活血壮筋胶囊质量标准研究

杨玉霞，刘竞研，于秀华，孙丹丹，陈凡波，尹建元，赵芸浩，孟勤

(1．吉林大学药学院 a．天然药物化学教研室； b．药学实验中心，长春 130021； 2．东北师范大学附属中学，长春 130021)

活血壮筋胶囊由红花、血竭、桂枝、人参等11味中药组成，具有祛风活血、强腰壮筋的功效，临床用于筋骨疼痛、周身麻木、半身不遂、口歪眼斜[1]。活血壮筋胶囊是在不改变原来剂型制备工艺前提下，由活血壮筋丸改为胶囊剂[2]。为了进一步提高制剂质量控制水平，本试验增加了人参、桂枝、红花的薄层色谱鉴别方法，采用高效液相色谱法建立了血竭中血竭素高氯酸盐的含量测定方法。为活血壮筋胶囊的质量控制提供了依据，使制剂质量得到更好控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-10ATvp型高效液相色谱仪(日本岛津公司)，SPD-10Avp紫外检测器、CAMAG型薄层色谱扫描仪(瑞士CAMAG公司)；薄层板(青岛海洋化工厂分厂)； BT125D电子天平(0.01mg，德国赛得利斯有限公司)；KQ-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药

活血壮筋胶囊(批号120101-120303，西安澜泰药业有限公司)；人参皂苷Rb1对照品(批号0703-200221)、人参皂苷Re对照品(批号110754-200218)、人参皂苷Rg1对照品(批号0703-200221)、人参对照药材(批号120917-200609)、桂皮醛对照品(批号110710-201217)、红花对照药材(批号120907-201609)、血竭素高氯酸盐对照品(批号0811-200203，中国北京药品生物制品检定院)；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1人参的薄层鉴别取本品内容物4g，置具塞锥形瓶中，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20mL，弃去，水层用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20mL，合并提取液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次，每次30mL，弃去，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20mL，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液[3]。另取人参药材1g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Re及人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1mL各含2mg的混合溶液作为对照品溶液。另按处方比例及工艺制法制备缺人参的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取对照药材溶液与对照品溶液各4μL，供试品溶液与阴性对照溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视[4]。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的3个紫红色斑点，紫外光灯(365nm)下，显相同1个黄色和2个橙色荧光斑点。阴性样品在此对应位置上无斑点，即阴性无干扰，见图1。

2.1.2桂枝的薄层鉴别取本品内容物4g，置500mL圆底烧瓶中，加水200mL，按《中国药典》2010年版一部附录挥发油测定法，连接挥发油提取器，自提取器上端加水使充满刻度部分，再加入乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管，加热回流2h，分取乙酸乙酯层，用少量乙酸乙酯冲洗刻度部分，洗液并入乙酸乙酯液中，蒸干，残渣加无水乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1mL含1μL的溶液，作为对照品溶液。另按处方比例及工艺制法制备缺桂枝的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取对照品溶液2μL，供试品溶液和阴性对照溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液[5]。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上显相同颜色的斑点。阴性样品在此对应位置上无斑点，即阴性无干扰，见图2。

2.1.3红花的薄层鉴别取本品内容物4g，置锥形瓶中，加80%丙酮20mL，振摇15min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15mL使溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，弃去，水层挥尽乙醚后上已处理好的D101大孔树脂柱(内径1.5cm，柱高10cm)，用60mL水洗脱，弃去，再用30%乙醇1000mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加70%乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取红花对照药材，同法制成对照药材溶液。另按处方比例及工艺制法制备缺红花的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各5μL，对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7∶2∶3∶4)为展开剂，展开，取出，晾干[6]。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。阴性样品在此对应位置上无斑点，即阴性无干扰，见图3。

2.2 血竭含量测定

2.2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Shim-Pack VP-ODS C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(43∶57)，流速1.0mL/min，柱温40℃，检测波长440nm。理论板数按血竭素高氯酸盐峰计算应不低于3500。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取血竭素高氯酸盐10mg，置25mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1mL含血竭素29μg的对照品储备液(血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377)。

2.2.3供试品溶液的制备取本品内容物适量，研细，取约0.8g精密称定，置25mL棕色量瓶中，加入3%磷酸甲醇溶液20mL，超声处理30min，放至室温，加3%磷酸甲醇溶液至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5mL，置10mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇至刻度，摇匀，即得[7]。

