医用多糖止血愈合海绵辅助敷料的阻菌作用

徐红霞 于 燕 张彬彬 王晓阳 王风华 姜 毅

1.解放军海军总医院烧伤整形科，北京100048；2.解放军第二〇一医院药剂科，辽宁辽阳111001；3.解放军海军总医院呼吸内科，北京100048；4.江苏昌吉永生物科技有限公司，江苏镇江212000

医用多糖止血愈合海绵辅助敷料的阻菌作用

徐红霞1于 燕1张彬彬2王晓阳3王风华4姜 毅3

1.解放军海军总医院烧伤整形科，北京100048；2.解放军第二〇一医院药剂科，辽宁辽阳111001；3.解放军海军总医院呼吸内科，北京100048；4.江苏昌吉永生物科技有限公司，江苏镇江212000

目的研究医用多糖止血愈合海绵辅助敷料的阻菌作用。方法参考YY/T 0471.5-2004接触性创面敷料实验方法，以医用水刺无纺布为对照，检验医用多糖止血愈合海绵辅助敷料对粘质沙雷菌及溶藻弧菌的阻隔效能。结果医用多糖止血愈合海绵的辅助敷料，对金黄色葡萄球菌气溶胶具有隔菌性能，在低水分条件、半潮湿条件及潮湿条件下对粘质沙雷菌或溶藻弧菌均有阻菌性能。结论医用多糖止血愈合海绵的辅助敷料具有阻菌作用。

阻菌；粘质沙雷菌；溶藻弧菌

在外伤止血尤其是战伤止血材料的研究中，以多聚糖类为主要成分的止血材料占据了重要地位。医用多糖止血愈合海绵是由江苏昌吉永生物科技有限公司研发的，是具有止血及愈创作用的新型创面敷料，其功能性部分为疏松多孔的海绵状结构，阻隔细菌性能较差，而远隔创面，起衬托、固定等作用的辅助敷料结构致密，为一层疏水膜，具有阻菌、阻水、透湿等性能，在实际使用中辅助敷料的外径超过功能性部分，起到隔离外界物质接触创面的作用。本研究以此辅助敷料作为实验对象，研究其阻隔细菌的性能。现报道如下：

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC25923）、粘质沙雷菌临床分离株、溶藻弧菌临床分离株均由解放军海军总医院检验科提供。分别在培养基上增菌后可见典型菌落，并且能够正常传代。

1.1.2 敷料实验组：医用多糖止血愈合海绵的辅助敷料（江苏昌吉永生物科技有限公司，专利号：2012204 33377.2），厚约0.38 mm的单层疏水膜；对照组：医用水刺法无纺布。两种敷料经裁剪后予以环氧乙烷消毒。

1.2 隔菌性能实验

将40mm×40mm方形灭菌后敷料，用无菌操作平置于琼脂糖培养基平皿中，培养基表面喷洒金黄色葡萄球菌气溶胶，盖上培养皿盖，置37℃培养24 h，观察敷料覆盖处与未覆盖处菌落生长状况。将去除敷料后的培养基置37℃继续培养24 h，观察覆盖处与未覆盖处菌落的生长状况。每组敷料连续操作3次。

1.3 低水分条件下的阻菌性能实验

低水分条件是指材料的两面都不湿的材料条件。用20～25℃的营养肉汤培养粘质沙雷菌24 h，获得菌含量约109个/mL。用无菌金属丝接种环浸沾实验菌液，在琼脂糖培养基平皿上接种一个“×”形，每一个交叉线的长度不超过20mm。将培养皿置20～25℃下培养24 h，使菌落生长。将无菌敷料（60 mm×60 mm方形）平置于培养皿中，使其覆盖“×”状的细菌培养物，并粘贴紧。将琼脂糖培养基和其上的敷料完整倒置在羊血琼脂平皿上，使三者完全接触，加盖。将整个培养皿置于20～25℃培养24 h。取下上层的琼脂糖培养基和敷料，羊血琼脂平皿加盖并置20～25℃下继续培养24 h。检查该血平皿被敷料覆盖表面上是否有粘质沙雷菌生长。每组敷料连续操作3次。溶藻弧菌实验方法同上。

1.4 半潮湿条件下的阻菌性能实验

半潮湿条件是指材料的一面是湿的材料条件，即敷料外部有水分浸湿的情况。用20～25℃的营养肉汤培养粘质沙雷菌24 h，获得菌含量约109个/mL。将无菌敷料（60mm×60 mm方形）平置于无菌营养琼脂培养基平皿上，用无菌移液管向敷料上滴5滴（0.2 mL/滴，四角部和中央各一滴）培养菌液。置20～25℃下培养24 h。培养结束后，用无菌移液管从敷料上将培养菌液吸除，用无菌镊子将敷料从琼脂表面取下。将培养皿置20～25℃下培养24 h。检查培养皿，观察敷料覆盖的表面积内是否有粘质沙雷菌生长。每组敷料连续操作3次。溶藻弧菌实验方法同上。

