3～4/10万人，在恶性肿瘤所致的病死率中，白血病居第6位（男性）和第7位（女性），在儿童和35岁以下的人群中则居第1位[1]。准确地为白血病的进行分型对于白血病的诊断、治疗方案的确定、预后判断、疗效观察都有着非常重要的意义。鉴于染色体分析技术以及分子生物学检查技术短期难于大范围普及，作为MICM分型的重要组成部分，流式免疫分型能精确地反映白血病细胞的来源和分化程度，是急性白血病的诊断、治疗及预后判断的重要依据，流式细胞术免疫分型的开展促进了急性白血病诊断治疗水平的进展。我们通过对我科收治的175例初诊急性白血病患者采用流式细胞免疫分型和骨髓形态学检查的结果进行总结和分析，报道如下。

1 材料与方法

1.1 对象：2008年10月至2014年5月在本院血液科送检的免疫分型病例共175例，均为初诊病例，男97例，女78例，年龄6～83岁。

1.2 方法

1.2.1 骨髓细胞形态学检查：患者局麻下行骨髓穿刺涂片，常规瑞氏加吉姆萨染色，细胞化学检查检测MPO，PAS，NSE，油镜下分类计数200个有核细胞，个别患者计数500个细胞，按法美英（FAB）白血病分型标准进行分型[2]。

表1 109例AML中不同抗原表达

1.2.2 流式细胞术免疫表型分析：采集骨髓标本1～2 mL，使用EDTA抗凝。外周血原始细胞＞30%且白细胞计数＞20×109的部分患者采用外周血标本，24 h内送至中心实验室，按实验室常规标记荧光抗体，包括T淋巴细胞相关抗体CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、cCD3；B淋巴细胞相关抗体CD10、CD19、CD20、CD22、CD79a、sIgM；髓系细胞相关抗体CD13、CD14、CD15、CD33、CD64、CD61、MPO、CD42b、Gly；以及HLA-DR、CD34、CD45、CD38、TdT等通用抗体。采用美国BD公司生产的四色流式细胞仪采集10000个细胞，用SystemⅡ软件对结果进行自动分析。

1.2.3 流式细胞仪和所有试剂均购自美国BD公司。以胞质抗原≥10%、膜表面抗原≥20%定义为阳性；若髓系和一个淋系积分均＞2，参照白血病免疫学积分系统（EGIL，1998）[3]诊断为急性混合细胞白血病。

1.2.4 统计学分析：应用Microsoft Excel2007软件进行数据处理和统计分析，计数资料以阳性百分比表示。

2 结 果

2.1 骨髓形态学结果：本组175例急性白血病患者经骨髓细胞形态学检查，初诊时按FAB分类，急性髓细胞白血病（AML）106例，急性淋巴细胞白血病（ALL）61例，形态学不典型无法判断者8例。

2.2 免疫分型结果：本研究中175例急性白血病经流式细胞术检测免疫分型结果，原始细胞占骨髓有核细胞的比例为最低24.5%，最高达99%，中位数为80.57%，流式细胞术免疫分型结果，ALL 63例，AML 109例，混合细胞白血病（MLL）3例。4例形态分型经过免疫分型得以修正，2例ALL-L3修改为T/M，2例AML-Ml修改为T-ALL；8例骨髓细胞形态学难以确诊的患者为1例为B-ALL，1例为T-ALL，1例为B/M，其余5例均为AML，FAB分型和流式细胞免疫分型的相符率为90.28%。

2.3 B-ALL抗原表达情况：本研究中175例急性白血病检出B-ALL44例，占25.14%，其主要表达的抗原阳性率从高到低依次为HLA-DR、CD38、CD34、CD19、CD22、CD33、CD79a、CD123。

2.4 T-ALL抗原表达情况：本研究中175例急性白血病检出T-ALL19例，占10.86%，其主要表达的抗原阳性率从高到低依次为HLA-DR、CD34、CD5、CD7、cCD3、CD8、CD38。

2.5 AML抗原表达情况：本研究中175例急性白血病检出非M3AML103例，占58.86%，其主要表达的抗原阳性率从高到低依次为CD33、CD117、CD38、CD13、HLA-DR、MPO、CD34、CD123、CD15、CD64。175例急性白血病共检出AML-M3患者6例，占0.34%，其主要表达的抗原阳性为MPO、CD13、CD33、CD117、CD123、CD64。见表1。