2.2.4空白试验按供试品溶液制备时取样量，折算成处方中除血竭外其他药材的取样量，按活血壮筋胶囊制法制成样品，再按供试品溶液制备方法制成空白溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液、空白对照溶液各10μL，按“2.2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。对照品、供试品在相同的保留时间内有吸收峰，而空白对照溶液在此相应保留时间无吸收峰，说明阴性无干扰(图4、图5、图6)。

2.2.5线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液4.0μL、8.0μL、10.0μL、12.0μL、16.0μL、20.0μL，注入液相色谱仪，测定。回归方程为Y=1 612 285.836X-4855.209 5，r=0.999 9。线性范围：0.080 64μg～0.403 2μg。

2.2.6稳定性试验依上述色谱条件，分别在0h、4h、8h、12h、16h、20h、24h测定同一批(批号：120105)供试品溶液，吸收峰峰面积RSD为0.67%。表明供试品溶液中血竭素高氯酸盐在24h内是稳定的。

2.2.7中间精密度试验按“2.2.2”项下方法制备的对照品溶液重复测定6次，吸收峰峰面积基本不变，RSD为0.28%(n=6)，表明中间精密度良好。

2.2.8重现性试验取同一批号(批号：120105)样品，按“2.2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，依法进行测定，RSD为1.08%。

2.2.9加样回收率试验精密取已知含量的同一批号样品(批号：120105)6份，研细，取约0.5g(含量为0.525 4mg/g)，精密称定，精密加入对照品溶液2mL(浓度为0.126mg/mL)，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率。结果见表1。试验结果表明，回收率平均值为97.89%，RSD值为1.40%，证明此方法可行。

表1回收率试验结果

Table1Thesamplerecoveryoftheprocedure

序号Number取样量(g)SampleMeasurement样品含量(μg)Samplecontrnt加入量(μg)Additionamount测得量(μg)Measuredcontent回收率(%)Recoveryrate平均值(%)AveragevalueRSD(%)1047020049400504009896412050950053500504010289774304779005020050400996979840501600527005040103210018505073005330050401029984060471100495005040098296629789140

2.2.10样品含量测定按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，取供试品溶液和对照品溶液各10μL，分别进样，测定。见表2。

表2样品含量测定结果

Table2ThecontentsofdracohodinperochlorateinHuoxuezhuangjincapsules

批号 Bathnumber120101120102120103120104120105120201120202120301120302120303含量(mg)Content对照品reference01077010240107900992010300098801072011520111801001样品sample01088010510106100971010230097801067011770108400977

根据10批样品测定的结果，另外考虑到药材产地、储藏及生产的波动。另因血竭中血竭素不十分稳定，怕光、怕热，所以按每粒平均含量0.105 3mg的80%计算，规定每粒含血竭以血竭素计不得少于0.085mg。

3 讨论

本研究采用薄层色谱法对处方中人参、桂枝和红花3味药进行了定性鉴别，因其处方成分复杂，为了排除干扰，在人参及红花的检测项中，将前处理步骤进行了优化，而桂枝的主要成分桂皮醛为挥发性成分[7]，采用挥发油提取法，方法简便，专属性强。结果薄层斑点清晰，重现性好，阴性无干扰，可以列入活血壮筋胶囊的质控标准。

血竭素为色原酮类化合物，见光易分解，性质不稳定，因此本试验的对照品和样品为避免强光照射均储存于棕色瓶中。以3%磷酸甲醇溶液作为溶剂，可使样品中的血竭素转变为血竭素磷酸盐，增强稳定性[8]。本试验采用高效液相色谱法建立了血竭素含量测定方法，该方法经方法学验证，重复性及回收率良好，可以列入活血壮筋胶囊的质控标准，亦可为中药复方中血竭素测定提供参考。

[1]李彦超,王艳宋,汉敏,等.RP-HPLC法测定活血壮筋丸(丹)中血竭素的含量[J].南京中医药大学学报,2011,7(27):396-397.

[2]刘绪林.活血壮筋胶囊的质量标准研究[J].中国医药指南,2012,12(10):70-72.

[3]杨瑞瑞,李雪,乔蓉霞,等.展筋活血散质量标准研究[J].中国药品标准,2013,14(4):251-255.

[4]汪冰,林永强,徐丽华.芪参胶囊的质量标准研究[J].中国药事,2013,27(6):592-596.

[5]ZGB2011-1,中国药品标准[S].

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典[K].北京:中国医药科技出版社,2010:141.

[7]许源,宿树兰,王团结,等.桂枝的化学成分与药理活性研究进展[J].中药材,2013,36(4):674-677.

[8]窦金凤,曹云飞.HPLC法测定活血壮筋丸中血竭素的含量[J].现代仪器,2009,(2):32-33.