1.5 潮湿条件下的阻菌性能实验

潮湿条件是指材料的两面都是湿的材料条件。用20～25℃的营养肉汤培养粘质沙雷菌24 h，获得菌含量约109个/mL。以无菌操作，向无菌培养皿中注入约20 mL无菌营养肉汤，在皿口覆盖一片无菌敷料，使其下部完全接触培养基，向敷料上注入约10 mL菌液，盖上培养皿盖，室温下放置24 h。24 h后移除粘质沙雷菌液，去除敷料，加盖，置20～25℃下培养24 h。检查营养肉汤中是否有粘质沙雷菌生长。每组敷料连续操作3次。溶藻弧菌实验方法同上。

2 结果

2.1 隔菌性能实验

如图1所示，刚揭去敷料时及揭去敷料继续培养24 h后，实验组敷料及对照组敷料的培养基中心原敷料覆盖处无菌落生长，而其余部分则长满细菌，两者之间有明显的界线。重复实验3次，结果相同。

图1 隔菌性能实验结果

2.2 低水分条件下的阻菌性能实验

实验组敷料在低水分条件下阻隔粘质沙雷菌或溶藻弧菌的实验结果如图2所示，重复3次均相同，图2c可见菌落未能透过实验组敷料生长，说明实验组敷料在低水分条件下具有阻菌性能。

对照组敷料在低水分条件下阻隔粘质沙雷菌或溶藻弧菌的实验结果如图3所示，重复3次均相同，图3c可见细菌透过实验敷料生长，说明对照组敷料在低水分条件下无阻菌性能。

图2 低水分条件下实验敷料的阻菌性能实验结果

图3 低水分条件下对照组敷料的阻菌性能实验结果

2.3 半潮湿条件下的阻菌性能实验

半潮湿条件是指材料的一面是湿的条件，即敷料外部有水分浸湿的情况。由图4可见，培养基上原实验敷料覆盖处无菌落生长，说明细菌无法穿透敷料，实验敷料在半潮湿条件下具有阻菌性能。

由图5a可见，实验滴加的粘质沙雷菌菌液或溶藻弧菌菌液已经完全浸透对照组敷料；由图5b可见，培养基上原对照组敷料覆盖处菌落生长，并且由于对照敷料本身对菌液的吸收和扩散作用，菌落生长的形状基本符合敷料的形状，说明在半潮湿条件下，对照组敷料无阻菌性能。产生这种结果可能是由于对照敷料一面潮湿后，本身对水分有毛细的吸力作用，水分使样品内部结构疏松，网孔增大，对菌落阻力减小，造成菌落透过对照组敷料而在培养基上生长。

图4 半潮湿条件下实验组敷料的阻菌性能实验结果

图5 半潮湿条件下对照组敷料的阻菌性能实验结果

2.4 潮湿条件下的阻菌性能实验

潮湿条件是指材料的两面都是湿的材料条件。实验组敷料在潮湿条件下阻隔粘质沙雷菌或溶藻弧菌的实验均重复3次，每次结果相同，实验结果如图6所示，菌液未能透过实验组敷料，说明实验组敷料在潮湿条件下具有阻菌性能。

对照组敷料在潮湿条件下阻隔粘质沙雷菌或溶藻弧菌的实验也重复3次，每次结果相同，如图7所示。由图7a可见室温放置24 h后菌液已经浸透对照组敷料；图7b可见，原清澈的营养肉汤变浑浊，说明对照组敷料在潮湿条件下无阻菌性能。

图6 潮湿条件下实验组敷料的阻菌性能实验结果

图7 潮湿条件下对照组敷料的阻菌性能实验结果

3 讨论

临床上，患者创面的液体渗出量以及敷料的外部有无水分浸湿决定了接触性创面敷料的使用条件，大致可分为低水分条件、半潮湿条件或潮湿条件，在医药行业的国家标准YY/T 0471.5-2004接触性创面敷料实验方法[1]中，按照上述三种不同条件制订了相应的实验方法，用以评价敷料的阻菌性能，本实验借鉴了行业标准[2]及既往文献[3]中的方法进行实验设计，以外科伤口常见的金黄色葡萄球菌、粘质沙雷菌及海水浸泡伤口中常见的溶藻弧菌为实验菌种，研究实验用辅助敷料的阻菌性能。

