针刺联合药物对小鼠肿瘤细胞抑制性作用的实验研究

王微等

[摘要] 目的 观察针刺与氟尿嘧啶、益气解毒中药复方联合应用对荷瘤小鼠肿瘤细胞的抑制性作用。 方法 制备小鼠肝癌H22细胞实体瘤模型，分成肝癌模型组、化疗药物组（氟尿嘧啶腹腔注射）、益气解毒方组（中药灌胃）、针刺大椎穴组、化疗药物+针刺大椎穴组、益气解毒方+针刺大椎穴组，并与正常小鼠进行对照。观察荷瘤小鼠一般生存状态，并计算各组肿瘤抑制率。 结果 化疗药物组小鼠一般状态较差，益气解毒方组及针刺组一般状态均优于化疗药物组，针药联用组小鼠的一般生存状态优于模型组与单一疗法组；各实验组对肿瘤均有明显抑制作用（P<0.01）。 结论 针刺联合药物对小鼠肿瘤细胞的生长具有较好的抑制作用。

[关键词] 针刺；中药复方；小鼠肿瘤细胞；肿瘤抑制率

[中图分类号] R73-3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（b）-0100-03

针灸是中国传统特色疗法之一，能补偏救弊，平阴潜阳，具有双向调节脏腑经脉气血运行的治疗与保健作用。临床研究证明，对肿瘤患者施以针灸疗法，能缩小瘤体、缓解癌性疼痛，改善放化疗后的恶心及呕吐等消化道反应、疲劳、口干等[1-2]，在改善患者一般症状方面效果显著。本研究以肝癌细胞H22荷瘤小鼠作为试验对象，观察针刺与药物联合应用对荷瘤小鼠一般状态及肿瘤抑制率的影响。

1 材料与方法

1.1 动物及动物瘤株

ICR小鼠，体重25～28 g，雌雄兼用，由吉林大学实验动物中心提供。动物移植性肿瘤小鼠肝癌细胞H22购于吉林省肿瘤研究所。

1.2 药品

化疗阳性药：氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司生产）；益气解毒方（以下简称“YJP”）由本校附属医院临床验方加减而成，主要由黄芪、当归、丹参、鳖甲、菊花、半枝莲等补益解毒中药组成，经过水煎醇沉处理，制成浓度为1.25 g/ml（生药）的药液备用。

1.3 仪器与设备

0.5 mm×30 mm针灸针（苏州医疗用品厂）；二氧化碳培养箱（Hera Cell-150型，德国Heraeus公司）；研究用倒置显微镜（Olympus IX-70，日本）；全自动酶标仪（Bio-Rad 680型，美国）；超净工作台（苏州净化设备厂）；低速离心机（上海飞鸽）。

1.4 方法

1.4.1 模型制备 取体外培养或小鼠腹腔内传代的生长良好的H22肿瘤细胞，生理盐水洗涤1次，用生理盐水调整浓度为5×106/ml，小鼠右腋皮下接种，每只0.2 ml（1×106/ml）。24 h后随机分组。

1.4.2 动物分组 从70只ICR小鼠中随机抽取60只接种H22肿瘤细胞，次日随机分为6组，每组10只，雌雄各半，即肝癌模型组（模型组）、化疗药物组（FU组）、益气解毒方组（YJP组）、针刺大椎穴组（ac组）、化疗药物+针刺大椎穴组（FU+ac组）、益气解毒方+针刺大椎穴组（YJP+ac组）；剩余10只小鼠作为正常对照组，按时给予食水，不做其他任何处理。

1.4.3 处理方法 接种次日起，给予5-FU组腹腔注射氟尿嘧啶10 mg/kg[3]；YJP组给予益气解毒方以20 ml/kg的剂量灌胃；ac组取大椎穴，顺经脉走行斜刺皮下约0.2 mm，用均匀手法小幅度捻转1 min，留针15 min，间歇行针2次[4]；FU+ac组以上述手法针刺大椎穴，10 min后腹腔注射氟尿嘧啶10 mg/kg；YJP+ac组以上述手法针刺大椎穴，10 min后取益气解毒方以20 ml/kg的剂量灌胃。上述处理1次/d；模型组每天腹腔注射生理盐水20 ml/kg；对照组按时给予食水，不做其他任何处理。

1.5 观察指标

1.5.1 小鼠一般状态的观察 自接种后每天称量动物体重，观察记录各组动物毛色、进食、活动及死亡状况。

1.5.2 肿瘤抑制率 于给药结束次日颈椎脱臼处死全部动物，剥取瘤组织称重，计算肿瘤抑制率。肿瘤抑制率=（1-实验组瘤重/模型组瘤重）×100%。

1.6 统计学方法

采用Excel 2010软件统计，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间均数的比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