3 讨 论

急性白血病是一组造血干细胞的恶性克隆性疾病，是造血细胞在某一分化阶段的大量积累，具有高度的异质性，通过对这一阶段细胞的形态、免疫、遗传学以及分子生物学检验分析对白血病进行正确分型，对指导临床治疗与判断预后均有着十分重要的意义。随着现代免疫学、细胞遗传学、分子生物学技术的发展，结合白血病形态学特征，世界卫生组织于1999年正式公布造血和淋巴组织肿瘤分类框架，并在2001年详细介绍了造血和淋巴肿瘤的分类和诊断并提出MICM分型，近年来已经普遍应用于临床。FAB形态学分型是应用范围最广泛和使用时间最长的白血病分型及诊断方法，然而显微镜下的细胞形态学观察和细胞化学方法对细胞识别受检验者的经验影响，主观性明显，加上白血病细胞自身的多态性和异质性，23%～36%左右的急性白血病难以得到准确诊断，而流式免疫分型是根据白血病细胞表达的系列抗原，来确定白血病细胞的来源以及分化程度，提高了白血病诊断的准确性、客观性和可重复性[4]。本组175例急性白血病中有4例FAB分型与流式细胞免疫分型不符，与国内报道相似；对8例骨髓细胞形态学不典型的患者进行了分型。由此多数学者为流式细胞术免疫分型可以弥补FAB细胞形态学分型的不足，使其准确性提高10%～20%[5]，为急性白血病确诊后治疗方案的选择以及对白血病预后的判断提供了重要依据。本组共检测出急性淋巴细胞白血病63例，其中B-ALL44例，T-ALL19例。44例B-ALL中，CD19、CD22、CD79a、CD123是B系急性淋巴细胞白血病的敏感标志，其中尤以CD79a的表达较之胞质免疫球蛋白重链的表达更早，持续至B细胞的浆细胞阶段仍有表达，被认为是B细胞最特异的标志之一[6]。19例T-ALL中CD5、CD7、cCD3的表达率最高（100%），表明CD5、CD7、cCD3的敏感性高，其中cCD3是T-ALL的特异标志之一[3]。本研究共检出AML109例，其中非M3AML103例，主要表达CD33、CD117、CD38、CD13、HLA-DR，MPO其中MPO是髓系白血病的标志性特征。AML-M3患者6例，主要表达MPO、CD13、CD33、CD117、CD123，CD64，与国内外文献报道一致[7]。由于AML-M3的白血病细胞起源于祖细胞，分化相对较成熟，较少表达CD34和HLA-DR，本组CD34和HLA-DR在AML-M3中的表达率分别为15.15%和0。针对高度异质性和形态多样性的急性白血病，在遗传学和分子生物学还不能很好普及的当前，流式细胞术免疫分型诊断是对传统FAB形态学分型诊断的重要补充和修正，尤其是可以确诊一些特殊类型的急性白血病，提高了急性白血病的分型准确性，有利于判断预后及治疗方案的选择。在目前的现状下，我们建议：①在进行流式细胞术免疫分型时，按照WHO提出MICM分型的要求，需要结合FAB分型、细胞遗传学、基因检测和临床相关信息，为急性白血病提供更精确的诊断；②在掌握已有的相关信息基础上，尽量全面地检测单克隆抗体，以便于疾病的准确诊断、预后判断；③就目前而言，急需加强流式细胞术免疫分型的规范化、标准化工作，在有条件的地区，相关实验室可以实行局部规范化和标准化不具备条件的单位，尽可能选择区域中心的实验室完善流式细胞免疫分型检测来提高诊断准确性。

[1] 葛均波,徐永健.内科学[M].8版.北京:人民卫生出版社,2013:578.

[2] 张之南.血液病诊断及治疗标准[M].3版.北京:北京科学出版社,2007:106-113.

[3] Bene MC,Castoldi G.Proposals for the immunological classification of acute leukemias[J].Leukemia,1995,9(12):1783-1786.

[4] Jennings CD,Foon KA.Recent advances in flow cytometry: applications to the diagnosis of hematologic[J].Blood,1997,90: 2863-2892.

[5] 黄正刚,陈启文.67例儿童急性白血病流式细胞术免疫分型的研究[J].实用临床医学,2008,9(5):87-90.

[6] Paredes-Aguilera R,Romero-Guzman L.Flow cytometric analysis of cell-surface and intracellular antigens in the diagnosis of acute leukemia[J].Am J Hematol,2001,68(2):69-74.

[7] 黄婕,何璐璐.儿童急性白血病免疫表型及临床研究[J].医学临床研究,2008,25(12):2159-2161.

Immunophenotyping of 175 Case with Acute Leukemia by Flow Cytometry

YAO Ya-zhou, ZHENG Yin-suo, CHEN Feng-yun, CHEN Tao, TIAN Yu-ping, LI Xiao-ni, YANG Cai-xia, ZHANG Ling
(Department of Blood Rheumatology, Baoji Central Hospital, Baoji 721008, China)

Obiective To investigate the significance of immunophenotype in acute leukemia via flow cytometry, and study the relationship of immunophenotype and FAB phenotype. Methods Immunophenotypes were detected by three-color flow cytometry(FCM )and CD45/SSC gating in 175 cases of acute leukemia(AL)and antigentic expressions were analysed. Results FAB classification and immunophenotype consistent rate of 90.28% (158/175), 175 cases of acute leukemia detected in B-ALL44 cases, accounting for 25.14%, antigen positive rate of its main expression in the order of CD19, CD22, CD79a; T-ALL19 cases, accounting for 10.86%, the positive rate of antigen expression and its main descending order of HLA-DR, CD34, CD5, CD7, cCD3, CD8, CD38; non M3 AML103 cases, accounting for 58.86%, its the positive rate of antigen expression in the order of major CD33, CD117, CD38, CD13, HLA-DR, MPO, CD34, CD123, CD15, CD64; were found in AML-M3 6 patients, accounting for 0.34%, and its main antigen expression of MPO, CD13, CD33, CD117, CD123, CD64.Conclusion Immunophenotype Plays an important role in the classification of acute leukemia and is a supplementary and correction of FAB phenotype. It can enhance the exactness of diagnosis and needs to be standardized.

Acute leukemia; Flow cytometry

R733.71

：B

：1671-8194（2014）31-0033-02