金黄色葡萄球菌在自然环境中广泛存在，对外环境的抵抗力在无芽胞菌中最强，能在干燥状态下生存，附着在尘埃颗粒和脱屑的上皮细胞上可造成空气源性感染。在人群中金黄色葡萄球菌的带菌率为30%～50%，是医院感染的常见致病菌之一，故选用金黄色葡萄球菌气溶胶来评价敷料的隔菌性能。在隔菌实验中，实验组敷料及对照组敷料的培养基中心原敷料覆盖处均无菌落生长，而其余部分则长满细菌，刚揭去敷料时的状态与揭去敷料继续培养24 h后的状态完全相同，说明是敷料本身的隔菌性能所致，并非敷料的接触抑制使菌落不生长。该项实验说明两种敷料均有隔菌效能，且重复性很好。对照组敷料为医用水刺无纺布，其屏障功能是通过微生物屏蔽层的无数条细纤维无规律纵横交错，形成等效孔径小于50μm的小孔，从而达到阻菌的性能[4]。

粘质沙雷菌存在于土壤、水和食品中，也存在于人的呼吸道和消化道中，是条件致病菌。近年来，它在医院感染中已成为重要的病原菌，在个别救护中心已成为创面检出的主要菌种之一，并且因其菌体细小，也是用来衡量穿透性能的最佳细菌。粘质沙雷菌在20℃条件下培养可产生灵菌红素，菌落为红色，本研究使用的是临床分离株，不产生色素[5]，琼脂糖培养基及羊血培养基上的菌落为白色。而溶藻弧菌属于嗜盐性海生弧菌，为海洋环境的主要优势菌种之一，生物学特性与副溶血弧菌极为相似，是沿海地区腹泻和食物中毒的常见病原菌[6-11]，早在1973年就有人指出溶藻弧菌对人类有致病作用，主要引起创伤性感染和败血症等肠道外感染，如蜂窝组织炎、中耳炎、脓毒血症等，因为实验组敷料同时具有阻水性能，故选择溶藻弧菌作为海水菌的代表菌种。

实验组敷料在低水分条件、半潮湿条件及潮湿条件下阻隔粘质沙雷菌或溶藻弧菌的实验证实细菌未能透过实验组敷料生长，说明实验组敷料阻菌性能良好。实验组敷料为聚四氟乙烯（PTFE）膜外喷涂聚氨酯制成，PTFE具有优良的化学稳定性、耐腐蚀性、电绝缘性和良好的抗老化耐力，但PTFE膜为丝状PTFE压制而成，孔径较大，而带涂层的PTFE复合膜可明显提高其防水性及阻隔性能[12-14]，外涂聚氨酯后孔径约为0.45μm，而较小的粘质沙雷菌直径约0.5μm，无法透过实验组敷料。

对照敷料在低水分条件、半潮湿条件及潮湿条件下阻隔粘质沙雷菌或溶藻弧菌的实验证实细菌可透过对照组敷料生长，原因可能是由于对照组敷料相对于实验组敷料而言，敷料纤维间孔径较大，对细菌阻隔差，在含水分条件下细菌容易透过对照组敷料而在培养基上生长。

总的来说，实验组敷料，即医用多糖止血愈合海绵的辅助敷料，对金黄色葡萄球菌气溶胶具有隔菌性能，在低水分条件、半潮湿条件及潮湿条件下对粘质沙雷菌或溶藻弧菌均有阻菌性能。

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Effect of bacteria resistance of m edical polysaccharide hem ostatic healing sponge's secondary dressing

XU Hongxia1YU Yan1ZHANG Binbin2WANG Xiaoyang3WANG Fenghua4JIANG Yi3
1.Burns and Plastic Surgery,PLA Navy General Hospital,Beijing 100048,China;2.Department of Pharmacy,201st Hospital of PLA,Liaoning Province,Liaoyang 111001,China;3.Department of Respiratory Medicine,PLA Navy General Hospital,Beijing 100048,China;4.Jiangsu Changjiyong Bio-Technology Co.,Ltd.,Jiangsu Province, Zhenjiang 212000,China

Objective To study the bacteria resistance of the medical polysaccharide,China accharide hemostatic healing sponge.M ethods The testmethod for primary wound dressing YY/T 0471.5-2004 was referenced,a medical spunlaced nonwoven was as control,the effect of bacteria resistance of the secondary dressing was inspected.Resu lts Medical polysaccharide hemostatic healing sponge's secondary dressing had bacterial isolation performance against staphylococcus aureus aerosol,and bacteria resistance performance against serratia marcescens or vibrio alginolyticus under low moisture conditions,semiwet conditions and wet conditions.Conclusion Medical polysaccharide hemostatic healing sponge's secondary dressing has the effect of bacteria resistance.

Bacteria resistance;Serratiamarcescens;Vibrio alginolyticus

R187.1

A

1673-7210（2014）09（c）-0031-04

2014-06-13本文编辑：任念）

徐红霞（1967.4-），女，硕士，副主任医师；研究方向：医学整形美容。

姜毅（1975.1-），男，博士；研究方向：呼吸危重症。