给药前，各组小鼠体重差异均无统计学意义，平均体重为27.4 g；给药后，从各组情况看，在皮下接种H22瘤细胞后，模型组小鼠进食量明显减少，且精神状态较差，行动迟缓，运动欠灵活，毛色逐渐变得缺乏光泽，接种侧水肿明显；给药10 d后，模型组小鼠与对照组比较，体重显著增加（P<0.01）。FU组小鼠毛皮晦暗杂乱，进食饮水均差，粪便不成形，身体瘦弱无力，行动极为迟缓；给药10 d后，该组小鼠与模型组比较，体重明显降低（P<0.01）。YJP组小鼠进食量少于模型组而多于FU组，精神状态、自主行动及毛色与模型组基本相同，整体状态优于FU组；给药10 d后，该组小鼠与模型组比较，体重明显降低，与对照组小鼠比较，差异无统计学意义（P>0.01）。FU+ac组小鼠一般状态优于FU组，YJP+ac组小鼠一般状态优于YJP组，给药10 d后，这两组小鼠与模型组比较，体重明显降低（P<0.01），与对照组小鼠比较，体重差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。说明针刺具有改善荷瘤小鼠治疗过程中的一般生存状态的作用，且各治疗组对肿瘤均具有明显的抑制作用（P<0.01）（表1）。

3 讨论

现代实验研究表明，针灸具有良好的缓解癌性疼痛的作用[5]，并能不同程度地协调机体免疫，作用靶点分布于多个免疫环节[6-7]，如提高癌症患者的T淋巴细胞功能以及提高巨噬细胞的吞噬活性等[8]，此外还有明确的调节内分泌功能的作用[9-10]。大椎穴通手足三阳经，兼为督脉上之要穴，具有调节诸阳经阳气的作用[11]，从而提高机体免疫力及患者带瘤生存质量。

本研究采用单侧右腋皮下接种H22肿瘤细胞复制荷瘤小鼠模型，并分别施以化疗药物、中药制剂及药物与针刺疗法联合应用等治疗，结果显示，针刺大椎穴组肿瘤抑制率为9.90%，与模型组比较，差异有统计学意义，说明针刺对于恶性肿瘤具有一定的抑制作用。同时，针灸在与化疗药物氟尿嘧啶和益气解毒方联合应用时，均取得了较好的疗效，尤其是与益气解毒方联用时，取得了较单一疗法更高的肿瘤抑制率。联用组荷瘤小鼠的一般生存状态较模型组及单一疗法组为优，说明针灸与其他中西药物疗法间或存在协同作用，但其作用机制尚有待于进一步研究。

[参考文献]

[1] 李海燕，裴建，刘志丹.针灸对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖及Stat5-Foxp3通路影响[J].上海针灸杂志，2010，29（3）：190-193.

[2] 曾健球.观察针刺配合中药治疗ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌的临床疗效[J].中医临床研究，2012，4（23）：46-47.

[3] 曹治云，陈旭征，胡海霞.5-FU联合胸腺肽对H22细胞皮下移植瘤小鼠免疫功能的影响[J].现代肿瘤医学，2011， 19（11）：2165-2167.

[4] 成泽东，陈以国.针刺联合紫杉醇对Lewis肺癌小鼠一般状态及抑瘤率影响的实验研究[J].中国中医药信息杂志，2008，15（1）：24-25.

[5] 谢燕.针刺镇痛的研究进展[J].中国社区医师·医学专业，2011，13（26）：12-13.

[6] 涂铭珊，田菲.温针灸对肺癌患者免疫功能的影响[J].四川中医，2013，31（8）：151-152.

[7] 李海强.针刺夹脊穴对晚期消化系统肿瘤患者免疫指标的影响[J].山东中医杂志，2008，27（1）：35-36.

[8] 魏海，吴焕淦，裴建.肿瘤康复与针灸治疗[J].中国临床康复，2002，6（23）：3599-3600.

[9] 李昕.针灸治疗恶性肿瘤化疗致白细胞减少症36例临床分析[J].中国当代医药，2009，16（24）：142-143.

[10] 张海燕，刘忠锦，冯化杰.电针对阿尔茨海默病大鼠海马PKC和GDNF表达的影响[J].中国当代医药，2013， 20（7）：20-21.

[11] 裴建，魏海，刘志丹.艾灸大椎对荷瘤小鼠脑皮质白介素（IL）-1B、IL-2、IL-6 mRNA及蛋白表达的影响[J].针刺研究，2010，35（8）：249-243.

（收稿日期：2013-12-10 本文编辑：袁 成）

本研究采用单侧右腋皮下接种H22肿瘤细胞复制荷瘤小鼠模型，并分别施以化疗药物、中药制剂及药物与针刺疗法联合应用等治疗，结果显示，针刺大椎穴组肿瘤抑制率为9.90%，与模型组比较，差异有统计学意义，说明针刺对于恶性肿瘤具有一定的抑制作用。同时，针灸在与化疗药物氟尿嘧啶和益气解毒方联合应用时，均取得了较好的疗效，尤其是与益气解毒方联用时，取得了较单一疗法更高的肿瘤抑制率。联用组荷瘤小鼠的一般生存状态较模型组及单一疗法组为优，说明针灸与其他中西药物疗法间或存在协同作用，但其作用机制尚有待于进一步研究。

[参考文献]

[1] 李海燕，裴建，刘志丹.针灸对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖及Stat5-Foxp3通路影响[J].上海针灸杂志，2010，29（3）：190-193.

[2] 曾健球.观察针刺配合中药治疗ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌的临床疗效[J].中医临床研究，2012，4（23）：46-47.

[3] 曹治云，陈旭征，胡海霞.5-FU联合胸腺肽对H22细胞皮下移植瘤小鼠免疫功能的影响[J].现代肿瘤医学，2011， 19（11）：2165-2167.

[4] 成泽东，陈以国.针刺联合紫杉醇对Lewis肺癌小鼠一般状态及抑瘤率影响的实验研究[J].中国中医药信息杂志，2008，15（1）：24-25.

[5] 谢燕.针刺镇痛的研究进展[J].中国社区医师·医学专业，2011，13（26）：12-13.

[6] 涂铭珊，田菲.温针灸对肺癌患者免疫功能的影响[J].四川中医，2013，31（8）：151-152.

[7] 李海强.针刺夹脊穴对晚期消化系统肿瘤患者免疫指标的影响[J].山东中医杂志，2008，27（1）：35-36.

[8] 魏海，吴焕淦，裴建.肿瘤康复与针灸治疗[J].中国临床康复，2002，6（23）：3599-3600.

[9] 李昕.针灸治疗恶性肿瘤化疗致白细胞减少症36例临床分析[J].中国当代医药，2009，16（24）：142-143.

[10] 张海燕，刘忠锦，冯化杰.电针对阿尔茨海默病大鼠海马PKC和GDNF表达的影响[J].中国当代医药，2013， 20（7）：20-21.

[11] 裴建，魏海，刘志丹.艾灸大椎对荷瘤小鼠脑皮质白介素（IL）-1B、IL-2、IL-6 mRNA及蛋白表达的影响[J].针刺研究，2010，35（8）：249-243.

（收稿日期：2013-12-10 本文编辑：袁 成）

本研究采用单侧右腋皮下接种H22肿瘤细胞复制荷瘤小鼠模型，并分别施以化疗药物、中药制剂及药物与针刺疗法联合应用等治疗，结果显示，针刺大椎穴组肿瘤抑制率为9.90%，与模型组比较，差异有统计学意义，说明针刺对于恶性肿瘤具有一定的抑制作用。同时，针灸在与化疗药物氟尿嘧啶和益气解毒方联合应用时，均取得了较好的疗效，尤其是与益气解毒方联用时，取得了较单一疗法更高的肿瘤抑制率。联用组荷瘤小鼠的一般生存状态较模型组及单一疗法组为优，说明针灸与其他中西药物疗法间或存在协同作用，但其作用机制尚有待于进一步研究。

[参考文献]

[1] 李海燕，裴建，刘志丹.针灸对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖及Stat5-Foxp3通路影响[J].上海针灸杂志，2010，29（3）：190-193.

[2] 曾健球.观察针刺配合中药治疗ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌的临床疗效[J].中医临床研究，2012，4（23）：46-47.

[3] 曹治云，陈旭征，胡海霞.5-FU联合胸腺肽对H22细胞皮下移植瘤小鼠免疫功能的影响[J].现代肿瘤医学，2011， 19（11）：2165-2167.

[4] 成泽东，陈以国.针刺联合紫杉醇对Lewis肺癌小鼠一般状态及抑瘤率影响的实验研究[J].中国中医药信息杂志，2008，15（1）：24-25.

[5] 谢燕.针刺镇痛的研究进展[J].中国社区医师·医学专业，2011，13（26）：12-13.

[6] 涂铭珊，田菲.温针灸对肺癌患者免疫功能的影响[J].四川中医，2013，31（8）：151-152.

[7] 李海强.针刺夹脊穴对晚期消化系统肿瘤患者免疫指标的影响[J].山东中医杂志，2008，27（1）：35-36.

[8] 魏海，吴焕淦，裴建.肿瘤康复与针灸治疗[J].中国临床康复，2002，6（23）：3599-3600.

[9] 李昕.针灸治疗恶性肿瘤化疗致白细胞减少症36例临床分析[J].中国当代医药，2009，16（24）：142-143.

[10] 张海燕，刘忠锦，冯化杰.电针对阿尔茨海默病大鼠海马PKC和GDNF表达的影响[J].中国当代医药，2013， 20（7）：20-21.

[11] 裴建，魏海，刘志丹.艾灸大椎对荷瘤小鼠脑皮质白介素（IL）-1B、IL-2、IL-6 mRNA及蛋白表达的影响[J].针刺研究，2010，35（8）：249-243.

（收稿日期：2013-12-10 本文编辑：袁 成）